一种PseudodestruxinB的制备方法与流程

一种pseudodestruxinb的制备方法
技术领域
1.本发明涉及有机化学合成技术领域，具体为一种pseudodestruxin b的制备方法。


背景技术：

2.缩酚酸肽是一类由羟基酸和氨基酸以酯键和酰胺键交替连接构成的寡聚物，其中以环状结构最为常见。缩酚酸肽类化合物表现出多样化的生物学活性，如抗肿瘤、抗病毒、杀虫及抗血栓等，具有非常广泛的应用前景。缩酚酸肽类化合物的来源较为广泛，先后在海洋软体动物、腔肠动物、海绵及海鞘中都有发现，微生物也是这类化合物的重要来源。
3.pseudodestruxin b是对枯草芽孢杆菌具有抗细菌活性的一种环六缩酚酸肽化合物，pseudodestruxin b首次分离是由david malloch课题组在2001年从coprophilous真菌nigrosabulumglobosum的培养基中分离得到(j.nat.prod.2001，64(5)，555
–
558)，而自pseudodestruxin b分离报道以来，由于pseudodestruxin b在自然界的丰度较低，没有pseudodestruxin b的合成方案，不利于研究pseudodestruxin b的生物活性。


技术实现要素：

4.基于此，有必要提供一种pseudodestruxin b的制备方法，旨在解决现有技术中没有pseudodestruxin b的合成方案的技术问题。
5.为实现上述目的，本发明提供一种技术方案：
6.一种pseudodestruxin b的制备方法，其制备方法包括仲胺关环合成方法和伯胺关环合成方法，其中，所述仲胺关环合成方法的步骤包括：
7.将树脂与fmoc-n-甲基-l-缬氨酸连接，得到第一树脂；
8.将所述第一树脂上的氨基酸端与fmoc-l-苯丙氨酸连接，得到第二树脂；
9.将所述第二树脂上的氨基酸端依次与fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸、fmoc-β-丙氨酸和fmoc-n-甲基-l-亮氨酸连接，得到链状多肽化合物；
10.将所述链状多肽化合物脱除fmoc保护，经含氟溶剂处理，再进行环化反应，制得所述pseudodestruxin b。
11.优选地，采用连续流法进行环化反应。
12.优选地，将树脂与fmoc-n-甲基-l-缬氨酸连接的具体步骤包括：
13.将树脂溶胀于第一溶剂中，并将溶胀于所述第一溶剂的树脂用第一洗涤液洗涤，得到溶胀后的树脂；
14.将所述fmoc-n-甲基-l-缬氨酸和二异丙基乙基胺溶于第二溶剂中，得到第一混合物；
15.将所述第一混合物加入溶胀后的所述树脂中反应，并用不活泼气体鼓泡，反应结束，树脂与fmoc-n-甲基-l-缬氨酸连接，得到第一树脂。
16.优选地，将所述第一树脂上的氨基酸端与fmoc-l-苯丙氨酸连接的具体步骤包括：
17.向所述第一树脂中加入封端剂反应，反应结束后，得到封端后的第一树脂；
18.将所述封端后的第一树脂用4-甲基哌啶溶液处理，得到第三树脂；
19.将fmoc-l-苯丙氨酸、hatu和二异丙基乙基胺溶解于第三溶剂中，得到第二混合物；
20.向所述第二混合物中加入第三树脂反应，反应结束，得到第二树脂。
21.优选地，得到链状多肽化合物的具体步骤包括：
22.将所述第二树脂依次与所述fmoc-l-脯氨酸、所述l-闪白酸、所述fmoc-β-丙氨酸和所述fmoc-n-甲基-l-亮氨酸反应，反应结束，得到链状多肽化合物。
23.优选地，将所述链状多肽化合物脱除fmoc保护的具体步骤包括：
24.向所述链状多肽化合物中加入4-甲基哌啶溶液处理，得到第四树脂。
25.优选地，含氟溶剂处理的具体步骤包括：
26.向所述第四树脂中加入含氟溶剂/二氯甲烷混合液反应，反应结束，得到链状六肽酸粗产品。
27.优选地，采用连续流法进行环化反应的具体步骤包括：
28.将所述链状六肽酸粗产品溶于第四溶剂中，得到第三混合物；
29.将所述第三混合物和偶联试剂溶液分别通过注射泵泵入连续流反应器中进行环化反应，反应结束，即得所述pseudodestruxin b。
30.优选地，所述偶联试剂溶液中的缩合试剂包括hatu。
31.优选地，其特征在于，所述树脂和所述fmoc-n-甲基-l-缬氨酸的摩尔比为1:1.1。
32.本发明的有益效果：
