一种槐定碱衍生物及其制备方法与应用

1.本发明属于药物化学领域，具体涉及一种槐定碱衍生物及其制备方法与应用。


背景技术：

2.夏季和秋季都是蚊虫繁殖和出没的季节，在中国以及东南亚地区中华按蚊、白纹伊蚊以及尖音库蚊等蚊种最为常见，其中，白纹伊蚊，也被称为亚洲虎蚊，具有很强的生命力和抗寒能力，繁殖传播速度快，活跃且凶猛，是东南亚和中国常见的蚊种，也是各种病原体主要的携带者和传播者，严重危害和影响着人们的生活和健康。如2014年在广东地区爆发的登革热疫情，就是因为伊蚊媒介(白纹伊蚊)的传播导致的登革热，累计感染该病的患者多达3万人。因此，蚊虫的防治需要引起社会各界的重视，全面深入了解蚊虫引起的危害，积极健全各种防蚊控蚊机制和方案，以减少蚊虫带来的健康危害和经济损失。
3.槐定碱属于苦参类生物碱，由两个哌啶环通过三价氮原子的增稠形成。槐定碱母体结构骨架简单，来源易得，是一种新型的具有潜力的抗蚊药物。
4.目前，槐定碱在抗蚊领域的应用较少，且其作用机制尚不明确。对于槐定碱的研究主要集中在抗癌领域，对于抗蚊领域的研究较少，对于槐定碱衍生物在抗蚊领域的研究更加稀少。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供一种槐定碱衍生物及其制备方法与应用，该槐定碱衍生物应用于抗蚊时，具有良好的杀蚊效果。
6.为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：
7.第一方面，本发明提供了一种槐定碱衍生物，所述槐定碱衍生物的结构式如式(ⅰ)所示：
[0008][0009]
本发明所述的槐定碱衍生物以槐定碱作为母体结构，通过在槐定碱母体结构的c14位上进行结构修饰，可合成一系列的目标衍生物。由于c14位上接枝的活性基团的不同，所得的槐定碱衍生物对白纹伊蚊幼虫以及成蚊的杀蚊活性存在差异。发明人通过实验发现，当c14位上引入α-萘结构时，可以有效提高槐定碱母体化合物的杀蚊活性。本发明所述的槐定碱衍生物应用于杀灭白纹伊蚊幼虫时，幼虫死亡率最高可达90％。
[0010]
第二方面，本发明提供了上述槐定碱衍生物的制备方法，其包括如下步骤：
[0011]
(1)在保护气环境下，将n,n-二取代的酰胺和酰氯于有机溶剂反应形成亚胺盐，然后加入槐定碱反应形成亚胺中间体，再进行水解制得中间体a，所述中间体a的结构式如式(ⅱ)所示；
[0012]
(2)在碱性溶液中，将盐酸羟胺与步骤(1)所得的中间体a发生肟化反应制得中间体b，所述中间体b的结构式如式(ⅲ)所示；
[0013]
(3)将步骤(2)所得的中间体b与1-萘甲酸在催化剂和缩合剂作用下于有机溶剂中发生酯化反应，即得所述槐定碱衍生物；
[0014][0015]
本发明所述制备方法通过多步制得所述槐定碱衍生物。首先，以槐定碱为原料，在无水无氧条件下，槐定碱在n,n-二取代的酰胺和酰氯形成的亚胺盐的作用下合成中间体a；接着中间体a在盐酸羟胺的作用下在槐定碱的c14位引入了一个肟酯结构形成中间体b；中间体b与1-萘甲酸在所述催化剂和缩合剂的作用下，通过一系列的酯化反应，在肟酯上引入了侧链基团，制得的槐定碱衍生物具有良好的杀蚊活性。上述制备方法所制得的目标产物产率高，易分离纯化，最后制得的中间体a、中间体b和所述槐定碱衍生物的产率在88％以上。
[0016]
优选地，所述步骤(1)中，所述n,n-二取代的酰胺为n,n-二甲基甲酰胺；所述酰氯为三氯氧磷；所述有机溶剂为二氯甲烷。
[0017]
优选地，所述步骤(1)中，所述槐定碱与三氯氧磷的摩尔比为5：(10～20)。
[0018]
在制备中间体a的反应过程中，本发明先通过n,n-二甲基甲酰胺(dmf)和三氯氧磷(pocl3)生成n,n-二甲基氯化酰胺，再与槐定碱反应生成亚胺中间体，然后进行水解制得中间体a。其中三氯氧磷的用量不宜过多，否则残余过多会增加反应体系的危险性，过多的三氯氧磷的残留也不利于后续产品的分离纯化。在上述用量范围内时，所得中间体a产率高，同时更易纯化。
