一种抗皮肤衰老的五肽衍生肽段YS及其应用的制作方法

本发明涉及生物化学，尤其涉及一种抗皮肤衰老的五肽衍生肽段ys及其应用。

背景技术：

1、皮肤衰老是一个复杂的过程，主要是由于内源性和外源性的因素导致的。内源性的因素是指自然生理衰老，随着表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞生长缓慢，表皮成纤维细胞数量逐渐减少，合成胶原能力降低。同时由于蛋白酶释放增加，使得胶原降解增加，弹力纤维尽管含量没有减少，但是弹性纤维网发生卷曲、松弛、失去弹性，甚至消失，引起表皮层松弛并形成细小皱纹。同时纤维束的变粗也会使皱纹的深度加重。紫外辐射也会引起胶原纤维束的退化，使得皮肤弹性受损，进而使皱纹增加，同时紫外辐射会使弹力纤维变形，纤维增粗、扭转和分叉，日积月累会出现皮肤松弛和皱纹。

2、在皮肤抗衰老的研究中，主要集中在促进细胞分裂、增殖，促进胶原、弹性纤维的合成，保湿和修复皮肤屏障功能等。目前市场上的许多抗衰老药物和化妆品的作用是促进细胞分裂和增殖，加快表皮角质细胞脱落速度，刺激基底细胞分裂，在短期内改善皮肤外观。但是，由于正常的皮肤细胞有一定的寿命和分裂次数的限制，过度加速细胞分裂，使得每次细胞分裂的周期变短，反而会使得细胞寿命变短，加速衰老。因此通过增加皮肤细胞胶原蛋白的分泌量是改善皮肤外观的一种重要的值得期待的新的方向。

3、胶原蛋白在代谢的过程中会产生一些小肽片段，有些小肽片段如kttks(五肽)能够刺激成纤维细胞分泌胶原蛋白(a pentapeptide from typei procollagen promotesextracellular matrix production，the journal of biological chemistry，1993，vol.268(14)：9941-9944)。许多化妆品公司都对这些小分子多肽应用于化妆品非常感兴趣。然而这些小分子多肽是亲水性的，其透过皮肤的能力非常弱。已有一些研究者将这些小分子多肽的n末端用棕榈酰化，结果表明这些经过棕榈酰化的小分子多肽能够有效改善皮肤的性状(us2007/0099842a1)。即使是这样，其透皮吸收的效率也很有限，往往需要在化妆品中添加一些渗透促进剂。另外，棕榈酰化后的多肽分子水溶性较差，在做成化妆品的时候要使用有机溶剂，这样不可避免的对皮肤产生一定的刺激性。

技术实现思路

1、由于五肽kttks皮肤透过性差、棕榈酰化修饰的kttks(pal-kttks)透皮吸收仍有待提升，本发明在五肽kttks的n段修饰了特定结构的两亲性肽段，意外得到了水溶性好、皮肤穿透能力强的五肽衍生肽段ys，抗皮肤衰老作用显著，无需额外施加化学渗透促进剂，更为安全有效。

2、为了实现上述发明目的，本发明的第一方面提供了一种抗皮肤衰老的五肽衍生肽段ys，所述五肽衍生肽段ys包括kttks和n端修饰肽段；所述n端修饰肽段为碱性氨基酸和不带电荷氨基酸间隔排列，且碱性氨基酸数量不低于50％；不带电荷氨基酸选自中性氨基酸和/或极性中性氨基酸；不带电荷氨基酸连续排列不超过3个；n端修饰肽段的n末端氨基酸为酪氨酸、c末端为连续的3个不带电氨基酸。

3、优选地，n端修饰肽段至少包括如式(ⅰ)所示的结构：

4、(xaa)m-x’aa-(xaa)n  (ⅰ)

5、其中，xaa表示碱性氨基酸，x’aa表示中性氨基酸/极性中性氨基酸；m、n独立地选自1-3的整数。

6、优选地，如式(ⅰ)所示的结构选自kkskk(seq id no.7)、rrqrr(seq id no.8)、kkthk(seq id no.9)或kkqkk(seq id no.10)。