33.本发制备pseudodestruxin b的制备方法包括仲胺关环合成方法和伯胺关环合成方法，其中，仲胺关环合成方法通过在树脂上依次连接fmoc-n-甲基-l-缬氨酸、fmoc-l-苯丙氨酸、fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸、fmoc-β-丙氨酸和fmoc-n-甲基-l-亮氨酸，再脱除fmoc保护，经含氟溶剂处理，将树脂切除，制得pseudodestruxin b；伯胺关环合成方法通过在树脂上依次连接fmoc-n-甲基-l-亮氨酸、fmoc-n-甲基-l-缬氨酸、fmoc-l-苯丙氨酸、fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸和fmoc-β-丙氨酸连接再脱除fmoc保护，经含氟溶剂处理，将树脂切除，制得pseudodestruxin b。本发明提供了两种pseudodestruxin b的合成方案，有利于研究pseudodestruxin b的生物活性。
附图说明
34.图1为管式微反应器的结构示意图；
35.图2为pseudodestruxin b核磁共振氢谱谱图；
36.图3为pseudodestruxin b核磁共振碳谱谱图；
37.图4为伯胺关环合成方法中关环位置示意图；
38.图5为仲胺关环合成方法中关环位置示意图。
39.其中，110.第一微量注射泵；120.第二微量注射泵；200.t型混合器；300.微管道；400.出样口；500.收集瓶。
具体实施方式
40.为了更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发
明作进一步说明。
41.实施例中，所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
42.一种pseudodestruxin b的制备方法，其步骤包括：
43.s100.将树脂与fmoc-n-甲基-l-缬氨酸连接。
44.其制备方法包括仲胺关环合成方法和伯胺关环合成方法，其中，仲胺关环合成方法的具体步骤包括：
45.将树脂溶胀于第一溶剂中，并将溶胀于第一溶剂的树脂用第一洗涤液洗涤，得到溶胀后的树脂；更为具体地，第一溶剂包括二氯甲烷；溶胀时间为0.5～2h；第一洗涤液为二甲基甲酰胺和二氯甲烷；
46.将fmoc-n-甲基-l-缬氨酸和二异丙基乙基胺溶于第二溶剂中，得到第一混合物；第二溶剂为二甲基甲酰胺；
47.将第一混合物加入溶胀后的树脂中反应，反应时间为2～5h，并用不活泼气体鼓泡，反应结束，树脂与fmoc-n-甲基-l-缬氨酸连接，得到第一树脂，树脂和fmoc-n-甲基-l-缬氨酸的摩尔比为1：(1.1～5)。
48.具体地，树脂包括2-ctc树脂、rinkamide-ps树脂、rinkamide-peg树脂和cm树脂中的任意一种。
49.s200.将第一树脂上的氨基酸端与fmoc-l-苯丙氨酸连接。
50.其具体步骤包括：
51.向第一树脂中加入封端剂反应，反应时间为0.1～1h，反应结束后，得到封端后的第一树脂；封端剂包括二氯甲烷/二异丙基乙基胺/甲醇的混合液，体积比为(6～8)：(5～10)：(0.5～2)。
52.将封端后的第一树脂用4-甲基哌啶溶液处理0.1～1h，以脱除fmoc保护，得到第三树脂；其中，4-甲基哌啶溶液中4-甲基哌啶的质量百分比为5～50％，溶剂为二甲基甲酰胺溶液。
53.将fmoc-l-苯丙氨酸、hatu{2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n，n，n'，n'-四甲基脲六氟磷酸酯}和二异丙基乙基胺溶解于第三溶剂中，得到第二混合物；第三溶剂包括二甲基甲酰胺；
54.向第二混合物中加入第三树脂中反应，反应时间为1～12h，反应结束，得到第二树脂。
55.s300.将第二树脂上的氨基酸端依次与fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸、fmoc-β-丙氨酸和fmoc-n-甲基-l-亮氨酸连接，得到链状多肽化合物。具体地，第二树脂与fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸、fmoc-β-丙氨酸和fmoc-n-甲基-l-亮氨酸的摩尔比为1：(1.5～5)：(1.5～5)：(1.5～5)：(1.5～5)。
56.其具体步骤包括：