[0019]
优选地，所述步骤(2)中，所述中间体a与盐酸羟胺的摩尔比为(1～1.2)：10；所述步骤(3)中，所述中间体b、1-萘甲酸、催化剂和缩合剂的摩尔比为1:1：(1.2～2)：(1.2～2)。
[0020]
优选地，所述步骤(1)中，所述槐定碱与三氯氧磷的摩尔比为5：15；所述步骤(2)中，所述中间体a与盐酸羟胺的摩尔比为1：10；所述步骤(3)中，所述中间体b、1-萘甲酸、催化剂和缩合剂的摩尔比为1:1：(1.2～1.5)：(1.2～1.5)。各原料选用此配比时，制得的中间体和目标槐定碱衍生物产率可达90％。
[0021]
优选地，所述步骤(1)中，所述保护气为氮气或惰性气体。制备中间体a的反应需在无氧条件下进行，以保证目标产物的生成。
[0022]
优选地，所述步骤(1)中，所述形成亚胺中间体的反应温度为0～10℃，反应时间为8～12h；所述水解时反应体系的ph值为8～9，水解温度为50～60℃，水解时间为2～3h。
[0023]
优选地，所述步骤(2)中，所述肟化反应的温度为0～10℃，反应时间为8～12h；所述步骤(3)中，所述酯化反应的温度为室温，反应时间为2～5h。
[0024]
优选地，所述步骤(3)中，所述酯化反应的温度为室温，反应时间为3h。
[0025]
优选地，所述步骤(1)中，所述水解时反应体系的ph值使用氢氧化钠调节。
[0026]
优选地，所述步骤(2)中，所述碱性溶液为氢氧化钠溶液；所述肟化反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂为甲醇。氢氧化钠溶液用来中和盐酸羟胺中的盐酸，为肟化反应提供有利环境。
[0027]
优选地，所述步骤(3)中，所述催化剂为1-羟基苯并三唑(hobt)、4-二甲氨基吡啶(dmap)中的任意一种；所述缩合剂为1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺(edci)、二环己基碳二亚胺(dcc)中的任意一种。当使用dcc作为缩合剂时，后续产物分离难度较大。当选用催化剂为hobt，缩合剂为edci时，所得槐定碱衍生物产物更易分离，具有较高的产率。中间体b在所述1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺(edci)和1-羟基苯并三唑(hobt)的作用下，通过酯化反应，在槐定碱的c14位引入α-萘结构，获得所述槐定碱衍生物。
[0028]
优选地，所述中间体a、中间体b和所述槐定碱衍生物的获得还经过分离纯化处理。
[0029]
分离纯化处理包括：先去除残余溶剂，使用乙酸乙酯萃取，得有机相，再使用无水mgso4干燥，过滤，减压浓缩后即可得到粗产物。然后用硅胶色谱柱层析纯化得到纯净的中间体或目标产物，其中洗脱剂组成：v(甲醇)：v(二氯甲烷)＝1：8。经过分离纯化处理的中间体和所述槐定碱衍生物产率在88％以上。
[0030]
第三方面，本发明提供了上述槐定碱衍生物在抗蚊领域中的应用。
[0031]
将上述槐定碱衍生物应用于杀灭白蚊伊蚊幼虫时，由于在槐定碱母体结构上引入了稠环片段α-萘，所得槐定碱衍生物对幼虫的致死率在较高浓度下可以达到90％，所得槐定碱衍生物具有良好的杀蚊效果。在使用浓度为1000ppm时，中间体a的幼虫致死率小于10％，中间体b对白蚊伊蚊幼虫的半致死浓度lc50值为527.01ppm，而目标槐定碱衍生物的半致死浓度lc50值为339.98ppm。目标槐定碱衍生物的灭蚊活性较为突出。
[0032]
通过探究目标槐定碱衍生物对白蚊伊蚊幼虫的抑制活性机理，发现目标槐定碱衍生物在测试浓度1.25-250ppm的范围内对乙酰胆碱酯酶均有抑制效果。在浓度为250ppm时抑制率可达到63.16％，在浓度为1.25ppm时，对乙酰胆碱酯酶的抑制率仍可达到5.47％。随着槐定碱衍生物浓度的增加，白蚊伊蚊幼虫体内的乙酰胆碱抑制率也呈现递增趋势。
[0033]
