抗FCRH5抗体的制作方法

发明领域本文提供了抗fcrh5抗体(例如双特异性抗体)和免疫缀合物和使用它们的方法。

背景技术：

0、背景

1、fc受体样5(fcrl5，也称为fcrh5和irta2)属于免疫球蛋白超家族(igsf)的最近鉴定的6个基因的家族。该基因家族与具有保守基因组结构、细胞外ig结构域组成以及itim样和itam样信号传导基序的fc受体紧密相关(davis rs等人，eur j immunol(2005)35:674–80)。这个家族的成员还被称为ifgp(来自ig超家族，fcr，gp42)和spap(含sh2结构域的磷酸酶锚定蛋白)。已经描述了fcrh/irta受体家族的六个成员：fcrh1/irta5、fcrh2/irta4、fcrh3/irta3、fcrh4/irta1、fcrh5/irta2和fcrh6(polson ag等人，int.immunol.(2006)18(9):1363-1373)。所有fcrh/irta都含有基于典型的免疫受体酪氨酸抑制基序和‘基于免疫受体酪氨酸的活化基序样’信号传导基序的一些组合。fcrh cdna编码i型跨膜糖蛋白，其具有多个ig样细胞外结构域和含有基于共有免疫受体酪氨酸的活化和/或抑制信号传导基序的细胞质结构域。fcrh基因是结构相关的，且它们的蛋白质产物彼此共有28-60％的细胞外同一性。它们还与其最亲密的fcr相关物共有15-31％的同一性。在不同的fcrh之间存在高度同源性。

2、fcrh5的配体是未知的，但fcrh5已在抗原致敏b细胞的发展期间参与增强的增殖和下游同种型表达(dement-brown j.等人j leukoc biol(2012)91:59–67)。fcrh5基因座具有三个主要的mrna同种型(fcrh5a、fcrh5b和fcrh5c)。由这些转录物编码的主要fcrh5蛋白质同种型共有直至残基560的共同氨基酸序列，特征是常见信号肽和六个细胞外ig样结构域。fcrh5a表示759个氨基酸的分泌糖蛋白，其具有八个ig样结构域，随后是位于其c端的13个独特的主要为极性的氨基酸。fcrh5b在氨基酸残基560处相异于fcrh5a并且延伸一小段的32个额外残基，其疏水性与其经由gpi锚停靠至质膜是相容的。fcrh5c是最长的同种型，其序列在氨基酸746处相异于fcrh5a。fcrh5c编码977个氨基酸的i型跨膜糖蛋白，其具有九个细胞外ig型结构域(拥有八个潜在的n-连接型糖基化位点)、23个氨基酸的跨膜及的104个氨基酸的细胞质结构域(与itim共有序列具有三个共有sh2结合基序)。

3、fcrh基因一起聚簇在1号染色体的1q21–23区域中的经典fcr基因(fcγri、fcγrii、fcγriii和fcεri)的中部。该区域含有与造血性肿瘤尤其是多发性骨髓瘤中的恶性表型相关的最常见的二级染色体异常之一(hatzivassiliou g.等人immunity(2001)14:277–89)。fcrh5只在b细胞谱系中表达，最早始于前b细胞，但直至成熟b细胞阶段才实现完全表达。与最常见的其它b细胞特异性表面蛋白质(例如cd20、cd19和cd22)不同，fcrh5继续在浆细胞中表达，而其它b细胞特异性标记物被下调(polson ag等人，int immunol(2006)18:1363–73)。另外，fcrh5 mrna在多发性骨髓瘤细胞系中过度表达，且通过寡核苷酸阵列检测到1q21异常(inoue j.,am j pathol(2004)165:71–81)。该表达模式表明fcrh5可以成为用于治疗多发性骨髓瘤的基于抗体疗法的标靶。多发性骨髓瘤是浆细胞的恶性肿瘤，其特征为骨骼病变、肾衰竭、贫血和高钙血症。它基本上无法通过当前疗法治愈。多发性骨髓瘤的当前药物治疗包括蛋白酶体抑制剂硼替佐米(velcade)、免疫调节剂来那度胺(revlimid)和类固醇地塞米松(dexamethasone)的组合。

