一株皮特不动杆菌及其培养和应用的制作方法

本发明属于环境污染治理，具体涉及一株皮特不动杆菌及其培养和应用。

背景技术：

1、磷是造成水体富营养化的主要污染物之一，除磷一直是污水处理领域的研究重点。相比于物理、化学法，生物法除磷具有安全、高效、费用低廉等优势，是我国城市污水处理系统中应用最为广泛的除磷技术。目前普遍认可的生物法除磷机理是聚合磷酸盐积累微生物(poly-phophate accumulating microorganisms，paos)的释/吸磷作用，在厌氧/好氧交替的运行条件下，具有超量吸磷能力的微生物类群，统称为聚磷菌。已报道的能成为优势菌群的聚磷菌主要分布于假单胞菌属( pseudomonas)、不动杆菌属( acinetobacter)、气单胞菌属( aeromonas)、产碱杆菌属( alcaligenes)、克雷伯氏杆菌属 ( klebsiella)和芽孢杆菌属( bacillus)等。不动杆菌，是一种好氧兼性厌氧的细菌，在自然界广泛存在，目前，在土壤修复、水体修复中均有应用。但目前关于皮特不动杆菌的应用较少，且性能单一，应用受到一定程度的限制。

2、cn103540546a公开了一株高效聚磷菌 pseudomonas sp. gpa1，属于假单胞菌属，具有较强的聚磷能力。cn1807585a公开了一株高效聚磷菌gm6，属于恶臭假单胞菌，将菌液按照2%的比例投放至医院废水处理设施中，有利于医院废水处理。

3、cn202110273285.6公开了一种有机固废高温好氧生物减量菌种，分类命名为皮特不动杆菌 acinetobacter pittii ap-16，保藏编号为cctcc no:m 2020972。皮特不动杆菌 acinetobacter pittii ap-16，具有耐高盐和耐高温能力，可在高温条件下快速降解含盐量高的有机固废中的有机物；而且在高温下还具有高产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶的能力，可高效降解有机固废中的蛋白质、淀粉、纤维素等有机物。

4、cn202011199986.1公开了一种异养硝化好氧反硝化菌y16及其应用，其为不动杆菌 acinetobacter pittii y16，其保藏编号为cctcc m 2020283，于2020年7月6日保藏于中国典型培养物保藏中心。该菌株在污水处理中能显著降低污水的含氮量，具有强化脱氮的效果。

5、cn201610202208.0公开了皮特不动杆菌及其用途，其中，该皮特不动杆菌于2015年11月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏单位的地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号cgmccno.11670，保藏名称为皮特不动杆菌 acinetobacter pittii syj1-3。该皮特不动杆菌能够以石油为碳源生长和增殖，利用自身代谢降解石油，可以有效用于石油废水、石油污染土壤等的治理。

6、综上可知，现有技术公开的皮特不动杆菌通常具备聚磷、脱氮、降解石油等单一性能，而且这些菌一方面需要采用较为优质的碳源如低分子有机酸盐、葡萄糖等，在难降解有机碳源如石油烃体系中，其效果会下降；另一方面，这些菌不具备同时代谢石油烃、脱磷脱氮等多种功能。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一株皮特不动杆菌及其培养应用。本发明提供的皮特不动杆菌具备同时除磷脱氮和降解石油烃的能力，特别是在石油污染体系中，能够利用石油烃进行除磷，实现石油烃和总磷的同时高效去除。

2、本发明提供了一株同时除磷脱氮和降解石油烃的菌株，为皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6，该菌株已于2022年06月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no. 25181。

3、本发明提供的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6的主要形态特征为：在tsa培养基培养，37℃培养18h后，菌落黄色，圆形，表面湿润，不透明，边缘整齐。

4、本发明提供的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6在显微镜下菌体呈杆状，0.3-0.5μm×0.4-1.0μm，单个或成对排列，革兰氏阴性。

5、本发明提供的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6的16s rdna基因测序分析结果见序列表。

6、本发明还提供了一种皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6的培养方法，利用lb培养基，在好氧条件下培养至稳定期。培养条件为：ph为6-9，温度为20-35℃，溶解氧浓度为0.25-2.5mg/l，培养时间18-48h。

7、本发明提供的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6在除磷中的应用。所述磷为磷酸盐，具体为正磷酸盐、偏磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐等中的至少一种，体系中总磷浓度不高于30mg/l时，去除率均大于80%。该菌株可以用于仅含磷酸盐体系的处理，也可以用于同时含磷酸盐和石油烃体系的处理，能够实现石油烃和磷酸盐的同时高效去除。其中所述石油烃来自原油、汽油、柴油、煤油、润滑油等至少一种油品中的烃类混合物，一般含有链烷烃、环烷烃和芳烃等，石油类浓度不高于5000mg/l。在除磷同时降解石油烃的应用中，氮源优选采用无机氮和有机氮的组合，无机氮为氨氮，加入量为10-30mg/l，有机氮为蛋白胨、酵母浸粉等中的至少一种，加入量为0.1-0.3g/l，在有机氮和无机氮同时存在的情况下，脱除效果可进一步提升。

8、本发明提供的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6在降解石油烃中的应用。该菌株能够利用石油烃作为唯一碳源生长，实现石油烃的高效去除，所述石油烃来自原油、汽油、柴油、煤油、润滑油等至少一种油品中的烃类混合物，一般含有链烷烃、环烷烃和芳烃等。在该应用体系中，当石油类浓度不高于10000mg/l时，去除率均大于85%。

9、本发明提供的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6在废水脱氮和除磷中的应用，能够同时对废水中的氨氮和磷酸盐进行脱除。在氨氮浓度20-100mg/l，总磷浓度为3-30mg/l的体系中，总磷和氨氮去除率可达到85%以上。在该应用中，优选碳源是乙酸钠、乳酸钠、柠檬酸钠、丁二酸钠等中的至少一种。

10、在上述除磷、降解石油烃、脱氮除磷的应用中，应用条件为：温度为20～35℃，ph为6～9，溶解氧浓度为0.5～2.5mg/l。

11、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

12、（1）本发明选育的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6具备同时除磷脱氮和降解石油烃的能力，特别是在石油污染体系中，能够利用石油烃进行除磷，实现石油烃和磷的同时高效去除。

13、（2）皮特不动杆菌pa6能以石油烃为唯一碳源进行生长，实现石油烃的高效降解。

14、（3）皮特不动杆菌pa6能同时脱除废水中氨氮和磷酸盐，具有一定的异养硝化脱氮能力。

15、（4）皮特不动杆菌pa6为石油烃污染场地修复、富营养化水体修复、石油污染海洋的修复等提供微生物资源，应用前景广阔。

16、生物材料保藏说明

17、本发明提供的皮特不动杆菌（ acinetobacter pittii）pa6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏编号：cgmcc no. 25181；保藏日期：2022年06月27日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。