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0034]
(1)本发明提供了一种槐定碱衍生物，所述槐定碱衍生物应用于杀灭白蚊伊蚊幼虫时，在槐定碱衍生物浓度为339.98ppm时，幼虫致死率达50％，为槐定碱衍生物应用于蚊虫防治提供了新选择。
[0035]
(2)本发明提供了所述槐定碱衍生物的制备方法，该方法能够制得具有不同活性侧链基团的槐定碱衍生物。本发明所述的槐定碱衍生物在结构中引入了稠环片段α-萘，将其应用于杀蚊，在槐定碱衍生物浓度为700ppm时的幼虫死亡率可达到90％。
附图说明
[0036]
图1为本发明实施例1中的中间体a的核磁共振氢谱图。
[0037]
图2为本发明实施例1中的中间体a的核磁共振碳谱图。
[0038]
图3为本发明实施例1中的中间体b的核磁共振氢谱图。
[0039]
图4为本发明实施例1中的中间体b的核磁共振碳谱图。
[0040]
图5为本发明实施例1中的目标槐定碱衍生物的核磁共振氢谱图。
[0041]
图6为本发明实施例1中的目标槐定碱衍生物的核磁共振碳谱图。
[0042]
图7为本发明实施例1中的目标槐定碱衍生物对白纹伊蚊ⅳ龄幼虫的致死率曲线图。
[0043]
图8为本发明实施例1中的中间体b对白纹伊蚊ⅳ龄幼虫的致死率曲线图。
[0044]
图9为本发明实施例1中的目标槐定碱衍生物对白纹伊蚊ⅳ龄幼虫体内乙酰胆碱酯酶抑制率曲线图。
具体实施方式
[0045]
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围及实施方式不限于此。
[0046]
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径获得的试剂和材料。
[0047]
实施例1
[0048]
本发明槐定碱衍生物的一种实施例，本实施例所述槐定碱衍生物的结构式如下所示：
[0049][0050]
本实施例所述槐定碱衍生物的合成路径如下所示：
[0051][0052]
本实施例所述槐定碱衍生物的制备方法包括如下步骤：
[0053]
1、中间体a的合成
[0054]
取250ml双口瓶，放入烘箱预干燥30分钟。向双口瓶中加入磁子后，用n2置换瓶中的空气，创造无水无氧条件。在0℃下，用注射器向双口瓶中加入1.2ml无水二甲基甲酰胺(dmf)和5ml无水ch2cl2(dcm)作溶剂，接着用注射器向反应体系中缓慢加入15mmolpocl3溶液，反应体系在0℃下搅拌1小时。然后，将5mmol槐定碱溶于15ml无水ch2cl2溶液中，并在0℃条件下用注射器逐滴地滴加到反应体系中搅拌，将反应温度缓慢升至室温，tlc监测反应。约9个小时后反应完成，将混合物减压真空浓缩，除去多余的pocl3和大量的dcm溶液。加入5ml冰水后，用质量分数为40％的naoh溶液将反应体系的ph值调为8～9。随后，反应体系在60℃水解2小时并用tlc监测反应。将溶液冷却后，除去溶剂，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，用无水mgso4干燥，过滤，减压浓缩后即可得到粗产物。用硅胶色谱柱层析纯化，洗脱剂：v(甲醇)：v(二氯甲烷)＝1：8，得到淡黄色油状化合物a(即中间体a)，产率92％。
[0055]
中间体a表征如下：1h nmr(500mhz,cdcl3)δ9.64(s,1h),3.63(dd,j＝12.7,5.6hz,1h),3.28(td,j＝7.9,4.0hz,1h),3.13
–
3.05(m,1h),2.90
–
2.84(m,1h),2.78(dt,j＝11.8,6.8hz,1h),2.37(ddd,j＝15.9,8.9,3.5hz,2h),2.31
–
2.24(m,2h),2.22(dd,j＝11.1,8.0hz,1h),2.12
–