4、基于fcrh5c特异性抗体的疗法和检测方法可以是特别有效的，因为它们特异性识别靶细胞、膜相关的fcrh5，而不是识别fcrh5的可溶性和膜同种型二者的抗体。然而，只有fcrh5的最后一个ig样结构域(ig样结构域9)是fcrh5的三个主要同种型之间有区别的独特细胞外区域，且在fcrh5内的ig样结构域之间有显著的同源性。另外，最后一个ig样结构域在fcrh1、fcrh2、fcrh3和fcrh5之间是高度保守的。特异性靶向fcrh5的任何基于抗体的疗法将必须与其它fcrh具有最低的交叉反应性，以避免不利的脱靶效应(例如fcrh3在正常nk细胞上表达)。在本领域中需要有助于诊断和治疗癌症例如fcrh5相关的癌症的药剂。

5、概要

6、本文提供了抗fcrh5抗体(包括双特异性抗体)、免疫缀合物和使用它们的方法。本文提供了经分离的抗fcrh5抗体，其结合fcrh5c的细胞外结构域的同种型c特异性区。在一些实施方案中，该同种型c特异性区包含ig样结构域9。在一些实施方案中，该同种型c特异性区包含seq id no:1的氨基酸743-850。

7、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:38的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:62的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:86的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:2的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:14的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:26的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:50的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:74的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:98的氨基酸序列的hvr-h3。

8、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:39的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:63的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:87的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:3的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:15的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:27的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:51的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:75的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:99的氨基酸序列的hvr-h3。

9、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:40的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:64的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:88的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:4的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:16的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:28的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:52的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:76的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:100的氨基酸序列的hvr-h3。

10、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:41的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:65的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:89的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:5的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:17的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:29的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:53的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:77的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:101的氨基酸序列的hvr-h3。

11、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:42的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:66的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:90的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:6的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:18的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:30的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:54的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:78的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:102的氨基酸序列的hvr-h3。

12、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:43的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:67的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:91的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:7的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:19的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:31的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:55的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:79的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:103的氨基酸序列的hvr-h3。

13、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:44的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:68的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:92的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:8的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:20的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:32的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:56的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:80的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:104的氨基酸序列的hvr-h3。

14、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:45的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:69的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:93的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:9的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:21的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:33的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:57的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:81的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:105的氨基酸序列的hvr-h3。

15、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:46的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:70的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:94的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:10的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq idno:22的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:34的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:58的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:82的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:106的氨基酸序列的hvr-h3。

16、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:47的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:71的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:95的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:11的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq idno:23的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:35的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:59的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:83的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:107的氨基酸序列的hvr-h3。

17、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:48的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:72的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:96的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:12的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq idno:24的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:36的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:60的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:84的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:108的氨基酸序列的hvr-h3。

18、在一些实施方案中，所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:49的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:73的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:97的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:13的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq idno:25的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:37的氨基酸序列的hvr-l3。在一些实施方案中，所述重链包含含有seq id no:61的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:85的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:109的氨基酸序列的hvr-h3。

19、在任何抗体的一些实施方案中，所述抗体包含：a)与seq id no:111的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:110的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；b)与seq id no:113的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:112的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；c)与seq id no:115的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:114的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；d)与seq id no:117的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:116的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；e)与seq id no:119的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:118的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；f)与seq id no:121的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:120的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；g)与seq id no:123的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:122的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；h)与seq id no:125的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:124的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；i)与seq id no:127的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:126的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；j)与seq id no:129的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:128的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；k)与seq id no:131的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:130的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；l)与seq id no:133的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:132的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；或与seq id no:135的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seq id no:134的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列。

20、在任何抗体的一些实施方案中，所述抗体包含：a)seq id no:111的vh序列和/或seq id no:110的vl序列；b)seq id no:113的vh序列和/或seq id no:112的vl序列；c)seqid no:115的vh序列和/或seq id no:114的vl序列；d)seq id no:117的vh序列和/或seqid no:116的vl序列；e)seq id no:119的vh序列和/或seq id no:118的vl序列；f)seq idno:121的vh序列和/或seq id no:120的vl序列；g)seq id no:123的vh序列和/或seq idno:122的vl序列；h)seq id no:125的vh序列和/或seq id no:124的vl序列；i)seq id no:127的vh序列和/或seq id no:126的vl序列；j)seq id no:129的vh序列和/或seq id no:128的vl序列；k)seq id no:131的vh序列和/或seq id no:130的vl序列；l)seq id no:133的vh序列和/或seq id no:132的vl序列；或m)seq id no:135的vh序列和/或seq id no:134的vl序列。

