一种查尔酮类衍生物的合成及其制药应用

1.本发明属于药物化合物技术领域，具体涉及一种查尔酮类衍生物结构、其制备方法及其抗炎活性与制药应用。


背景技术：

2.查尔酮是许多天然化合物的简单化学支架，广泛分布在蔬菜，水果，茶和其他植物中。查尔酮化合物具有常见的化学支架1,3二芳基-2-丙烯-1-酮，其结构为它以反式和顺式异构体的形式存在，反式异构体在热力学上更稳定。查尔酮的治疗应用可以追溯到数千年前，通过使用植物和草药来治疗不同的医学疾病，如癌症，炎症和糖尿病。几种查尔酮基化合物已被批准用于临床，例如，美托查尔酮曾经作为利胆药物上市，而索法酮以前被用作抗溃疡和粘膜保护药物。
3.查尔酮表现出广泛的生物活性，可能是由于它们的小结构和迈克尔受体特征，这使它们对不同的生物分子具有耐受性，并使它们容易或反应性地与它们结合。查耳酮的生物活性包括抗癌活性、癌症预防作用、抗炎活性、抗菌活性、抗结核活性、抗糖尿病活性、抗氧化活性、抗菌活性、抗病毒活性、抗疟活性、神经保护作用等。
4.由于合成方便，也制备了许多查尔酮衍生物。这些天然产物和合成化合物已显示出许多有趣的生物活性，具有抗各种疾病的临床潜力。大量研究表明，它们在减少炎症、调节免疫反应以及支持和恢复细胞的正常功能方面具有很强的积极作用。基于查尔酮类化合物所具有的广泛的抗炎作用，我们通过对其骨架的修饰设计并开发了一系列查尔酮类衍生物，以期推动新型抗炎药物的研究与开发。


技术实现要素：

5.本发明提供了一种查尔酮类衍生物，其具有有价值的药理性质，特别是抑制肿瘤生长、加速细胞凋亡和抑制细胞活力。
6.本发明还进一步提供了所述查尔酮类衍生物的制备方法。
7.具有式i结构的化合物，其立体异构体、药物可接受的盐或多晶型：
[0008][0009]
其中：
[0010]
r1独立的选自氢、羟基、甲氧基、乙氧基、苯基、萘基、蒽基、菲基、卤素、1-10个碳原
独立的选自甲基；r3独立的选自氢、苯基、萘基，一个或多个卤素、1-4个碳原子的烷基、1-4个碳原子的烷氧基等取代的苯基等；r4独立的选自氢。
[0020]
根据本发明的一个实施方案，优选化合物为式i所示的化合物，示例性化合物包括表1中阐述的化合物及其药物可接受的盐或其溶剂合物：
[0021]
表1
[0022]
[0023]
prenylpyranoflavanones:total synthesis of(+/-)-maxima flavanone a,1999,38,596-599。
[0029]
除特别说明之外，上述制备方法中已有文献报道的化合物均可以采用本领域已知的反应方法和条件进行。
[0030]
本发明还提供一种药物组合物，其包含本发明的式i化合物或其溶剂化物作为活性成分，任选地还含有一种或多种药学上可接受的载体。所述药学上可接受的载体是制药领域中常用或已知的各种辅料，包括但不限于：稀释剂、粘合剂、抗氧化剂、ph调节剂、防腐剂、润滑剂、崩解剂等。
[0031]
在本发明的一种实施方式中，所述药物组合物用于治疗或预防炎症性疾病，下调tnf-α和il-6等细胞因子水平，抑制炎症进展。
[0032]
根据本发明，所述炎症包括但不限于类风湿性关节炎、骨关节炎、动脉粥样硬化、糖尿病、神经变性、过敏、感染和癌症等引起的炎症。
[0033]
所述药物组合物中含有式i化合物的量(以式i化合物计)为0.1-1000mg，优选1-500mg，更优选为5-100mg。
[0034]
所述药物组合物中式i化合物(以式i化合物计)占药物组合物的质量百分比为0.01％-95％，根据剂型不同例如可以为0.1％-10％，0.3～5％，或者10％-90％，优选为20％-80％，更优选为30％-70％等含量范围。
[0035]
所述药物组合物的剂型可以是口服剂的形式，例如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、悬浮剂、糖浆剂等；也可以是注射给药的剂型，例如注射液、粉针剂等，通过静脉内、腹膜内、皮下或肌肉内的途径注射给药。所有使用的剂型形式都是药学领域普通技术人员所熟知的。例如所述药物组合物可以为注射液，式i化合物在注射液中的浓度可以为1-15mg/ml，例如5mg/ml、10mg/ml、12.5mg/ml等。
[0036]
所述药物组合物的施用途径包括但不限于：口服的；含服的；舌下的；透皮的；肺的；直肠的；肠胃外的，例如，通过注射，包括皮下的、真皮内的、肌内的、静脉内的；通过植入储库或储液器。
[0037]
式i化合物的施用剂量(以式i化合物计)将取决于接受者的年龄、健康和体重，联用药物的种类，治疗频率，给药途径等。药物可以单一日剂量施用，每天给药一次、每两天给药一次、每三天给药一次、每四天给药一次，或者总日剂量以每天两次、三次或四次的分开剂量施用。式i或式ii化合物用药量(以式i化合物计)为0.01-100mg/kg/天，优选为0.1-10mg/kg/天，例如为0.5mg/kg/天，1mg/kg/天、2mg/kg/天、5mg/kg/天等等。
[0038]
所述药物组合物可以和其他的治疗剂联合应用给药或者制成组合药物。所述其他治疗剂根据疾病和病症类型不同，可以是其他的治疗炎症的药物等。
[0039]
其他的治疗炎症的药物包括但不限于：水杨酸类(阿司匹林、双水杨酯)、苯胺类(非那西丁、对乙酰氨基酚)、吲哚类(阿西美辛、吲哚美辛)、芳基乙酸类(双氯芬酸钠、吲哚美辛)、芳基丙酸(布洛芬、氟比洛芬酯)、烯醇酸类(吡罗昔康、美洛昔康)、烷酮类(萘丁美酮)、异丁芬酸(舒林酸)等。