7、优选地，n端修饰肽段的结构如式(ⅱ)所示的结构：

8、(x’aa)p-(xaa)q-(x’aa)r-(xaa)m-x’aa-(xaa)n-x’aa-gg  (ⅱ)

9、其中，xaa表示碱性氨基酸，x’aa表示中性氨基酸/极性中性氨基酸；p、q、r独立地选自0-3的整数。

10、优选地，五肽衍生肽段ys包括：ygrts kkskk sggkt tks(seq id no.1)、ygrkkrrqrrmggkt tks(seq id no.2)、yghts kkthk sggkt tks(seq id no.3)、ykkts kkqkksggkt tks(seq id no.4)和ygrts rrqrr mggkt tks(seq id no.5)中的一种或多种。

11、优选地，不带电荷氨基酸选自苏氨酸、丝氨酸、酪氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸和谷氨酰胺中的一种或多种。

12、本发明的第二方面提供了上述技术方案所述五肽衍生肽段ys在制备抗皮肤衰老制剂中的应用；优选地，所述的抗皮肤衰老包括促进胶原蛋白ⅰ合成、增加皮肤厚度和减少皮肤褶皱中的一种或多种。本发明所述的抗皮肤衰老制剂可以是药品或化妆品。

13、本发明的第三方面提供了一种抗皮肤衰老组合物，包括活性成分和辅料，所述活性成分包括上述技术方案所述的五肽衍生肽段ys。

14、本发明优选地，所述的辅料包括但不限于药品或化妆品上可接受的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、香味剂和甜味剂中的一种或多种。本发明提供的五肽衍生肽段ys具有良好的亲水性和亲脂性，无需借助渗透促进剂等化学成分即可被皮肤高效吸收并发挥抗皮肤衰老作用，因而本发明所述的抗皮肤衰老组合物可以不包含渗透促进剂，但包含渗透促进剂会进一步增加五肽衍生肽段ys的皮肤透过性。

15、本发明所述的抗皮肤衰老组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、膏剂等各种剂型，上述各剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。本发明优选地，抗皮肤衰老组合物为用于局部给药的外敷贴剂。

16、本发明所述抗皮肤衰老组合物中的活性组分还可以包括其他具有皮肤护理作用或增强护肤效果、延长代谢时间的有效成分。

17、与现有技术相比，本发明的有益效果：

18、兼具亲水性和亲脂性的细胞穿透多肽因其特殊的分子结构可以将多肽、dna甚至更大的颗粒带入细胞内部(fawell s et al.(1994)tat-mediated delivery ofheterologous proteins into cells.proc natl acad sci usa 91:664–668)。本发明意外发现，在五肽kttks的n端修饰结构为“(xaa)m-x’aa-(xaa)n-(x’aa)q-gg”的修饰肽段(该修饰肽段为两亲性螺旋结构，其形成的螺旋结构中一侧为碱性氨基酸，一侧为中性或极性中性性氨基酸(不带电荷)穿插排布)，经过修饰肽段修饰后得到如式(ⅰ)所示的五肽衍生肽段ys，亲水性好、皮肤透过率高，直接局部适用可显著提高ⅰ型胶原蛋白表达量、增加皮肤厚度、减少皮肤褶皱，达到了显著的抗皮肤衰老效果。

19、裸鼠透皮吸收试验显示，本发明提供的五肽衍生肽段ys(ys)皮肤穿透能力可以达到2％以上。体外和动物体内试验显示，本发明提供的五肽衍生肽段ys对hfl-1的胶原蛋白的分泌有刺激作用，具有穿透裸鼠皮能力适用于老年裸鼠皮肤表现出皮肤厚度增加、皮肤褶皱减少等明显改善皮肤性状作用。可以看出，本发明所述五肽衍生肽段ys能够有效地将五肽kttks带入皮肤内部，而且保持了五肽的活性，同时能够有效改善皮肤的状态，在制备改善皮肤状态的化妆品和药物中的应用前景。