57.将第二树脂依次与fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸、fmoc-β-丙氨酸和fmoc-n-甲基-l-亮氨酸反应，具体地，第二树脂依次与fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸、fmoc-β-丙氨酸和fmoc-n-甲基-l-亮氨酸的反应均按照缩合循环进行，参考步骤s200，即每一个缩合循环包括缩合以及脱除fmoc保护两部分。其中l-闪白酸无需脱除fmoc保护。
58.待所有反应结束，得到链状多肽化合物。
59.s400.将链状多肽化合物脱除fmoc保护，经含氟溶剂处理，并采用连续流法进行环化反应，制得pseudodestruxin b。具体地，连续流法能有效缩短反应时间。
60.具体地，含氟溶剂包括六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙酸/水/硅氢混合试剂中的任意一种，其中，三氟乙酸/水/硅氢混合试剂中三氟乙酸/水/硅氢的体积比为
61.将链状多肽化合物脱除fmoc保护的具体步骤包括：
62.向链状多肽化合物中加入4-甲基哌啶溶液处理，得到第四树脂，其中，4-甲基哌啶溶液中4-甲基哌啶的质量百分比为5～50％，溶剂为二甲基甲酰胺溶液，加入4-甲基哌啶溶液以脱除fmoc保护。
63.含氟溶剂处理的具体步骤包括：
64.向第四树脂中加入含氟溶剂/二氯甲烷混合液反应，以切除第四树脂上的树脂，反应结束，得到链状六肽酸粗产品。其中，含氟溶剂/二氯甲烷的体积比为(1～10):20。
65.采用连续流法进行环化反应的具体步骤包括：
66.将链状六肽酸粗产品溶于第四溶剂中，配成0.1～10mmol/l的链状多肽溶液，得到第三混合物。
67.将第三混合物和偶联试剂溶液按体积比1：(1.1～3)分别通过注射泵泵入连续流反应器中进行环化反应，反应时间为1～20min，反应温度为室温，反应结束，即得pseudodestruxin b。具体地，泵入速度为10～1000μl/min。具体地，连续流反应器为管式微反应器。
68.具体的，其中一个实施例的合成pseudodestruxin b的路线如下：
[0069][0070]
其中，为2-ctc树脂，为第一树脂，为第二树脂，为链状多肽化合物，为pseudodestruxin b。
[0071]
伯胺关环合成方法的具体步骤包括：
[0072]
将树脂溶胀于第一溶剂中，并将溶胀于第一溶剂的树脂用第一洗涤液洗涤，得到溶胀后的树脂；更为具体地，第一溶剂包括二氯甲烷；溶胀时间为0.5～2h；第一洗涤液为二甲基甲酰胺和二氯甲烷；
[0073]
将fmoc-n-甲基-l-亮氨酸和二异丙基乙基胺溶于第二溶剂中，得到第四混合物；第二溶剂为二甲基甲酰胺；
[0074]
将第四混合物加入溶胀后的树脂中反应，反应时间为2～5h，并用不活泼气体鼓泡，反应结束，树脂与fmoc-n-甲基-l-亮氨酸连接，得到第五树脂，树脂和fmoc-n-甲基-l-亮氨酸的摩尔比为1：(1.1～5)。
[0075]
具体地，树脂包括2-ctc树脂、rinkamide-ps树脂、rinkamide-peg树脂和cm树脂中的任意一种。
[0076]
s200.将第五树脂上的氨基酸端fmoc-n-甲基-l-缬氨酸连接。
[0077]
其具体步骤包括：
[0078]
向第五树脂中加入封端剂反应，反应时间为0.1～1h，反应结束后，得到封端后的第五树脂；封端剂包括二氯甲烷/二异丙基乙基胺/甲醇的混合液，体积比为(6～8)：(5～10)：(0.5～2)。
[0079]
将封端后的第五树脂用4-甲基哌啶溶液处理0.1～1h，以脱除fmoc保护，得到第六树脂；其中，4-甲基哌啶溶液中4-甲基哌啶的质量百分比为5～50％，溶剂为二甲基甲酰胺溶液。
[0080]
将fmoc-n-甲基-l-缬氨酸、hatu{2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n，n，n'，n'-四甲基脲六氟磷酸酯}和二异丙基乙基胺溶解于第三溶剂中，得到第五混合物；第三溶剂包括二甲基甲酰胺；
[0081]
向第五混合物中加入第六树脂反应，反应时间为1～12h，反应结束，得到第七树脂。
[0082]
s300.将第七树脂上的氨基酸端依次与fmoc-l-苯丙氨酸、fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸和fmoc-β-丙氨酸连接，得到链状多肽化合物。具体地，第七树脂上与fmoc-l-苯丙氨酸、fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸和fmoc-β-丙氨酸的摩尔比为1：(1.5～5)：(1.5～5)：(1.5～5)：(1.5～5)。