[0040]
本发明提供式i化合物在制备治疗或预防炎症的药物中的应用。所述药物能够下调tnf-α和il-6等细胞因子水平，抑制炎症进展。
[0041]
本发明提供式i化合物和其他的治疗炎症的药物联合在制备治疗或预防炎症的药
物中的用途。
[0042]
本发明提供一种治疗或预防炎症，下调tnf-α和il-6等细胞因子水平，抑制炎症进展的方法，其特征在于，对有需要的患者施用治疗有效量的式i化合物或其溶剂化物、或者含有式i或式ii化合物或其溶剂化物的药物组合物。
[0043]
本发明式i化合物具有明确且高效的炎症治疗和预防效果，能够下调tnf-α和il-6等细胞因子水平，抑制炎症进展，不具有细胞毒性。因此在治疗用途的同时保证用药的安全性。
附图说明
[0044]
图1 lps刺激后给予不同化合物后的dc2.4细胞上清中tnf-α的含量
[0045]
图2 lps刺激后给予不同化合物后的dc2.4细胞上清中il-6的含量
[0046]
图3 lps刺激后给予不同化合物后的raw264.7细胞上清中tnf-α的含量
[0047]
图4 lps刺激后给予不同化合物后的raw264.7细胞上清中il-6的含量
[0048]
图5 lps刺激后给予不同浓度梯度化合物后的dc2.4细胞上清中tnf-α的含量
[0049]
图6 lps刺激后给予不同浓度梯度化合物后的dc2.4细胞上清中il-6的含量
[0050]
图7 lps刺激后各组小鼠血清中il-1β、il-6和tnf-α的含量
具体实施方式
[0051]
下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
[0052]
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
[0053]
ch3i：碘甲烷；k2co3：碳酸钾；thf：四氢呋喃；bbr3：三溴化硼；cui：碘化亚铜；dmf：n,n-二甲基甲酰胺；dead：偶氮二甲酸二乙酯；pph3：三苯基磷；eu(fod)3：三(6，6，7，7，8，8，8-七氟-2，2-二甲基-3，5-辛二酮酸)铕；ac2o：乙酸酐。
[0054]
实施例1化合物wr021-wr030的制备
[0055][0056]
a)cui,k2co3,ki,dmf,81％；b)n,n-diethylaniline,76％；c)nah,dmf,88％；d)eu
(fod)3,chloroform,78％；e)nah,ch3i,dmf,89％.
[0057]
1、中间体7的制备方法
[0058]
1)化合物1-6的制备
[0059][0060]
以2,4-二羟基苯乙酮为起始原料，与3-氯-3-甲基-1-丁炔在碘化亚铜、碘化钾条件下反应生成化合物2；化合物2与n,n-二乙基苯胺反应生成化合物3；随后化合物3与化合物4在氢化钠条件下生成化合物5；最后化合物5与eu(fod)3发生反应获得化合物6。
[0061]
化合物6：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ12.84(s,1h),7.33(s,1h),6.71(d,j＝10.0hz,1h),5.57(d,j＝10.0hz,1h),5.23(t,j＝7.4hz,1h),3.20(d,j＝7.4hz,2h),2.53(s,3h),1.73(s,6h),1.44(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ202.75,158.14,157.62,132.49,130.84,127.95,122.41,120.75,116.16,113.30,109.00,77.56,28.26,27.91,26.21,25.81,17.92.
[0062]
2)化合物7的制备
[0063][0064]
将化合物6(0.6g，2.09mmol)用无水四氢呋喃溶解后，置于50ml圆底烧瓶中搅拌，在冰浴下缓慢滴加碘甲烷(0.26ml,4.19mmol)和碳酸钾(0.25g，6.28mmol),搅拌30分钟后，将反应体系置于常温下继续反应。用tlc检测反应，待反应完全后，在体系中加入200ml乙酸乙酯,反应液用饱和氯化钠溶液(100ml
×
3)洗涤萃取，收集有机相经干燥剂无水硫酸钠处理后，过滤浓缩。粗产品经快速硅胶色谱柱纯化，得到白色固体化合物7(559mg,89％)。
[0065]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.44(s,1h),6.59(d,j＝10.0hz,1h),5.67(d,j＝10.0hz,1h),5.24(t,j＝7.4hz,1h),3.77(s,3h),3.23(d,j＝7.4hz,2h),2.59(s,3h),1.72(s,6h),1.44(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ198.39,155.48,155.17,132.39,130.83,130.19,125.56,124.32,122.17,117.00,114.41,63.09,30.33,28.01,25.80,17.89.