2.02(m,1h),1.84(tdd,j＝13.3,9.6,5.9hz,5h),1.71(qt,j＝12.4,3.7hz,1h),1.60(ddd,j＝13.4,8.4,3.5hz,1h),1.50(qd,j＝11.0,5.2hz,4h),1.05(qd,j＝12.9,4.2hz,1h)。
[0056]
13c nmr(125mhz,cdcl3)δ187.38,152.71,110.02,61.68,60.41,55.31,52.21,48.78,39.78,30.07,24.81,22.88,22.76,22.11,19.85。
[0057]
2、中间体b的合成
[0058]
称取5.4mmol的naoh溶于10ml的水溶液中，向溶液中加入5ml甲醇和5.4mmol盐酸羟胺，溶液混合均匀后，在0℃条件下，缓慢加入0.54mmol中间体a化合物并搅拌，将反应温
度逐渐恢复到室温，tlc监测反应。搅拌约9小时后反应完全，除去溶剂，用乙酸乙酯萃取3次，用无水mgso4干燥，过滤，减压浓缩即可得到粗产物。用硅胶色谱柱层析纯化，洗脱剂：v(甲醇)：v(二氯甲烷)＝1：8，得到淡黄色固体化合物b(即中间体b)，产率90％。
[0059]
中间体b表征如下：1h nmr(500mhz,cdcl3)δ10.90(s,1h),8.20(s,1h),3.52(dd,j＝11.6,3.5hz,1h),3.01
–
2.91(m,4h),2.83(dd,j＝10.9,4.8hz,1h),2.52(d,j＝11.3hz,1h),2.40(dd,j＝17.2,6.3hz,1h),2.31
–
2.19(m,2h),2.16(t,j＝11.5hz,1h),2.11
–
2.05(m,1h),1.96
–
1.68(m,6h),1.53
–
1.43(m,2h),1.33(d,j＝13.0hz,1h),1.09(qd,j＝12.9,4.1hz,1h)。
[0060]
13c nmr(125mhz,cdcl3)δ149.67,142.79,113.56,63.77,59.06,54.08,51.11,45.12,39.39,29.29,25.92,25.85,25.40,25.27,22.19,18.62。
[0061]
3、目标化合物(槐定碱衍生物)的合成
[0062]
在50ml的圆底烧瓶中加入118.57mghobt和121.09mgedci，加入15mldcm充分溶解并在室温下搅拌3分钟。然后称取150mg中间体b化合物加入反应体系中搅拌，并用tlc监测反应。在室温下反应3小时后，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，用无水mgso4干燥，过滤，减压浓缩即可得到粗产物。用硅胶色谱柱层析纯化，洗脱剂：v(甲醇)：v(二氯甲烷)＝1：8，得到白色固体目标化合物(即所述槐定碱衍生物)，产率90％。
[0063]
目标化合物表征如下：1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.34(s,1h),8.04(d,j＝7.9hz,1h),7.90
–
7.84(m,1h),7.83
–
7.78(m,1h),7.57
–
7.48(m,2h),7.46
–
7.39(m,2h),4.18(s,2h),3.62
–
3.59(m,1h),3.12
–
2.96(m,4h),2.94(d,j＝11.9hz,1h),2.74(d,j＝11.2hz,1h),2.47(dd,j＝17.4,5.8hz,1h),2.37
–
2.18(m,3h),2.07(dd,j＝20.0,11.2hz,1h),1.89
–
1.69(m,5h),1.55
–
1.44(m,3h),1.13(td,j＝12.8,4.1hz,1h)。
[0064]
13c nmr(125mhz,cdcl3)δ169.35,156.42,146.88,133.91,132.19,130.07,128.80,128.28,128.12,126.55,125.92,125.59,123.98,109.60,59.58,54.73,51.61,45.88,40.03,38.02,29.65,26.16,25.55,25.41,24.68,23.01,19.19。