21、在任何抗体的一些实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在任何抗体的一些实施方案中，所述抗体是人、人源化或嵌合抗体。在任何抗体的一些实施方案中，所述抗体是结合fcrh5的抗体片段。在任何抗体的一些实施方案中，所述抗体是igg1、igg2a或igg2b抗体。

22、在任何抗体的一些实施方案中，所述抗体具有以下特性中的一个或多个：a)与全长人和食蟹猴fcrh5交叉反应；b)不与fcrh1、fcrh2、fcrh3和/或fcrh4交叉反应；c)结合至内源性fcrh5；d)不与fcrh5a交叉反应；和e)不与fcrh5的另一个ig样结构域交叉反应。

23、在任何抗体的一些实施方案中，所述抗体是双特异性抗体。在一些实施方案中，所述双特异性抗体结合fcrh5和cd3。

24、在一些实施方案中，提供了编码本文所描述的抗体的分离核酸。在一些实施方案中，提供了包含所述核酸的宿主细胞。在一些实施方案中，提供了产生本文所描述的抗体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括培养包含编码抗体的核酸的宿主细胞。

25、在一些实施方案中，提供了免疫缀合物。在一些实施方案中，免疫缀合物包含抗fcrh5抗体和细胞毒性剂。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的细胞外结构域的同种型c特异性区。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的ig样结构域9。在一些实施方案中，免疫缀合物具有式ab-(l-d)p，其中：(a)ab是本文所描述的抗体；(b)l是连接子；(c)d是选自类美登素(maytansinoid)、澳瑞他汀(auristatin)、卡里奇霉素(calicheamicin)、吡咯并苯并二氮杂卓和奈莫柔比星(nemorubicin)衍生物的药物；且(d)p在1-8的范围内。在一些实施方案中，d是澳瑞他汀。在一些这类实施方案中，d具有式de

26、

27、其中r2和r6各自为甲基，r3和r4各自为异丙基，r5为h，r7为仲丁基，每个r8独立地选自ch3、o-ch3、oh和h；r9为h；且r18为–c(r8)2–c(r8)2–芳基。在一些实施方案中，d是具有以下结构的mmae：

28、

29、在一些实施方案中，d是式a的吡咯并苯并二氮杂卓：

30、

31、其中虚线指示c1和c2之间或c2和c3之间任选地存在双键；r2独立地选自h、oh、＝o、＝ch2、cn、r、or、＝ch-rd、＝c(rd)2、o-so2-r、co2r和cor，且任选地进一步选自卤基或二卤基，其中rd独立地选自r、co2r、cor、cho、co2h和卤基；r6和r9独立地选自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、no2、me3sn和卤基；r7独立地选自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、no2、me3sn和卤基；q独立地选自o、s和nh；r11是h或r，或当q是o时为so3m，其中m是金属阳离子；r和r’各自独立地选自任选取代的c1-8烷基、c1-12烷基、c3-8杂环基、c3-20杂环基和c5-20芳基，且任选就基团nrr’而言，r和r’与它们所附接的氮原子一起形成任选取代的4-、5-、6-或7-元杂环；r12、r16、r19和r17分别如针对r2、r6、r9和r7所定义；r″为c3-12亚烷基，所述链可以中断有一个或多个杂原子和/或任选取代的芳香环；且x和x’独立地选自o、s和n(h)。在一些这类实施方案中，d是

32、

33、其中n为0或1。

34、在一些实施方案中，d是奈莫柔比星衍生物。在一些实施方案中，d具有选自以下各项的结构：

35、

36、在一些实施方案中，免疫缀合物包含可以通过蛋白酶裂解的连接子。在一些实施方案中，该连接子包括val-cit二肽或phe-homolys二肽。在一些实施方案中，免疫缀合物包含酸不稳定性连接子。在一些这类实施方案中，该连接子包括腙。