[0066]
2、化合物wr021-wr030的制备方法
[0067]
1)化合物wr021的制备
[0068][0069]
将化合物7(330mg，1.681mmol)和4-氟苯甲醛(535.8mg，5.049mmol)用无水四氢呋喃溶解后，置于50ml圆底烧瓶中搅拌，在冰浴下缓慢滴加4m的氢氧化钠溶液(0.841ml,3.367mmol),搅拌30分钟后，将反应体系置于常温下继续反应。用tlc检测反应，待反应完全后，在体系中加入200ml乙酸乙酯,反应液用饱和氯化钠溶液(100ml
×
3)洗涤萃取，收集有机相经干燥剂无水硫酸钠处理后，过滤浓缩。粗产品经快速硅胶色谱柱纯化，得到淡黄色固体化合物wr021(698mg,86％)。
[0070]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.69(d,j＝15.8hz,1h),7.65
–
7.54(m,2h),7.49(d,j＝15.8hz,1h),7.43(s,1h),7.08(t,j＝8.6hz,2h),6.63(d,j＝10.0hz,1h),5.69(d,j＝10.0hz,1h),5.26(tp,j＝7.4,1.5hz,1h),3.72(s,3h),3.26(d,j＝7.5hz,2h),1.72(dd,j＝3.0,1.4hz,6h),1.46(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.79,165.11,155.22,154.76,141.44,132.44,131.59,131.16,130.41,130.27,130.18,126.17,125.82,124.83,122.17,116.79,116.14,115.93,114.43,76.79,63.52,28.09,28.00,25.82,17.91.
[0071]
2)化合物wr022-wr030的制备
[0072]
化合物wr022-wr030的合成步骤同化合物wr021。
[0073]
化合物wr022：
[0074]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.73(d,j＝15.8hz,1h),7.65
–
7.52(m,3h),7.45
–
7.32(m,4h),6.64(d,j＝10.0hz,1h),5.69(d,j＝10.0hz,1h),5.27(t,j＝7.4hz,1h),3.73(s,3h),3.26(d,j＝7.4hz,2h),1.73(s,6h),1.46(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.04,155.16,154.77,142.81,135.33,132.41,131.18,130.35,130.14,128.90,128.42,126.43,125.74,124.90,122.20,116.84,114.43,78.44,63.51,28.09,28.00,25.82,17.91.
[0075]
化合物wr023：
[0076]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.67(d,j＝15.8hz,1h),7.58
–
7.50(m,3h),7.43(s,1h),7.36(d,j＝8.6hz,2h),6.63(d,j＝10.0hz,1h),5.69(d,j＝10.0hz,1h),5.26(t,j＝7.4hz,1h),3.72(s,3h),3.25(d,j＝7.4hz,2h),1.73(s,6h),1.46(s,6h).
13
c nmr(100mhz,
cdcl3)δ190.64,155.32,154.82,141.15,135.96,133.87,132.44,131.18,130.40,129.51,129.16,126.91,125.86,124.74,122.15,119.06,116.75,114.42,75.66,63.52,28.09,27.99,25.79,17.89.
[0077]
化合物wr024：
[0078]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.72
–
7.38(m,7h),6.63(d,j＝10.0hz,1h),5.69(d,j＝10.0hz,1h),5.26(ddq,j＝8.8,5.9,1.5hz,1h),3.71(s,3h),3.25(d,j＝7.4hz,2h),1.72(dd,j＝2.7,1.4hz,6h),1.46(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.63,155.34,154.84,141.19,134.30,132.45,132.12,131.19,130.41,129.74,127.00,125.87,124.72,124.29,122.14,116.75,114.42,76.83,63.52,28.09,27.99,25.80,17.89.
[0079]
化合物wr025：
[0080]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.69(d,j＝15.8hz,1h),7.57(d,j＝8.8hz,2h),7.41(d,j＝1.0hz,2h),6.92(d,j＝8.8hz,2h),6.64(d,j＝10.0hz,1h),5.68(d,j＝10.0hz,1h),5.36
–
5.13(m,1h),3.85(s,3h),3.72(s,3h),3.25(d,j＝7.4hz,2h),1.72(dd,j＝3.5,1.3hz,6h),1.45(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.22,161.41,154.88,154.54,142.85,132.34,131.09,130.31,130.13,128.04,125.62,125.16,124.25,122.26,116.91,114.41,114.37,68.12,63.44,55.42,28.06,28.00,25.82.
[0081]
化合物wr026：
[0082]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.67(d,j＝15.7hz,1h),7.51
–
7.35(m,2h),7.20(dd,j＝8.3,2.0hz,1h),7.13(d,j＝2.0hz,1h),6.88(d,j＝8.3hz,1h),6.64(d,j＝10.0hz,1h),5.68(d,j＝10.0hz,1h),5.26(dddd,j＝7.4,6.0,2.9,1.5hz,1h),3.92(d,j＝3.4hz,6h),3.72(s,3h),3.25(d,j＝7.4hz,2h),1.72(dd,j＝3.7,1.3hz,6h),1.45(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.28,154.86,154.47,151.14,149.22,143.21,132.35,131.05,130.37,128.28,125.63,125.15,124.47,122.92,122.25,116.88,114.41,111.12,110.14,76.68,63.47,56.01,55.97,28.06,28.00,25.83,17.91.
