用于肺部疾病诊断的标志物、试剂、试剂盒和检测系统的制作方法

本发明涉及生物，特别是涉及一种用于肺部疾病诊断的标志物、试剂、试剂盒和检测系统。

背景技术：

1、肺癌的早期发现是降低致死率的关键，ct的广泛应用使目前无临床症状的肺结节检出明显增多，对其良恶性的鉴别成为难点和关键，然而，单纯通过影像学判断结节良恶性非常困难。

2、液态活检是指通过体液对癌症等疾病做出诊断，具备取样简单、可重复性、无放射性及创伤性等优势。在精准医学时代，液态活检将是肺结节良恶性鉴别诊断的手段之一。液体活检对象主要包括：循环肿瘤dna(ctdna)、循环肿瘤细胞(ctc)和外泌体(exosomes)。但由于ctc及ctdna在血液中含量低，收集纯化方法复杂，目前存在一定的弊端，而外泌体作为新兴的液体活检靶标正逐步成为新的检测对象。

3、虽然已经有采用外泌体mirna作为疾病诊断的生物标志物，但外泌体mirna用于肺结节良恶性鉴别时，准确性较差。

技术实现思路

1、基于此，有必要针对传统的外泌体mirna作为标志物在肺结节良恶性时准确性较差的问题，提供一种用于诊断肺部疾病的标志物，该标志物用于检测肺结节良恶性时准确性高。

2、此外，还提供了一种上述标志物在制备肺部疾病的检测产品中的应用、肺部疾病的检测试剂、用于检测肺部疾病的试剂盒和检测系统。

3、一种用于肺部疾病诊断的标志物，所述标志物为mirna，所述mirna包括mir-143-3p、mir-103a-3p、mir-92a-3p、mir-223-3p、mir-363-3p、mir-199b-3p、mir-16-5p、mir-155-5p、mir-122-5p、mir-483-5p、let-7c-5p、mir-486-5p、mir-192-5p、mir-20a-5p、mir-221-3p、mir-21-5p和mir-30e-5p中的至少一种，通过检测所述mirna的表达情况诊断肺部疾病。

4、在其中一个实施例中，所述mirna为外泌体mirna。

5、在其中一个实施例中，所述标志物至少满足以下一个特征：

6、(1)所述标志物能够用于肺癌辅助诊断，以区分肺癌与肺良性疾病、其他癌症、其他良性疾病、健康人；

7、(2)所述标志物能够用于肺结节良恶性鉴别诊断，以区分肺恶性结节和良性结节；

8、(3)所述标志物能够用于肺癌患者疗效诊断，以评估治疗效果；

9、(4)所述标志物能够用于肺癌复发监控诊断，评估复发风险。

10、在其中一个实施例中，所述mirna包括mir-143-3p、mir-103a-3p、mir-92a-3p、mir-223-3p、mir-363-3p、mir-199b-3p、mir-16-5p、mir-155-5p、mir-122-5p、mir-483-5p、let-7c-5p、mir-486-5p、mir-192-5p、mir-20a-5p、mir-221-3p、mir-21-5p和mir-30e-5p中两种或两种以上的组合。