[0065]
实施例2
[0066]
本发明槐定碱衍生物的一种实施例。本实施例所述槐定碱衍生物的制备方法包括如下步骤：
[0067]
1、中间体a的合成
[0068]
取250ml双口瓶，放入烘箱预干燥30分钟。向双口瓶中加入磁子后，用n2置换瓶中的空气，创造无水无氧条件。在0℃下，用注射器向双口瓶中加入1.2ml无水二甲基甲酰胺(dmf)和5ml无水ch2cl2(dcm)作溶剂，接着用注射器向反应体系中缓慢加入10mmolpocl3溶液，反应体系在0℃下搅拌1小时。然后，将5mmol槐定碱溶于15ml无水ch2cl2溶液中，并在5℃条件下用注射器逐滴地滴加到反应体系中搅拌，将反应温度缓慢升至室温，tlc监测反应。约12个小时后反应完成，将混合物减压真空浓缩，除去多余的pocl3和大量的dcm溶液。加入5ml冰水后，用质量分数为40％的naoh溶液将反应体系的ph值调为8～9。随后，反应体系在60℃水解3小时并用tlc监测反应。将溶液冷却后，除去溶剂，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，用无水mgso4干燥，过滤，减压浓缩后即可得到粗产物。用硅胶色谱柱层析纯化，洗脱剂：v(甲醇)：v(二氯甲烷)＝1：8，得到淡黄色油状化合物a(即中间体a)，产率90％。
[0069]
2、中间体b的合成
[0070]
称取5.4mmol的naoh溶于10ml的水溶液中，向溶液中加入5ml甲醇和5.4mmol盐酸羟胺，溶液混合均匀后，在0℃条件下，缓慢加入0.6mmol中间体a化合物并搅拌，将反应温度逐渐恢复到室温，tlc监测反应。搅拌约8小时后反应完全，除去溶剂，用乙酸乙酯萃取3次，用无水mgso4干燥，过滤，减压浓缩即可得到粗产物。用硅胶色谱柱层析纯化，洗脱剂：v(甲醇)：v(二氯甲烷)＝1：8，得到淡黄色固体化合物b(即中间体b)，产率88％。
[0071]
3、目标化合物(槐定碱衍生物)的合成
[0072]
在50ml的圆底烧瓶中加入118.57mghobt和121.09mgedci，加入15mldcm充分溶解并在室温下搅拌3分钟。然后称取150mg中间体b化合物加入反应体系中搅拌，并用tlc监测反应。在室温下反应3小时后，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，用无水mgso4干燥，过滤，减压浓缩即可得到粗产物。用硅胶色谱柱层析纯化，洗脱剂：v(甲醇)：v(二氯甲烷)＝1：8，得到白色固体目标化合物(即所述槐定碱衍生物)，产率88％。
[0073]
实施例3
[0074]
本发明槐定碱衍生物的一种实施例。本实施例所述槐定碱衍生物的制备方法包括如下步骤：
[0075]
1、中间体a的合成
[0076]
取250ml双口瓶，放入烘箱预干燥30分钟。向双口瓶中加入磁子后，用n2置换瓶中的空气，创造无水无氧条件。在0℃下，用注射器向双口瓶中加入1.2ml无水二甲基甲酰胺(dmf)和5ml无水ch2cl2(dcm)作溶剂，接着用注射器向反应体系中缓慢加入20mmolpocl3溶液，反应体系在0℃下搅拌1小时。然后，将5mmol槐定碱溶于15ml无水ch2cl2溶液中，并在10℃条件下用注射器逐滴地滴加到反应体系中搅拌，将反应温度缓慢升至室温，tlc监测反应。约12个小时后反应完成，将混合物减压真空浓缩，除去多余的pocl3和大量的dcm溶液。加入5ml冰水后，用质量分数为40％的naoh溶液将反应体系的ph值调为8～9。随后，反应体系在60℃水解2小时并用tlc监测反应。将溶液冷却后，除去溶剂，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，用无水mgso4干燥，过滤，减压浓缩后即可得到粗产物。用硅胶色谱柱层析纯化，洗脱剂：v(甲醇)：v(二氯甲烷)＝1：8，得到淡黄色油状化合物a(即中间体a)，产率90％。