[0083]
化合物wr027：
[0084]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.62(d,j＝15.7hz,1h),7.42(m,2h),6.84(s,2h),6.64(d,j＝10.0hz,1h),5.69(d,j＝10.0hz,1h),5.26(t,j＝7.4hz,1h),3.90(s,6h),3.89(s,3h),3.72(s,3h),3.26(d,j＝7.4hz,2h),1.72(s,6h),1.46(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.14,155.03,154.56,153.48,143.10,140.16,132.40,131.08,130.82,130.41,125.82,125.73,124.97,122.20,116.82,114.41,105.61,63.48,60.99,56.23,28.07,28.00,25.81,17.90.
[0085]
化合物wr028：
[0086]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.01(s,1h),7.96
–
7.62(m,6h),7.51(dd,j＝6.3,3.2hz,3h),6.67(d,j＝10.0hz,1h),5.70(d,j＝9.9hz,1h),5.33
–
5.13(m,1h),3.75(s,3h),3.28(d,j＝7.4hz,2h),1.73(d,j＝3.7hz,6h),1.47(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.01,155.17,154.77,142.93,134.26,133.44,132.86,132.41,131.21,130.38,130.26,128.64,128.59,127.79,127.15,126.66,125.78,124.98,123.94,122.22,116.86,114.45,76.77,63.54,28.09,28.01,25.82,17.91.
[0087]
化合物wr029：
[0088]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.62(d,j＝15.7hz,1h),7.54
–
7.44(m,2h),7.33(s,2h),6.83(d,j＝8.8hz,2h),6.57(d,j＝10.0hz,1h),5.61(d,j＝10.0hz,1h),5.19(dddd,j＝7.4,5.9,2.9,1.5hz,1h),4.00(q,j＝7.0hz,2h),3.65(s,3h),3.18(d,j＝7.4hz,2h),1.65(dd,j＝3.4,1.4hz,6h),1.49
–
1.25(m,9h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ160.83,154.84,154.52,142.96,132.32,131.08,130.28,130.13,127.85,125.59,125.14,124.14,123.75,122.28,116.92,114.85,114.40,77.23,63.63,63.43,28.05,27.99,25.80,17.89,14.74.
[0089]
化合物wr030：
[0090]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.01(d,j＝15.2hz,1h),7.97
–
7.76(m,3h),7.42
–
7.12(m,3h),6.46(d,j＝10.0hz,1h),5.89(d,j＝10.0hz,1h),5.40(t,j＝7.4hz,1h),3.70(s,3h),3.21(d,j＝7.4hz,2h),2.41(s,3h),1.65(s,6h),1.44(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ192.02,162.30,157.50,145.11,137.63,132.25,131.81,128.9,128.50,128.32,128.18,128.01,126.43,123.74,118.72,116.14,114.43,85.5,62.21,28.50,28.09,24.82,21.33,18.91.
[0091]
实施例2化合物wr001-wr020的制备
[0092]
1、化合物wr001-wr020的制备方法
[0093]
1)化合物wr010和wr011的制备
[0094][0095]
在冰浴下，将化合物a(370mg，0.953mmol)和rose bengal(97mg，0.095mmol)用无水二氯甲烷溶解后，置于50ml圆底烧瓶中搅拌，将体系置于500w白炽灯光照下，用tlc检测反应，待反应完全后，向体系中加入三苯基膦(374.8mg，1.43mmol),继续用tlc检测反应，待反应完全后，在体系中加入200ml乙酸乙酯,反应液用饱和氯化钠溶液(100ml
×
3)洗涤萃取，收集有机相经干燥剂无水硫酸钠处理后，过滤浓缩。粗产品经快速硅胶色谱柱纯化，得到白色固体化合物wr010(180mg,45％)和wr011(172mg,43％)。
[0096]
化合物wr010：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.73(d,j＝15.8hz,1h),7.62(dd,j＝6.7,2.9hz,2h),7.55(d,j＝15.9hz,1h),7.48(s,1h),7.40(dd,j＝5.1,1.9hz,3h),6.66(d,j＝10.0hz,1h),5.70(d,j＝10.0hz,1h),4.99(d,j＝1.9hz,1h),4.85(t,j＝1.7hz,1h),4.31(dd,j＝8.7,3.9hz,1h),3.75(s,3h),2.94(dd,j＝13.8,3.9hz,1h),2.71(dd,j＝13.8,8.7hz,1h),1.83(s,3h),1.49(d,j＝4.7hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.84,147.17,143.17,139.90,135.23,132.81,130.25,130.21,128.93,128.45,126.26,125.13,122.47,120.72,116.78,114.58,110.77,75.51,70.24,63.53,36.46,28.28,28.13,18.18.
[0097]
化合物wr011：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.75(d,j＝19.7hz,2h),7.66
–
7.60(m,2h),7.54(d,j＝15.8hz,1h),7.40(dd,j＝5.0,2.0hz,3h),6.95(d,j＝16.3hz,1h),6.74(d,j＝16.3hz,1h),6.65(d,j＝10.0hz,1h),5.73(d,j＝10.0hz,1h),5.23
–
4.99(m,2h),3.75(s,3h),1.98(s,3h),1.50(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.06,155.39,154.44,143.32,135.19,132.57,130.57,128.94,128.49,128.30,126.23,125.43,122.28,121.85,117.22,116.75,114.86,77.22,63.51,28.18,18.57.