37、在一些实施方案中，免疫缀合物具有选自以下各项的式：

38、

39、其中s是硫原子；

40、

41、

42、

43、在一些实施方案中，p在2-5的范围内。

44、在一些实施方案中，提供了药物制剂。在一些这类实施方案中，药物制剂包含免疫缀合物，该免疫缀合物包含例如如本文所描述的结合fcrh5的抗体。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的细胞外结构域的同种型c特异性区。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的ig样结构域9。在一些实施方案中，药物制剂进一步包含另外的治疗剂。

45、在一些实施方案中，提供了治疗具有fcrh5(例如fcrh5c)阳性癌症的个体的方法。在一些这类实施方案中，一种方法包括施用包含免疫缀合物的药物制剂，该免疫缀合物包含例如如本文所描述的结合fcrh5的抗体和/或fcrh5双特异性抗体。在一些实施方案中，fcrh5双特异性抗体包含fcrh5结合臂和cd3结合臂。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的细胞外结构域的同种型c特异性区。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的ig样结构域9。在一些实施方案中，fcrh5阳性癌症是b细胞增生性病症。在一些实施方案中，fcrh5阳性癌症是浆细胞肿瘤。在一些实施方案中，浆细胞肿瘤是多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，一种方法包括向个体施用另外的治疗剂。

46、在一些实施方案中，提供了抑制fcrh5(例如fcrh5c)阳性细胞增殖的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在允许结合fcrh5的抗体和/或fcrh5双特异性抗体与细胞表面上的fcrh5结合的条件下使所述细胞暴露于包含所述抗体的免疫缀合物。在一些实施方案中，fcrh5双特异性抗体包含fcrh5结合臂和cd3结合臂。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的细胞外结构域的同种型c特异性区。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的ig样结构域9。在一些实施方案中，结合fcrh5的抗体是本文所描述的抗体。在一些实施方案中，fcrh5阳性癌症是b细胞增生性病症。在一些实施方案中，fcrh5阳性癌症是浆细胞肿瘤。在一些实施方案中，浆细胞肿瘤是多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，一种方法包括向个体施用另外的治疗剂。

47、在一些实施方案中，结合fcrh5的抗体与标记缀合。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的细胞外结构域的同种型c特异性区。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的ig样结构域9。在一些实施方案中，结合fcrh5的抗体是本文所描述的抗体。在一些实施方案中，所述标记是正电子发射体。在一些实施方案中，该正电子发射体是89zr。

48、在一些实施方案中，提供了检测生物样本中的人fcrh5的方法。在一些实施方案中，一种方法包括在允许抗fcrh5抗体与天然存在的人fcrh5结合的条件下使生物样本与抗fcrh5抗体接触，并检测抗fcrh5抗体与生物样本中的天然存在的人fcrh5之间是否形成了复合物。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的细胞外结构域的同种型c特异性区。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的ig样结构域9。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体是本文所描述的抗体。

49、在一些实施方案中，提供了检测fcrh5阳性癌症的方法。在一些这类实施方案中，一种方法包括(i)向患有或疑似患有fcrh5阳性癌症的受试者施用经标记的抗fcrh5抗体，和(ii)检测受试者中的所述经标记的抗fcrh5抗体，其中检测到所述经标记的抗fcrh5抗体指示受试者中的fcrh5阳性癌症。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的细胞外结构域的同种型c特异性区。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体结合fcrh5c的ig样结构域9。在一些实施方案中，抗fcrh5抗体是本文所描述的抗体。

50、本发明涉及以下各实施方式：

51、1.一种分离的抗fcrh5抗体，其结合fcrh5c的细胞外结构域的同种型c特异性区。

52、2.根据实施方式1所述的抗体，其中所述同种型c特异性区包含ig样结构域9。

53、3.根据实施方式1-2中任一项所述的抗体，其中所述同种型c特异性区包含seq idno:1的氨基酸743-850。

54、4.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:38的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:62的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:86的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:2的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:14的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:26的氨基酸序列的hvr-l3。

55、5.根据实施方式4所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:50的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:74的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:98的氨基酸序列的hvr-h3。

56、6.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:39的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:63的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:87的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:3的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:15的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:27的氨基酸序列的hvr-l3。