11、上述的用于肺部疾病诊断的标志物在制备通过如下方法进行肺部疾病诊断产品中的应用，所述方法包括以下步骤：测量样本中上述标志物的表达水平；及

12、根据所述标志物的表达水平诊断肺部疾病。

13、在其中一个实施例中，所述方法还包括以下步骤：富集所述样本的总外泌体；和/或，富集临床样本的具有肺组织特异性的外泌体。

14、在其中一个实施例中，所述具有肺组织特异性的外泌体为膜表达egfr蛋白的外泌体。

15、在其中一个实施例中，所述应用包括以下任一项应用：

16、1)在制备用于肺部疾病诊断的mirna标志物检测试剂中的应用；

17、2)在制备用于肺部疾病诊断的试剂盒中的应用；

18、3)在制备用于肺部疾病诊断的系统中的应用。

19、在其中一个实施例中，所述肺部疾病诊断包括以下诊断中的至少一种：

20、1)肺癌辅助诊断，所述肺癌辅助诊断用于区分肺癌与肺良性疾病、其他癌症、其他良性疾病、健康人；

21、2)肺结节良恶性鉴别诊断，所述肺结节良恶性鉴别诊断用于区分肺恶性结节和良性结节；

22、3)肺癌患者疗效评估诊断，所述肺癌患者疗效评估诊断用于评估治疗效果；

23、4)肺癌复发监控诊断，所述肺癌复发监控诊断用于评估复发风险。

24、在其中一个实施例中，所述方法适用的样本包括体液样本和/或组织样本。

25、一种肺部疾病的检测试剂，包括用于检测外泌体中的mirna表达情况的试剂，所述mirna包括mir-143-3p、mir-103a-3p、mir-92a-3p、mir-223-3p、mir-363-3p、mir-199b-3p、mir-16-5p、mir-155-5p、mir-122-5p、mir-483-5p、let-7c-5p、mir-486-5p、mir-192-5p、mir-20a-5p、mir-221-3p、mir-21-5p和mir-30e-5p中的至少一种。

26、在其中一个实施例中，所述用于检测外泌体中的mirna含量的试剂包括检测引物对，所述检测引物对包括以下引物对中的至少一组：用于检测mir-143-3p表达量的mir-143-3p引物对；用于检测mir-103a-3p表达量的mir-103a-3p引物对；用于检测mir-92a-3p表达量的mir-92a-3p引物对；用于检测mir-223-3p表达量的mir-223-3p引物对；用于检测mir-363-3p表达量的mir-363-3p引物对；用于检测mir-199b-3p表达量的mir-199b-3p引物对；用于检测mir-16-5p表达量的mir-16-5p引物对；用于检测mir-155-5p表达量的mir-155-5p引物对；用于检测mir-122-5p表达量的mir-122-5p引物对；用于检测mir-483-5p表达量的mir-483-5p引物对；用于检测let-7c-5p表达量的let-7c-5p引物对；用于检测mir-486-5p表达量的mir-486-5p引物对；用于检测mir-192-5p表达量的mir-192-5p引物对；用于检测mir-20a-5p表达量的mir-20a-5p引物对；用于检测mir-221-3p表达量的mir-221-3p引物对；用于检测mir-21-5p表达量的mir-21-5p引物对；及用于检测mir-30e-5p表达量的mir-30e-5p引物对。

27、在其中一个实施例中，所述mir-143-3p引物对的核苷酸序列如seq id no：1～2所示；所述mir-103a-3p引物对的核苷酸序列如seq id no：3～4所示；所述mir-92a-3p引物对的核苷酸序列如seq id no：5～6所示；所述mir-223-3p引物对的核苷酸序列如seq id no：7～8所示；所述mir-363-3p引物对的核苷酸序列如seq id no：9～10所示；所述mir-199b-3p引物对的核苷酸序列如seq id no：11～12所示；所述mir-16-5p引物对的核苷酸序列如seq id no：13～14所示；所述mir-155-5p引物对的核苷酸序列如seq id no：15～16所示；所述mir-122-5p引物对的核苷酸序列如seq id no：17～18所示；所述mir-483-5p引物对的核苷酸序列如seq id no：19～20所示；所述let-7c-5p引物对的核苷酸序列如seq id no：21～22所示；所述mir-486-5p引物对的核苷酸序列如seq id no：23～24所示；所述mir-143-3p引物对的核苷酸序列如seq id no：25～26所示；所述mir-20a-5p引物对的核苷酸序列如seq id no：27～28所示；所述mir-221-3p引物对的核苷酸序列如seq id no：29～30所示；所述mir-21-5p引物对的核苷酸序列如seq id no：31～32所示；所述mir-30e-5p引物对的核苷酸序列如seq id no：33～34所示。

28、一种用于检测肺部疾病的试剂盒，包括上述的肺部疾病的检测试剂。

29、在其中一个实施例中，所述试剂盒还包括rna提取试剂、质控品和pcr反应试剂中的至少一种。

30、一种肺部疾病的检测系统，包括检测模块，所述检测模块包括上述的肺部疾病的检测试剂。

31、在其中一个实施例中，还包括预处理模块，所述预处理模块用于从样品中富集mirna。

32、在其中一个实施例中，所述预处理模块还包括外泌体富集试剂，所述外泌体富集试剂用于从样品中富集总外泌体和/或具有肺组织特异性的外泌体。

33、在其中一个实施例中，所述肺组织特异性的外泌体为外泌体膜表达egfr蛋白的外泌体。

34、在其中一个实施例中，还包括数据处理模块，所述数据处理模块用于将来所述样品的mirna表达量转换为诊断结果。