[0098]
2)化合物wr001和wr015的制备
[0099]
[0100]
化合物wr001和wr015的制备步骤同化合物wr010和wr011的制备。
[0101]
化合物wr001：
[0102]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.78(d,j＝15.7hz,1h),7.66(dd,j＝6.4,2.6hz,1h),7.58(d,j＝15.7hz,1h),7.48(s,1h),7.40(dd,j＝5.1,1.8hz,2h),6.66(d,j＝10.0hz,1h),5.70(d,j＝10.0hz,1h),4.99(d,j＝1.8hz,1h),4.85(t,j＝1.7hz,1h),4.31(dd,j＝8.5,3.8hz,1h),3.75(s,3h),2.94(dd,j＝13.8,3.8hz,1h),2.71(dd,j＝13.8,8.5hz,1h),2.24(s,3h),1.83(s,3h),1.49(d,j＝4.7hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ192.54,159.37,157.37,147.40,133.33,131.81,130.25,130.11,128.62,128.36,126.14,124.33,121.57,120.34,117.38,113.78,110.65,74.61,70.54,63.28,35.38,28.33,28.11,18.18.
[0103]
化合物wr015：
[0104]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.63(d,j＝19.6hz,2h),7.61
–
7.55(m,1h),7.51(d,j＝15.8hz,1h),7.35(dd,j＝5.0,2.0hz,3h),6.65(d,j＝16.2hz,1h),6.54(d,j＝16.2hz,1h),6.39(d,j＝10.0hz,1h),5.72(d,j＝10.0hz,1h),5.21
–
4.93(m,2h),3.75(s,3h),2.35(s,3h),1.97(s,3h),1.53(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.18,156.59,152.42,143.32,132.19,131.57,130.57,128.94,128.24,128.11,125.78,125.23,122.18,121.78,118.35,116.56,113.78,76.54,63.31,28.18,27.76,18.57.
[0105]
3)化合物wr002和wr013的制备
[0106][0107]
化合物wr002和wr013的制备步骤同化合物wr010和wr011的制备。
[0108]
化合物wr002：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.69(d,j＝15.7hz,1h),7.57(d,j＝8.8hz,2h),7.49
–
7.33(m,2h),6.92(d,j＝8.8hz,2h),6.66(d,j＝10.0hz,1h),5.69(d,j＝10.0hz,1h),4.98(dt,j＝2.0,1.0hz,1h),4.84(t,j＝1.6hz,1h),4.31(dd,j＝8.6,3.9hz,1h),3.85(s,3h),3.74(s,3h),2.94(dd,j＝13.8,3.9hz,1h),2.71(dd,j＝13.8,8.7hz,1h),1.82(t,j＝1.1hz,3h),1.48(d,j＝4.9hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.01,161.48,154.93,147.18,143.23,132.71,130.17,130.14,127.93,125.38,124.06,122.33,116.85,114.55,114.40,110.74,77.26,75.53,63.45,55.42,36.49,28.25,28.11,18.19.
[0109]
化合物wr013：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.83
–
7.65(m,2h),7.62
–
7.53(m,2h),7.40
(d,j＝15.8hz,1h),7.00
–
6.88(m,3h),6.74(d,j＝16.3hz,1h),6.65(d,j＝10.0hz,1h),5.72(d,j＝10.0hz,1h),5.10(d,j＝2.2hz,1h),5.05(t,j＝1.8hz,1h),3.85(s,3h),3.75(s,3h),1.98(s,3h),1.50(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.26,161.53,155.20,154.17,143.39,142.50,132.47,130.52,130.22,128.19,127.89,125.68,124.05,122.16,121.93,117.12,116.81,114.84,114.40,77.13,63.42,55.43,28.15,18.57.
[0110]
4)化合物wr003和wr019的制备
[0111][0112]
化合物wr003和wr019的制备步骤同化合物wr010和wr011的制备。
[0113]
化合物wr003：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.67(dd,j＝15.8,2.2hz,1h),7.47
–
7.32(m,2h),7.29
–
7.24(m,1h),7.21(dd,j＝8.4,1.9hz,1h),6.89(dd,j＝8.3,2.1hz,1h),6.66(dd,j＝10.0,2.2hz,1h),5.70(dd,j＝10.0,2.2hz,1h),4.98(s,1h),4.85(q,j＝1.8hz,1h),4.31(dt,j＝5.8,2.9hz,1h),3.93(t,j＝2.7hz,6h),3.75(d,j＝2.1hz,3h),2.94(ddd,j＝13.8,4.0,2.2hz,1h),2.71(ddd,j＝13.9,8.6,2.2hz,1h),1.82(s,3h),1.48(dd,j＝5.2,2.2hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.08,155.02,154.92,151.23,149.25,147.17,143.58,132.68,130.19,128.18,125.38,124.31,122.99,122.35,116.82,114.55,111.14,110.75,110.17,77.26,75.53,63.47,56.02,55.98,36.47,28.25,28.11,18.19.
[0114]
化合物wr019：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.82
–
7.56(m,2h),7.37(dd,j＝15.7,2.8hz,1h),7.21(dt,j＝8.4,2.4hz,1h),7.14(t,j＝2.4hz,1h),6.99
–
6.82(m,2h),6.74(dd,j＝16.3,2.8hz,1h),6.65(dd,j＝10.0,2.8hz,1h),5.72(dd,j＝10.0,2.8hz,1h),5.19
–
4.99(m,2h),3.93(t,j＝3.4hz,6h),3.75(d,j＝2.8hz,3h),1.98(d,j＝2.8hz,3h),1.49(d,j＝2.9hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.32,155.12,154.15,151.27,149.26,143.75,142.49,132.49,130.57,128.13,125.68,124.31,123.04,122.17,121.91,117.16,116.79,114.84,111.14,110.21,77.14,63.44,56.02,55.99,28.15,18.57.