57、7.根据实施方式6所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:51的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:75的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:99的氨基酸序列的hvr-h3。

58、8.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:40的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:64的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:88的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:4的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:16的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:28的氨基酸序列的hvr-l3。

59、9.根据实施方式8所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:52的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:76的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:100的氨基酸序列的hvr-h3。

60、10.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:41的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:65的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:89的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:5的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:17的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:29的氨基酸序列的hvr-l3。

61、11.根据实施方式10所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:53的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:77的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:101的氨基酸序列的hvr-h3。

62、12.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:42的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:66的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:90的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:6的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:18的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:30的氨基酸序列的hvr-l3。

63、13.根据实施方式12所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:54的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:78的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:102的氨基酸序列的hvr-h3。

64、14.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:43的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:67的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:91的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:7的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:19的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:31的氨基酸序列的hvr-l3。

65、15.根据实施方式14所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:55的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:79的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:103的氨基酸序列的hvr-h3。

66、16.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:44的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:68的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:92的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:8的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:20的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:32的氨基酸序列的hvr-l3。

67、17.根据实施方式16所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:56的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:80的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:104的氨基酸序列的hvr-h3。

68、18.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:45的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:69的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:93的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:9的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:21的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:33的氨基酸序列的hvr-l3。

69、19.根据实施方式18所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:57的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:81的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:105的氨基酸序列的hvr-h3。

70、20.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:46的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:70的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:94的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:10的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:22的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:34的氨基酸序列的hvr-l3。

71、21.根据实施方式20所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:58的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:82的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:106的氨基酸序列的hvr-h3。

72、22.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:47的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:71的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:95的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:11的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:23的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:35的氨基酸序列的hvr-l3。

73、23.根据实施方式22所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:59的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:83的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:107的氨基酸序列的hvr-h3。

74、24.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:48的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:72的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:96的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:12的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:24的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:36的氨基酸序列的hvr-l3。

75、25.根据实施方式24所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:60的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:84的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:108的氨基酸序列的hvr-h3。

76、26.根据实施方式1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)重链，其包含含有seq id no:49的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:73的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:97的氨基酸序列的hvr-h3；和/或b)轻链，其包含含有seq id no:13的氨基酸序列的hvr-l1、含有seq id no:25的氨基酸序列的hvr-l2和含有seq id no:37的氨基酸序列的hvr-l3。

77、27.根据实施方式26所述的抗体，其中所述重链包含含有seq id no:61的氨基酸序列的hvr-h1、含有seq id no:85的氨基酸序列的hvr-h2和含有seq id no:109的氨基酸序列的hvr-h3。

78、28.根据前述实施方式中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：

79、a)与seq id no:111的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:110的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

80、b)与seq id no:113的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:112的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

81、c)与seq id no:115的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:114的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

82、d)与seq id no:117的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:116的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

83、e)与seq id no:119的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:118的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

84、f)与seq id no:121的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:120的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

85、g)与seq id no:123的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:122的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

86、h)与seq id no:125的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:124的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

87、i)与seq id no:127的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:126的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

88、j)与seq id no:129的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:128的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

89、k)与seq id no:131的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:130的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；

90、l)与seq id no:133的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:132的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；或

91、m)与seq id no:135的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列和/或与seqid no:134的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列。

