技术特征：
1.一种多能干细胞衍生内皮细胞外泌体hipsc-ec-exo的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将人诱导多能干细胞hipscs分化为内皮细胞ecs，再通过流式细胞术细胞分选收集同时表达血小板-内皮细胞粘附分子cd31和血管内皮钙粘蛋白cd144的细胞，获得纯化的hipsc-ecs；将hipsc-ecs在无血清培养基中培养46～50小时后收集细胞上清，并将该收集的细胞上清于250～350g转速下离心8～12分钟后去除残存的细胞；收集上清于1500～2500g转速条件下离心8～12分钟去除死细胞；收集上清于8000～12000g转速条件下离心25～35分钟去除细胞碎片；收集上清于95000～105000g转速条件下离心1.8～2.5小时后弃去上清，所得沉淀即为多能干细胞衍生内皮细胞外泌体hipsc-ec-exo。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将人诱导多能干细胞hipscs分化为内皮细胞ecs的步骤包括：用含y27632 mtesr的培养基传代hipscs，再用含chir99021、骨形态发生蛋白4和b27的培养基诱导分化，然后用含血管内皮生长因子和forskolin stem-pro34的培养基处理hipscs，可将hipscs分化为ecs。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述获得纯化的hipsc-ecs，在无血清培养基中维持。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述多能干细胞衍生内皮细胞外泌体沉淀，用pbs重悬后于-80℃保存或用于实验。5.一种由权利要求1所述制备方法制得的多能干细胞衍生内皮细胞外泌体hipsc-ec-exo。6.多能干细胞衍生内皮细胞外泌体hipsc-ec-exo在制备治疗或预防缺血性心脏病的干细胞衍生产品中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述缺血性心脏病包括：心绞痛、心肌梗死、缺血性心肌病、无症状性的心肌缺血。8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述hipsc-ec-exo可通过直接心肌注射给药。9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述hipsc-ec-exo通过增加心肌细胞atp和钙瞬变、减少乳酸脱氢酶的释放保护心肌细胞免受糖氧剥夺损伤。10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述hipsc-ec-exo通过维持心肌细胞的钙稳态，实现对缺血心肌的保护。
技术总结
本发明公开了一种多能干细胞衍生内皮细胞外泌体hiPSC-EC-Exo的制备方法，包括步骤：建立体外hiPSC-ECs分化体系后通过分步离心提取上清液中的外泌体。本发明还公开了多能干细胞衍生内皮细胞外泌体hiPSC-EC-Exo在制备治疗或预防缺血性心脏病的干细胞衍生产品中的应用。本发明的hiPSC-EC-Exo制备方法，能高效分离提取hiPSC-EC-Exo，并首次证明hiPSC-EC-Exo心肌注射可显著改善心梗小鼠的心肌收缩功能、血流动力学，还可减轻心梗后有害的左室重构，具有治疗缺血性心脏病的作用，可作为细胞治疗的替代方法，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。
技术研发人员：高崚 刘中民 李昊
受保护的技术使用者：上海市东方医院（同济大学附属东方医院）
技术研发日：2022.10.08
技术公布日：2022/12/12