[0115]
5)化合物wr004和wr014的制备
[0116][0117]
化合物wr004和wr014的制备步骤同化合物wr010和wr011的制备。
[0118]
化合物wr004：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.01(d,j＝1.7hz,1h),7.95
–
7.73(m,5h),7.66(d,j＝15.8hz,1h),7.55
–
7.45(m,3h),6.68(d,j＝10.0hz,1h),5.71(d,j＝10.0hz,1h),5.00(dt,j＝1.9,1.0hz,1h),4.86(t,j＝1.7hz,1h),4.33(dd,j＝8.7,3.9hz,1h),3.77(s,3h),2.96(dd,j＝13.8,4.0hz,1h),2.73(dd,j＝13.8,8.7hz,1h),1.84(t,j＝1.1hz,3h),1.50(d,j＝4.6hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.80,155.30,155.23,147.19,143.29,134.30,133.43,132.84,132.76,130.38,130.23,128.68,128.62,127.81,
127.22,126.70,126.46,125.21,123.90,122.52,116.80,114.59,110.78,77.26,75.51,63.57,63.54,36.47,28.29,28.15,18.19.
[0119]
化合物wr014：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.04
–
7.98(m,1h),7.95
–
7.75(m,6h),7.66(d,j＝15.8hz,1h),7.56
–
7.48(m,2h),6.97(d,j＝16.3hz,1h),6.76(d,j＝16.3hz,1h),6.68(d,j＝10.0hz,1h),5.74(d,j＝10.0hz,1h),5.18
–
5.00(m,2h),3.78(s,3h),1.99(d,j＝1.1hz,3h),1.51(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.04,155.40,154.45,143.46,142.48,134.32,133.43,132.72,132.59,130.61,130.45,128.69,128.63,128.33,127.81,127.25,126.72,126.44,125.50,123.91,122.33,121.88,117.22,116.77,114.89,77.24,63.54,28.18,18.57.
[0120]
6)化合物wr005和wr012的制备
[0121][0122]
化合物wr005和wr012的制备步骤同化合物wr010和wr011的制备。
[0123]
化合物wr005：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.65(d,j＝15.9hz,1h),7.55
–
7.38(m,6h),6.64(d,j＝10.0hz,1h),5.70(d,j＝10.0hz,1h),5.06
–
4.90(m,1h),4.84(t,j＝1.7hz,1h),4.31(dd,j＝8.7,3.9hz,1h),3.73(s,3h),2.94(dd,j＝13.8,3.9hz,1h),2.70(dd,j＝13.8,8.7hz,1h),1.82(d,j＝1.2hz,3h),1.48(d,j＝4.4hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.41,155.40,155.36,147.17,141.53,134.19,132.83,132.15,130.26,129.76,126.82,124.93,124.40,122.62,116.70,114.56,110.76,75.45,63.54,36.41,28.28,28.14,18.16.
[0124]
化合物wr012：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.77(s,1h),7.66(d,j＝15.8hz,1h),7.58
–
7.45(m,5h),6.95(d,j＝16.3hz,1h),6.73(d,j＝16.3hz,1h),6.64(d,j＝10.0hz,1h),5.73(d,j＝10.0hz,1h),5.10(d,j＝2.1hz,1h),5.06(s,1h),3.74(s,3h),1.98(s,3h),1.50(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.64,155.44,154.61,142.44,141.68,134.16,132.66,132.16,130.64,129.80,128.31,126.79,125.24,124.46,122.42,121.80,117.26,116.66,114.86,77.28,77.24,63.52,28.17,18.54.
[0125]
7)化合物wr006和wr016的制备
[0126][0127]
化合物wr006和wr016的制备步骤同化合物wr010和wr011的制备。
[0128]
化合物wr006:1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.69(d,j＝15.8hz,1h),7.65
–
7.54(m,2h),7.47(t,j＝7.7hz,2h),7.09(td,j＝8.6,1.3hz,2h),6.65(dd,j＝10.0,1.3hz,1h),5.70(dd,j＝10.0,1.3hz,1h),4.98(s,1h),4.85(q,j＝1.6hz,1h),4.31(dd,j＝8.8,3.9hz,1h),3.74(d,j＝1.3hz,3h),2.94(dd,j＝13.8,3.9hz,1h),2.71(dd,j＝13.8,8.7hz,1h),
1.82(s,3h),1.48(d,j＝4.6hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.59,165.17,162.67,155.29,147.17,141.79,132.79,131.49,131.45,130.31,130.24,126.00,125.05,122.55,116.73,116.17,115.95,114.57,110.76,75.48,63.53,36.43,28.28,28.14,18.18.
[0129]
化合物wr016:1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.76(d,j＝2.4hz,1h),7.70(dd,j＝15.8,2.4hz,1h),7.61(ddd,j＝8.3,5.3,2.4hz,2h),7.47(dd,j＝15.9,2.5hz,1h),7.09(td,j＝8.7,2.5hz,2h),6.95(dd,j＝16.3,2.5hz,1h),6.74(dd,j＝16.3,2.5hz,1h),6.64(dd,j＝10.0,2.5hz,1h),5.73(dd,j＝10.0,2.5hz,1h),5.19
–
5.02(m,2h),3.74(d,j＝2.4hz,3h),2.06
–
1.93(m,3h),1.50(d,j＝2.5hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.82,165.20,162.70,155.37,154.50,142.46,141.94,132.61,131.46,131.42,130.63,130.37,130.28,128.27,125.96,125.35,122.35,121.83,117.25,116.70,116.19,115.97,114.87,77.25,63.51,28.17,18.56.