[0083]
其具体步骤包括：
[0084]
将第七树脂依次与fmoc-l-苯丙氨酸、fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸和fmoc-β-丙氨酸反应，具体地，第七树脂依次与fmoc-l-苯丙氨酸、fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸和fmoc-β-丙氨酸的反应均按照缩合循环进行，参考上述步骤s200，即每一个缩合循环包括缩合以及脱除fmoc保护两部分，其中l-闪白酸无需脱除fmoc保护。
[0085]
待所有反应结束，得到链状多肽化合物。
[0086]
s400.将链状多肽化合物脱除fmoc保护，经含氟溶剂处理，并采用连续流法进行环化反应，制得pseudodestruxin b。具体地，连续流法能有效缩短反应时间。
[0087]
具体地，含氟溶剂包括六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙酸/水/硅氢混合试剂中的任意一种，其中，三氟乙酸/水/硅氢混合试剂中三氟乙酸/水/硅氢的体积比为
[0088]
将链状多肽化合物脱除fmoc保护的具体步骤包括：
[0089]
向链状多肽化合物中加入4-甲基哌啶溶液处理，得到第八树脂，其中，4-甲基哌啶溶液中4-甲基哌啶的质量百分比为5～50％，溶剂为二甲基甲酰胺溶液，加入4-甲基哌啶溶液以脱除fmoc保护。
[0090]
含氟溶剂处理的具体步骤包括：
[0091]
向第四树脂中加入含氟溶剂/二氯甲烷混合液反应，以切除第八树脂上的树脂，反应结束，得到链状六肽酸粗产品。其中，含氟溶剂/二氯甲烷的体积比为(1～10):20。
[0092]
采用连续流法进行环化反应的具体步骤包括：
[0093]
将链状六肽酸粗产品溶于第四溶剂中，配成0.1～10mmol/l的链状多肽溶液，得到第六混合物。
[0094]
将第六混合物和偶联试剂溶液按体积比1：(1.1～3)分别通过注射泵泵入连续流反应器中进行环化反应，反应时间为1～20min，反应温度为室温，反应结束，即得pseudodestruxin b。具体地，泵入速度为10～1000μl/min。具体地，连续流反应器为管式微反应器。
[0095]
作为优选地，偶联试剂溶液中的缩合试剂包括hatu，碱包括dipea(n，n-二异丙基乙胺)，溶剂包括dmf。
[0096]
在一实施例中，第四溶剂包括dmf(n，n-二甲基甲酰胺)，偶联试剂溶液的制备步骤包括：
[0097]
将hatu用dmf配制成浓度为1～5mmol/l的hatu溶液，将dipea用dmf配制成4～20mmol/l的dipea溶液，hatu溶液和dipea溶液按照体积比为1：(1～3)配置成偶联试剂溶液。
[0098]
在一实施例中，第四溶剂包括mecn(乙腈)，偶联试剂溶液的制备步骤包括：
[0099]
将tcfh(四甲基氯代脲六氟磷酸酯)用mecn配制成浓度为1～5mmol/l的tcfh溶液，将nmi(n-甲基咪唑)用mecn配制成4～20mmol/l的nmi溶液，tcfh溶液和nmi溶液按照体积比为1：(1～3)配置成偶联试剂溶液。
[0100]
在一实施例中，第四溶剂包括dmf(n，n-二甲基甲酰胺)，偶联试剂溶液的制备步骤包括：
[0101]
将pyaop((7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐)用dmf配制成浓度为1～5mmol/l的pyaop溶液，将dipea用dmf配制成4～20mmol/l的dipea溶液，pyaop溶液和dipea溶液按照体积比为1：(1～3)配置成偶联试剂溶液。
[0102]
更为具体地，管式微反应器包括第一微量注射泵110、第二微量注射泵120、t型混合器200、微管道300、出样口400和收集瓶500，第一微量注射泵110、第二微量注射泵120、t型混合器200、微管道300、出样口400和收集瓶500依次连接，第三混合物和偶联试剂溶液分别由第一微量注射泵110和第二微量注射泵120泵入微管道300内反应，产物经出样口400进入收集瓶500内，微管道300为材质是ptfe(聚四氟乙烯)、peek(聚醚醚酮)、pe(聚乙烯)或pp(聚丙烯)塑料的管道，内径为0.8mm，长为1m。