[0077]
2、中间体b的合成
[0078]
称取6mmol的naoh溶于10ml的水溶液中，向溶液中加入5ml甲醇和5.4mmol盐酸羟胺，溶液混合均匀后，在0℃条件下，缓慢加入0.54mmol中间体a化合物并搅拌，将反应温度逐渐恢复到室温，tlc监测反应。搅拌约12小时后反应完全，除去溶剂，用乙酸乙酯萃取3次，用无水mgso4干燥，过滤，减压浓缩即可得到粗产物。用硅胶色谱柱层析纯化，洗脱剂：v(甲醇)：v(二氯甲烷)＝1：8，得到淡黄色固体化合物b(即中间体b)，产率89％。
[0079]
3、目标化合物(槐定碱衍生物)的合成
[0080]
在50ml的圆底烧瓶中加入118.57mghobt和121.09mgedci，加入15mldcm充分溶解并在室温下搅拌3分钟。然后称取150mg中间体b化合物加入反应体系中搅拌，并用tlc监测反应。在室温下反应3小时后，用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，用无水mgso4干燥，过滤，减压浓缩即可得到粗产物。用硅胶色谱柱层析纯化，洗脱剂：v(甲醇)：v(二氯甲烷)＝1：8，得到白色固体目标化合物(即所述槐定碱衍生物)，产率88％。
[0081]
效果例1
[0082]
对实施例1制得的目标槐定碱衍生物进行杀蚊活性测试。
[0083]
以实验室饲养的白纹伊蚊ⅳ龄幼虫为对象进行杀蚊试验。
[0084]
实验方法：首先，以丙酮为溶剂，将目标化合物槐定碱衍生物稀释成1000、950、900、850、800、750、700、650、600、550、500、450、400、350、300、250、200、150、100、50ppm浓度的待测样品，得到20个浓度梯度的待测样品溶液，对每个浓度的待测样品溶液进行杀蚊活性测试。向24孔板的测试孔中放入5条幼虫，做4个复孔。用移液枪吸去多余的去离子水，再定量加入985μl干净的去离子水和5μl浓度为25mg/ml的饲料溶液，最后加入10μl的待测样品溶液，以不添加槐定碱衍生物的丙酮溶液作为空白对照组，以添加实施例1制得的中间体b的丙酮溶液作为对照组1，进行杀蚊活性测试，每组进行3次独立重复实验。将24孔板放入温度为28℃，相对湿度为80％，光照条件为光照：黑暗为12h：12h的恒温培养箱中培养。24h后用移液枪枪头轻触幼虫身体，若幼虫不动，则视为死亡，记录每个浓度的测试样品溶液对幼虫的致死率。根据槐定碱衍生物浓度和幼虫死亡率的关系建立毒力回归方程，计算出半致死浓度lc50值。
[0085]
考虑到幼虫之间的个体差异，实验空白对照组的幼虫死亡率不得超过5％，其致死率计算方法见下式：
[0086]
致死率(％)＝a1/b1
×
100％
[0087]
a1：24孔板中每个浓度的测试样品溶液中幼虫的死亡数量；
[0088]
b1：24孔板中每个浓度的测试样品溶液中幼虫的初始加入数量。
[0089]
测得不同浓度的目标槐定碱衍生物的杀蚊活性结果如图7和表1所示。测得实施例1制得的中间体b的杀蚊活性结果如图8和表2所示。
[0090]
表1实施例1制得槐定碱衍生物的浓度和幼虫死亡率的关系
[0091][0092]
表2实施例1制得中间体b的浓度和幼虫死亡率的关系
[0093][0094]
在对槐定碱衍生物灭蚊的预实验中发现，槐定碱母体化合物在浓度为1000ppm的最高幼虫致死率仅可达到10％，在测试浓度为1000ppm时，中间体a的幼虫致死率小于10％。由图7可知，目标槐定碱衍生物在槐定碱母体结构上引入了稠环片段α-萘，所得槐定碱衍生物对幼虫的致死率在较高浓度下可以达到90％以上。说明当在槐定碱母体结构的c14位上进行结构修饰引入α-萘结构时，可以有效提高槐定碱母体化合物的幼虫致死率。在槐定碱衍生物浓度低于100ppm时，杀蚊活性较低，随着浓度超过200ppm，幼虫死亡率快速上升，浓度为400ppm时，幼虫死亡率达到60％以上，继续增加槐定碱衍生物浓度，幼虫死亡率最高可达到90％。