[0130]
8)化合物wr007和wr018的制备
[0131][0132]
化合物wr007和wr018的制备步骤同化合物wr010和wr011的制备。
[0133]
化合物wr007：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.67(d,j＝15.8hz,1h),7.52(dd,j＝23.5,8.1hz,4h),7.37(dd,j＝8.5,1.7hz,2h),6.65(d,j＝9.9hz,1h),5.71(d,j＝9.9hz,1h),4.99(s,1h),4.85(d,j＝1.9hz,1h),4.31(dd,j＝8.7,3.8hz,1h),3.74(d,j＝1.6hz,3h),2.94(dd,j＝13.7,3.8hz,1h),2.71(dd,j＝13.8,8.7hz,1h),1.83(s,3h),1.49(d,j＝4.5hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.43,155.38,147.17,141.50,136.07,133.76,132.82,130.26,129.55,129.19,126.73,124.97,122.60,116.71,114.57,110.76,77.23,75.47,63.54,36.42,28.28,28.14,18.16.
[0134]
化合物wr018：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.77(s,1h),7.69(d,j＝15.8hz,1h),7.59
–
7.52(m,3h),7.36(d,j＝1.6hz,2h),6.95(d,j＝16.3hz,1h),6.74(d,j＝16.3hz,1h),6.62(s,1h),5.73(d,j＝10.1hz,1h),5.08(d,j＝17.8hz,2h),3.74(d,j＝1.2hz,3h),1.98(s,3h),1.50(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.66,155.43,154.59,142.45,141.63,136.12,133.73,132.65,130.64,129.59,129.20,128.31,126.70,125.27,122.40,121.80,117.26,116.67,114.86,77.23,63.52,28.17,18.54.
[0135]
9)化合物wr008和wr017的制备
[0136][0137]
化合物wr008和wr017的制备步骤同化合物wr010和wr011的制备。
[0138]
化合物wr008：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.63(d,j＝15.7hz,1h),7.46
–
7.31(m,2h),6.84(s,2h),6.66(d,j＝10.0hz,1h),5.70(d,j＝10.0hz,1h),4.99(dd,j＝1.9,1.0hz,
1h),4.85(t,j＝1.7hz,2h),3.90(d,j＝5.5hz,9h),3.74(s,3h),2.94(dd,j＝13.8,3.9hz,1h),2.71(dd,j＝13.8,8.7hz,1h),1.82(d,j＝1.1hz,3h),1.49(d,j＝4.9hz,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ190.94,155.10,153.49,147.18,143.46,140.24,132.71,130.70,130.25,125.66,125.21,122.46,116.77,114.55,110.75,105.64,75.51,63.50,61.01,56.24,36.43,28.27,28.12,18.18.
[0139]
化合物wr017：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.74(s,1h),7.64(d,j＝15.7hz,1h),7.39(d,j＝15.7hz,1h),6.95(d,j＝16.3hz,1h),6.85(s,2h),6.74(d,j＝16.4hz,1h),6.64(s,1h),5.73(d,j＝10.0hz,1h),5.27
–
4.98(m,2h),3.90(d,j＝6.4hz,9h),3.75(s,3h),1.98(s,3h),1.50(s,6h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.19,153.50,143.62,142.46,140.22,138.32,132.57,130.66,130.62,128.16,125.67,125.51,121.85,117.19,116.74,114.83,105.70,77.23,77.19,63.46,61.00,56.25,31.58,28.15,22.65,18.54,14.11.
[0140]
10)化合物wr009和wr020的制备
[0141][0142]
化合物wr009和wr020的制备步骤同化合物wr010和wr011的制备。
[0143]
化合物wr009：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.62(d,j＝15.7hz,1h),7.56
–
7.45(m,2h),7.40
–
7.29(m,2h),6.91
–
6.77(m,2h),6.59(dd,j＝10.0,1.6hz,1h),5.63(dd,j＝10.0,1.6hz,1h),4.92(s,1h),4.78(d,j＝2.2hz,1h),4.24(dd,j＝8.7,3.8hz,1h),4.01(qd,j＝6.9,1.5hz,2h),3.67(s,3h),2.87(dd,j＝13.8,3.8hz,1h),2.64(dd,j＝13.8,8.7hz,1h),1.75(s,3h),1.49
–
1.38(m,6h),1.36(td,j＝7.0,1.6hz,3h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3δ191.04,160.91,155.07,154.90,147.17,143.33,132.69,130.18,130.13,127.74,125.42,123.93,122.30,116.86,114.87,114.55,110.73,77.23,75.54,63.64,63.44,36.49,28.25,28.11,18.17,14.74.
[0144]
化合物wr020：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.70
–
7.59(m,2h),7.50(d,j＝8.8hz,2h),7.32(d,j＝15.8hz,1h),6.95
–
6.79(m,3h),6.73
–
6.53(m,2h),5.65(d,j＝10.0hz,1h),5.15
–
4.93(m,2h),4.01(q,j＝7.0hz,2h),3.68(s,3h),1.91(s,3h),1.43(s,6h),1.39
–
1.31(m,3h).