92、29.根据实施方式1-28中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：

93、a)seq id no:111的vh序列和/或seq id no:110的vl序列；

94、b)seq id no:113的vh序列和/或seq id no:112的vl序列；

95、c)seq id no:115的vh序列和/或seq id no:114的vl序列；

96、d)seq id no:117的vh序列和/或seq id no:116的vl序列；

97、e)seq id no:119的vh序列和/或seq id no:118的vl序列；

98、f)seq id no:121的vh序列和/或seq id no:120的vl序列；

99、g)seq id no:123的vh序列和/或seq id no:122的vl序列；

100、h)seq id no:125的vh序列和/或seq id no:124的vl序列；

101、i)seq id no:127的vh序列和/或seq id no:126的vl序列；

102、j)seq id no:129的vh序列和/或seq id no:128的vl序列；

103、k)seq id no:131的vh序列和/或seq id no:130的vl序列；

104、l)seq id no:133的vh序列和/或seq id no:132的vl序列；或

105、m)seq id no:135的vh序列和/或seq id no:134的vl序列。

106、30.根据实施方式1-29中任一项所述的抗体，其中所述抗体为单克隆抗体。

107、31.根据实施方式1-30中任一项所述的抗体，其中所述抗体为人、人源化或嵌合抗体。

108、32.根据实施方式1-31中任一项所述的抗体，其中所述抗体为结合fcrh5的抗体片段。

109、33.根据实施方式1-32中任一项所述的抗体，其中所述抗体为igg1、igg2a或igg2b抗体。

110、34.根据实施方式1-33中任一项所述的抗体，所述抗体具有以下特性中的一个或多个：a)与全长人和食蟹猴fcrh5交叉反应；b)不与fcrh1、fcrh2、fcrh3和/或fcrh4交叉反应；c)结合至内源性fcrh5；d)不与fcrh5a交叉反应；和e)不与fcrh5的另一个ig样结构域交叉反应。

111、35.根据实施方式1-34中任一项所述的抗体，其中所述抗体为双特异性抗体。

112、36.根据实施方式35所述的抗体，其中双特异性抗体结合fcrh5和cd3。

113、37.分离的核酸，其编码根据实施方式1-36中任一项所述的抗体。

114、38.一种宿主细胞，其包含根据实施方式37所述的核酸。

115、39.一种生成抗体的方法，其包括培养根据实施方式38所述的宿主细胞以便生成所述抗体。

116、40.一种免疫缀合物，其包含根据实施方式1-36中任一项所述的抗体和细胞毒性剂。

117、41.根据实施方式41所述的免疫缀合物，其具有式ab-(l-d)p，其中：

118、(a)ab是根据实施方式1-36中任一项所述的抗体；

119、(b)l是连接子；

120、(c)d是选自类美登素、澳瑞他汀、卡里奇霉素、吡咯并苯并二氮杂卓和奈莫柔比星衍生物的药物；且

121、(d)p在1-8的范围内。

122、42.根据实施方式41所述的免疫缀合物，其中d是澳瑞他汀。

123、43.根据实施方式42所述的免疫缀合物，其中d具有式de

124、

125、且其中r2和r6各自为甲基，r3和r4各自为异丙基，r5为h，r7为仲丁基，每个r8独立地选自ch3、o-ch3、oh和h；r9为h；且r18为c(r8)2–c(r8)2–芳基。

126、44.根据实施方式41所述的免疫缀合物，其中所述药物是mmae。

127、45.根据实施方式41所述的免疫缀合物，其中d是式a的吡咯并苯并二氮杂卓：

128、

129、其中虚线指示c1和c2之间或c2和c3之间任选存在的双键；

130、r2独立地选自h、oh、＝o、＝ch2、cn、r、or、＝ch-rd、＝c(rd)2、o-so2-r、co2r和cor，且任选地进一步选自卤基或二卤基，其中rd独立地选自r、co2r、cor、cho、co2h和卤基；

131、r6和r9独立地选自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、no2、me3sn和卤基；

132、r7独立地选自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、no2、me3sn和卤基；

133、q独立地选自o、s和nh；

134、r11是h或r，或当q是o时为so3m，其中m是金属阳离子；

135、r和r’各自独立地选自任选取代的c1-8烷基、c3-8杂环基和c5-20芳基，且任选就基团nrr’而言，r和r’与它们所附接的氮原子一起形成任选取代的4-、5-、6-或7-元杂环；