[0095]
由图8可知，实施例1制得的中间体b在浓度低于400ppm时，中间体b对白纹伊蚊ⅳ龄幼虫不具有杀蚊活性，幼虫死亡率为0。浓度大于400ppm时，幼虫死亡率开始上升，当浓度
为500ppm时，幼虫死亡率达到50％，说明在较高的浓度下，中间体b具有一定的杀蚊活性，随着浓度超过600ppm，幼虫死亡率可达到80％以上，再增加中间体b的浓度，幼虫死亡率趋于平缓。
[0096]
根据毒力回归方程可得，实施例1制备的目标槐定碱衍生物的半致死浓度lc50值为339.98ppm，中间体b对白蚊伊蚊幼虫的致死率的半致死浓度lc50值为527.01ppm，表明制备的目标槐定碱衍生物在低浓度下具有更好的杀蚊活性。
[0097]
效果例2
[0098]
不同浓度梯度下的目标槐定碱衍生物对白蚊伊蚊幼虫体内乙酰胆碱酯酶抑制活性的影响测试。
[0099]
为了验证目标槐定碱衍生物对白蚊伊蚊幼虫的抑制活性机理，测试了实施例1制得的目标槐定碱衍生物对幼虫体内酶抑制活性的影响。
[0100]
实验方法：采用ellman法测定乙酰胆碱酯酶的活性，测定添加待测样品作用前后乙酰胆碱酯酶的活性变化。用丙酮溶液将实施例1制得的目标槐定碱衍生物稀释成不同的浓度梯度的待测样品，在室温振荡30s混匀。用移液枪移取79μl酶液置于96孔板中，分别移取各浓度的待测样品化合物1μl置于另一个新的96孔板中，空白对照组为加入1μl的丙酮溶液的对照组。于28℃下孵育10min。接着在避光条件下迅速加入10μl显色剂dtnb溶液和10μl底物aschi溶液。加样完成后，即刻将96孔板放入酶标仪中测定412nm波长下的od值，每隔1min测定一次数值，连续测定30次。根据不同浓度的槐定碱衍生物和抑制效果的关系进行曲线拟合，计算得到测试样品对白蚊伊蚊幼虫乙酰胆碱酯酶的半抑制浓度ic50值。
[0101]
实施例1制得的目标槐定碱衍生物对乙酰胆碱酯酶的抑制率测试结果如图9和表3所示。不同浓度的目标槐定碱衍生物与抑制效果的关系曲线拟合结果如表4所示。
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表3实施例1的槐定碱衍生物对乙酰胆碱酯酶的抑制率测试结果
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浓度(ppm)1.252.5512.5100125250抑制率(％)5.477.5211.5224.5142.0958.6263.16
[0104]
表4
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由表3可知，目标槐定碱衍生物在测试浓度1.25-250ppm的范围内对乙酰胆碱酯酶均有抑制效果。在浓度为250ppm时抑制率可达到63.16％，在最低浓度1.25ppm时，仍可达到5.47％的。随着槐定碱衍生物作用浓度的增加，白蚊伊蚊幼虫体内的乙酰胆碱抑制率也呈现递增趋势。通过不同浓度下槐定碱衍生物对乙酰胆碱抑制率关系的拟合曲线方程，可得目标槐定碱衍生物对乙酰胆碱酯酶的半抑制浓度ic50值为104.746ppm。由实验结果可知，目标衍生物的杀虫作用机制可能是抑制了幼虫体内的乙酰胆碱酯酶的活性。由于乙酰胆碱酯酶的酶活性降低，乙酰胆碱在幼虫体内大量堆积，幼虫神经受到过度刺激，胆碱能系统遭到破坏或者受阻而引起昆虫中毒甚至死亡。
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最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，对本领域的技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其他不
同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。