[0103]
值得说明的是，本发明中的fmoc为芴甲氧羰基。
[0104]
实施例1
[0105]
连续流法制备pseudodestruxin b
[0106]
s100.将1.0g 2-ctc树脂(0.55mmol)置于50ml固相多肽合成管中，并向多肽合成管中加入于20ml二氯甲烷，溶胀30min，并将溶胀于二氯甲烷的2-ctc树脂用二甲基甲酰胺(3
×
10ml)和二氯甲烷(3
×
10ml)交替洗涤，得到溶胀后的2-ctc树脂。
[0107]
将0.389gfmoc-n-甲基-l-缬氨酸(1.1mmol)和0.479ml二异丙基乙基胺(2.75mmol)溶于10ml二甲基甲酰胺中，得到第一混合物。
[0108]
将第一混合物加入溶胀后的2-ctc树脂中反应，反应时间为4h，并用氮气鼓泡，反应结束，2-ctc树脂与fmoc-n-甲基-l-缬氨酸连接，得到第一树脂。
[0109]
s200.先用二甲基甲酰胺(3
×
10ml)和二氯甲烷(3
×
10ml)洗涤交替洗涤第一树脂，并向第一树脂中加入封端剂反应，用氮气鼓泡，反应时间为30min，反应结束后，得到封端后的第一树脂；封端剂包括二氯甲烷/二异丙基乙基胺/甲醇的混合液，体积分别为8ml/1.5ml/5ml。
[0110]
先将封端后的第一树脂用二甲基甲酰胺(3
×
10ml)和二氧甲烷(3
×
10ml)交替洗涤，再将第二树脂用10ml 4-甲基哌啶溶液处理20min，再用二甲基甲酰胺(3
×
10ml)和二氯甲烷(3
×
10ml)交替洗涤，得到第三树脂；其中，4-甲基哌啶溶液中4-甲基哌啶的质量百分比为20％，溶剂为二甲基甲酰胺溶液。
[0111]
将0.583gfmoc-l-苯丙氨酸(1.65mmol)、0.628ghatu(1.65mmol)和0.426g二异丙基乙基胺(3.30mmol)溶解于10ml二甲基甲酰胺中，得到第二混合物。
[0112]
向第二混合物中加入第三树脂反应，用氮气鼓泡，反应时间为2h，反应结束，去除溶剂，溶质部分用二甲基甲酰胺(3
×
10ml)和二氯甲烷(3x10ml)交替洗涤，得到第二树脂。
[0113]
s300.将第二树脂依次与0.557g fmoc-l-脯氨酸(1.65mmol)、0.218g l-闪白酸(1.65mmol)、0.514gfmoc-β-丙氨酸(1.65mmol)和0.614g fmoc-n-甲基-l-亮氨酸(1.65mmol)反应。
[0114]
其中，参考上述步骤s200，即每一个缩合循环包括缩合以及脱除fmoc保护两部分，其中l-闪白酸无需脱除fmoc保护。
[0115]
反应结束，得到链状多肽化合物。
[0116]
向链状多肽化合物中加入10ml4-甲基哌啶溶液处理20min，得到第四树脂。其中，4-甲基哌啶溶液中4-甲基哌啶的质量百分比为20％，溶剂为二甲基甲酰胺溶液。
[0117]
处理结束后，第四树脂用二甲基甲酰胺(3
×
10ml)和二氯甲烷(3x10ml)交替洗涤，洗涤结束，将第四树脂从合成管中转移到圆底烧瓶中，向第四树脂中加入六氟异丙醇/二氯甲烷混合液反应，反应时间为2h，反应结束，过滤除去固体部分，溶液用氮气吹干，得到链状六肽酸粗产品。其中，六氟异丙醇/二氯甲烷的体积分别为为5ml和20ml。
[0118]
将34.4mg链状六肽酸粗产品(0.05mmol)溶于mecn中，配成2mmol/l的链状多肽溶液，得到第三混合物；
[0119]
将第三混合物和偶联试剂溶液按体积比1：2分别通过第一微量注射泵110和第二微量注射泵120泵入微管道300内进行环化反应，反应时间为10min，反应温度为室温，泵入速度为50μl/min反应结束，即得pseudodestruxin b(ee：90％)。
[0120]
具体地，偶联试剂溶液的制备步骤包括：
[0121]
将21mg tcfh(0.075mmol)用mecn配制成浓度为3mmol/l的tcfh溶液，将12.3mg nmi(0.150mmol)用mecn配制成6mmol/l的nmi溶液，tcfh溶液和nmi溶液按照体积比为1：1配置成偶联试剂溶液。
[0122]
产物pseudodestruxin b的核磁共振氢谱如图2所示，核磁共振碳谱如图3所示。
[0123]
实施例2
[0124]
常规固相法制备pseudodestruxin b
[0125]
其他步骤均与实施例1相同，不同部分如下：