136、r12、r16、r19和r17分别如针对r2、r6、r9和r7所定义；

137、r″为c3-12亚烷基，所述链可以被一个或多个杂原子和/或任选取代的芳香环中断；且

138、x和x’独立地选自o、s和n(h)。

139、46.根据实施方式45所述的免疫缀合物，其中d具有以下结构：

140、

141、其中n为0或1。

142、47.根据实施方式45所述的免疫缀合物，其中d具有选自以下各项的结构：

143、

144、其中re和re”各自独立地选自h或rd，其中rd独立地选自r、co2r、cor、cho、co2h和卤基；

145、其中ar1和ar2各自独立地为任选取代的c5-20芳基；且

146、其中n为0或1。

147、48.根据实施方式41所述的免疫缀合物，其中d是式b的吡咯并苯并二氮杂卓：

148、

149、其中水平波浪线指示与所述连接子的共价连接位点；

150、rv1和rv2独立地选自h、甲基、乙基、苯基、氟取代苯基和c5-6杂环基；且

151、n为0或1。

152、49.根据实施方式41所述的免疫缀合物，其中d是奈莫柔比星衍生物。

153、50.根据实施方式49所述的免疫缀合物，其中d具有选自以下各项的结构：

154、

155、

156、51.根据实施方式41至50中任一项所述的免疫缀合物，其中所述连接子可以通过蛋白酶裂解。

157、52.根据实施方式51所述的免疫缀合物，其中所述连接子包含val-cit二肽或phe-homolys二肽。

158、53.根据实施方式41至50中任一项所述的免疫缀合物，其中所述连接子对酸不稳定。

159、54.根据实施方式53所述的免疫缀合物，其中所述连接子包含腙。

160、55.根据实施方式53所述的免疫缀合物，其具有下式：

161、

162、其中s是硫原子。

163、56.根据实施方式46所述的免疫缀合物，其具有选自以下各项的式：

164、

165、57.根据实施方式50所述的免疫缀合物，其具有选自以下各项的式：

166、

167、

168、

169、58.根据实施方式41至57中任一项所述的免疫缀合物，其中p在2-5的范围内。

170、59.一种药物制剂，其包含根据实施方式1-36中任一项所述的抗体和/或根据实施方式41-58中任一项所述的免疫缀合物和药学上可接受的载体。

171、60.根据实施方式59所述的药物制剂，其进一步包含另外的治疗剂。

172、61.一种治疗患有fcrh5阳性癌症的个体的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的根据实施方式1-36中任一项所述的抗体和/或根据实施方式41至59中任一项所述的免疫缀合物。

173、62.根据实施方式61所述的方法，其中所述fcrh5阳性癌症是b细胞增生性病症。

174、63.根据实施方式61-62中任一项所述的方法，其进一步包括向所述个体施用另外的治疗剂。

175、64.一种抑制fcrh5阳性细胞增殖的方法，所述方法包括在允许根据实施方式1-36中任一项所述的抗体和/或根据实施方式41-59中任一项所述的免疫缀合物与所述细胞表面上的fcrh5结合的条件下，使所述细胞暴露于所述抗体和/或免疫缀合物，从而抑制所述细胞的增殖。

176、65.根据实施方式64所述的方法，其中所述细胞是b细胞。

177、66.根据实施方式1-36中任一项所述的抗体，其缀合至标记。

178、67.根据实施方式66所述的抗体，其中所述标记是正电子发射体。

179、68.根据实施方式67所述的抗体，其中所述正电子发射体是89zr。

180、69.一种检测生物样本中的人fcrh5的方法，其包括使所述生物样本与根据实施方式1-36或66-68中任一项所述的抗fcrh5抗体在允许所述抗fcrh5抗体与天然存在的人fcrh5结合的条件下接触，并检测所述抗fcrh5抗体与所述生物样本中的天然存在的人fcrh5之间是否形成复合物。

181、70.根据实施方式69所述的方法，其中所述抗fcrh5抗体是如实施方式9或实施方式15中所述的抗体。

182、71.根据实施方式69-70中任一项所述的方法，其中所述生物样本是血液样本。

183、72.一种检测fcrh5阳性癌症的方法，其包括(i)向患有或疑似患有fcrh5阳性癌症的受试者施用标记的抗fcrh5抗体，其中所述经标记的抗fcrh5抗体包括根据实施方式1至36中任一项所述的抗fcrh5抗体；和(ii)检测所述受试者中的所述经标记的抗fcrh5抗体，其中检测到所述经标记的抗fcrh5抗体指示所述受试者中的fcrh5阳性癌症。

184、73.根据实施方式72所述的方法，其中所述经标记的抗fcrh5抗体包括与正电子发射体缀合的抗fcrh5抗体。

185、74.根据实施方式72-73中任一项所述的方法，其中所述正电子发射体是89zr。

技术实现思路