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ191.28,160.95,155.18,154.15,143.49,142.50,132.46,130.51,130.24,128.18,127.70,125.71,123.92,122.13,121.94,117.11,116.83,114.88,114.84,77.24,77.12,63.66,63.41,28.15,18.57,14.75.
[0145]
实施例3部分化合物抗炎活性筛选
[0146]
1、抗炎活性筛选方法
[0147]
1)实验材料
[0148]
细胞：树突状细胞(dc2.4)、巨噬细胞(raw264.7)
[0149]
细胞因子试剂盒：il-6检测试剂盒、tnf-α检测试剂盒
[0150]
刺激物：脂多糖(lps)
[0151]
阳性对照：地塞米松(dex)
[0152]
溶剂：二甲基亚砜(dmso)
[0153]
2)实验步骤
[0154]
细胞培养：分别复苏dc2.4细胞和raw264.7细胞于t75细胞培养瓶中，并在37℃5％co2的恒温培养箱中培养，当细胞培养瓶中细胞密度达99％以上即细胞几乎长满时进行传代处理，至少传代2次。然后分别将dc2.4细胞和raw264.7细胞铺在24孔细胞培养板中，每孔的细胞浓度为0.5
×
106个，过夜培养使细胞充分贴壁。
[0155]
药物处理：实验组和阳性对照组的细胞中分别加入20μm的化合物和dex，阴性对照只加入溶解化合物时的溶剂dmso，在37℃5％co2的恒温培养箱中孵育1h，然后实验组和阳性对照组每孔再加入5μg/ml的lps孵育12h，收集细胞上清液，用于细胞因子tnf-α、il-6含量的检测实验。
[0156]
细胞因子检测：用tnf-α、il-6的elisa试剂盒检测血清中的细胞因子水平。向96孔板中加入100μl的tnf-α、il-6的捕获抗体溶液，4℃孵育过夜。wash buffer洗涤3次，加200μl/孔的assay diluent a封闭，37℃1h，洗涤3次。加100μl/孔的tnf-α、il-6标准品和样品，37℃2h，洗涤3次，加100μl稀释后的tnf-α、il-6抗体溶液，37℃1h，洗涤3次，加100μl的avidin-hrp溶液，室温30min，洗涤3次，加100μl tmb，室温避光30min。加100μl的终止液来终止反应。15min内用酶标仪读取450nm处的吸光度，根据标准曲线计算细胞因子水平。
[0157]
2、部分化合物筛选实验结果
[0158]
实验结果如图1和图2所示，化合物wr001-wr022可下调lps刺激dc2.4细胞后tnf-α和il-6的含量。
[0159]
实验结果如图3和图4所示，化合物wr001-wr022可下调lps刺激raw264.7细胞后tnf-α和il-6的含量。
[0160]
通过使用lps刺激免疫细胞(dc2.4、raw264.7)建立细胞炎症模型，检测相同浓度下化合物wr001-wr022的抗炎(下调tnf-α、il-6含量)效果，结果发现几乎所有的查尔酮类化合物都具有显著地抗炎性细胞因子的作用，其中wr006、wr010和wr021的抗炎性细胞因子的效果最好，且抑制效果优于阳性对照地塞米松组。
[0161]
3、化合物wr006、wr010和wr021最佳浓度筛选实验结果
[0162]
通过使用lps刺激免疫细胞dc2.4建立细胞炎症模型，检测查尔酮类化合物wr006、wr010和wr021的抑制tnf-α(图5)和il-6(图6)含量效果，发现这三种查尔酮类化合物不同浓度(20μm、10μm、5μm)下都具有显著地抗炎性细胞因子的作用，其中化合物wr010的抗炎性细胞因子的效果最好，而且，随着药物浓度的增加，抑制效果也逐渐增加，并且化合物wr006、wr010和wr021在这三种浓度下的抗炎效果均优于阳性对照dex的最大浓度组。
[0163]
4、化合物wr010对lps诱导的炎症模型小鼠的治疗实验
[0164]
1)实验材料：c57bl/6j雄性小鼠，6-8周，体重20-25g，所有小鼠均在南开大学spf级别实验动物中心无特定病原体、湿度和温度适中的条件下饲养。
[0165]
地塞米松(dex)，脂多糖(lps)，二甲基亚砜(dmso)，0.9％氯化钠注射液，1ml无菌注射器，tnf-α检测试剂盒，il-6检测试剂盒，il-1β检测试剂盒。
[0166]
2)实验方法
[0167]
表1.血清tnf-α、il-6、il-1β含量检测实验方案
[0168][0169][0170]
3)实验结果
[0171]
实验结果如图7所示，通过建立lps小鼠炎症模型检测查尔酮类化合物wr010对小鼠血清中炎症因子的抑制效果，发现：
[0172]
①
lps+低浓度wr010(12.5mg/kg)组小鼠血清中的炎性因子tnf-α、il-6、il-1β水平与lps组对比无显著性差异，说明wr010没有显著性抗炎效果；lps+中浓度wr010(25mg/kg)组和高浓度wr010(50mg/kg)组小鼠血清中的炎性因子tnf-α、il-6、il-1β水平与lps组对比具有显著性差异，而且随着wr010剂量的增加，它的抗炎水平逐渐增加。
[0173]
②
lps+高浓度wr010(50mg/kg)组与阳性对照组lps+dex的三个浓度组相比效果相当。
[0174]
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。