[0126]
将34.4mgmg链状六肽酸粗产品(0.05mmol)用10mlmecn溶解，待冷却至0℃时，加入12.3mgnmi(0.15mmol)和21mgtcfh(0.075mmol)进行环化反应，在室温条件下反应18h。减压
旋蒸除去溶剂，硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷＝1/25)得到白色固体pseudodestruxin b(ee：81％)。
[0127]
实施例3
[0128]
连续流法制备pseudodestruxin b
[0129]
其他步骤均与实施例1相同，不同部分如下：
[0130]
将34.4mg链状六肽酸粗产品(0.05mmol)溶于dmf中，配成2mmol/l的链状多肽溶液，得到第三混合物；
[0131]
将第三混合物和偶联试剂溶液分别通过第一微量注射泵110和第二微量注射泵120泵入微管道300内进行环化反应，反应时间为10min，反应温度为室温，泵入速度为50μl/min反应结束，即得pseudodestruxin b(ee：99％)。
[0132]
偶联试剂溶液的制备步骤包括：
[0133]
将hatu用dmf配制成浓度为2mmol/l的hatu溶液，将dipea用dmf配制成4mmol/l的dipea溶液，hatu溶液和dipea溶液按照体积比为1：1配置成偶联试剂溶液。
[0134]
在制备pseudodestruxin b的反应中，关环的位置也很重要，本发明验证了两种关环方式，即伯胺关环合成方法和仲胺关环合成方法。
[0135]
其中，在仲胺关环合成方法中，树脂的连接顺序为：fmoc-n-甲基-l-缬氨酸、fmoc-l-苯丙氨酸、fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸、fmoc-β-丙氨酸和fmoc-n-甲基-l-亮氨酸。
[0136]
在伯胺关环合成方法中，树脂的连接顺序为：fmoc-n-甲基-l-亮氨酸、fmoc-n-甲基-l-缬氨酸、fmoc-l-苯丙氨酸、fmoc-l-脯氨酸、l-闪白酸和fmoc-β-丙氨酸。
[0137]
伯胺关环合成方法中关环位置示意图如图4所示，仲胺关环合成方法中关环位置示意图如图5所示。为研究关环位置对pseudodestruxin b收率的影响，现做如下实验，在没有指出的前提下，伯胺关环合成方法的反应步骤如实施例3所示，伯胺关环合成方法数据如表1所示，仲胺关环合成方法的反应步骤如实施例1所示，仲胺关环合成方法数据如表2所示。
[0138]
其中，伯胺关环合成方法的收率较高，除edc和t3p外的其他的缩合试剂的收率相当，连续流反应能明显提升反应的速率和收率。而在仲胺关环的情况中，仅tcfh缩合试剂体系能选择性得到目标天然产物，其余情况与伯胺类似，连续流反应均能明显提升反应的速率和收率。此外，对仲胺还进行了温度、溶剂、反应浓度、当量的研究，反应数据如表3所示，升温和降温对产物：异构体比无影响，而溶剂和反应浓度对收率也没有明显影响，tcfh条件下缩合试剂：碱对收率有明显影响，缩合试剂与碱的摩尔比值降低后收率明显降低。
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表1伯胺关环合成方法数据
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其中，表1中的摩尔比是指缩合试剂与链状六肽酸粗产品的摩尔值之比。
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表2仲胺关环合成方法数据
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其中，表2中的摩尔比是指缩合试剂与链状六肽酸粗产品的摩尔值之比。
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表3温度、溶剂对仲胺关环合成方法影响数据(连续流法)
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其中，表3中的缩合试剂：碱为缩合试剂与碱摩尔量之比。
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以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。