2,3-二氢喹唑啉-4（1H）-酮衍生物及其制备方法与应用

2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物及其制备方法与应用
技术领域
1.本发明专利涉及医药技术领域，尤其是指一种c2位取代的2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物及其制备和应用。


背景技术：

2.喹唑啉是一类重要的含氮杂环化合物。它广泛存在于各种生物碱和具有生物药理活性的有机分子中，喹唑啉类上市药物有10个，nda申请有2个，临床三期有2个，临床二期有25个，临床一期有17个。按照靶点来分:her家族抑制剂23个，vegfr抑制剂和tyms抑制剂各5个，src抑制剂和pi3k抑制剂各3个,jak2抑制剂、kif11抑制剂和aurkb抑制剂各2个，pdgfr抑制剂、fgfr4抑制剂、pkc抑制剂、b-raf抑制剂、smo抑制剂、tubulin抑制剂、top1抑制剂、parp抑制剂、crbn底物特异性的小分子调节剂、ikk抑制剂以及hdac抑制剂各1个，因而在抗肿瘤领域具有很好的开发前景。
3.因此，研发一种新的喹唑啉类化合物显得很有必要。


技术实现要素：

4.吴茱萸碱是一类从传统中药吴茱萸中分离得到的咔啉喹唑啉酮类生物碱，具有一定抗肿瘤活性，但不强【药学与临床研究，2017，25(3)：221-226】，发明人以吴茱萸碱为模型化合物，对吴茱萸碱c环开环并简化其结构，发现某些新型2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物具有一定抗肿瘤活性。但喹唑啉酮类化合物其大多数结构优化都是基于4(3h)-喹唑啉酮的2，3位的，而且其2-位取代基的长度对其药效有比较重要的作用【天然产物研究与开发，2015，27：1972-1978，1937；甘宜远，欧阳贵平，一类含吡啶基喹唑啉酮类衍生物合成及生物活性研究[d],贵州大学硕士研究生学位论文，2019】，我们进而在2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮c2位上引入不同的吲哚基、联苯基和萘环等基团考察其抗肿瘤活性，寻找抗肿瘤活性更好的新型2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物。
[0005]
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一，由此，在本发明的第一方面，本发明提供一种2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物，所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物的结构如式(i)所示：
[0006][0007]
其中，r选自联苯-4-基、4'-氯联苯-4-基、联苯-3-基、2-羟基萘-1-基、2-烯丙氧基萘-1-基、3-甲基-吲哚-2-基、吲哚-3-基、吲哚-5-基和吲哚-6-基中的一种。
[0008]
r为联苯-4-基时所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物为化合物1、r为4'-氯联苯-4-基时所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物为化合物2、r为联苯-3-基时所述2,3-二
氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物为化合物3、r为2-羟基萘-1-基时所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物为化合物4、r为2-烯丙氧基萘-1-基时所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物为化合物5、r为3-甲基-吲哚-2-基时所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物为化合物6、r为吲哚-3-基时所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物为化合物7、r为吲哚-5-基时所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物为化合物8、r为吲哚-6-基时所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物为化合物9。
[0009]
化合物1～9的结构式如下所示：
[0010][0011]
在本发明的第二方面，本发明提供一种在本发明第一方面所述的2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物和/或其药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0012]
在本发明的一个或多个实施例中，所述肿瘤选自肝癌、胶质瘤、肺癌、胰腺癌和黑色素瘤中的一种或多种。
[0013]
在本发明的一个或多个实施例中，所述药用盐由所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物与无机酸或有机酸反应得到；优选地，所述无机酸选自盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸和磷酸中的至少一种；所述的有机酸选自甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、草酸和酒石酸中的至少一种。
[0014]
在本发明的第三方面，本发明提供一种在本发明第一方面所述的2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物的制备方法，所述2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物由邻氨基苯甲酰胺和对应的醛rcho反应得到，反应式如下所示：
[0015][0016]
在本发明的一个或多个实施例中，反应过程中加入对甲基苯磺酸，控制所述反应温度为50～70℃。
[0017]
在本发明的一个或多个实施例中，所述反应在溶剂中进行，所述溶剂为醇，优选地，所述溶剂为乙醇。
[0018]
在本发明的第四方面，本发明提供一种药物制剂，所述药物制剂包含在本发明第一方面所述的2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物和/或其药用盐。
[0019]
在本发明的一个或多个实施例中，所述药物制剂的剂型为片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂、混悬剂、乳剂或植入剂。
[0020]
在本发明的一个或多个实施例中，本发明提供一种在本发明的第四方面所述的药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用；优选地，所述肿瘤选自肝癌、胶质瘤、肺癌、胰腺癌和黑色素瘤中的一种或多种。
[0021]
本发明的有益效果在于：
[0022]
1、本发明提供一种2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮的c2位衍生物，其对肝癌(hepg2)，胶质瘤(u251)，肺癌(a549)，胰腺癌(panc-1)和黑色素瘤(a375)等多种细胞株有较强的抑制作用，毒性小，优于5-氟尿嘧啶(5-fu)，其作用机制是主要作用于g2/m期。
[0023]
2、本发明的2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮的c2位衍生物急性毒性小，药物安全性高，可作为广谱抗肿瘤药物在临床应用；
[0024]
3、本发明的2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮的c2位衍生物可以制备成各种剂型抗肿瘤药物在临床应用。
附图说明
[0025]
图1为化合物8低浓度组、中浓度组、高浓度组、空白对照组小鼠肝组织(200
×
)病理切片对比结果图；
[0026]
图2为化合物8低浓度组、中浓度组、高浓度组、空白对照组小鼠肾组织(200
×
)病理切片对比结果图。
具体实施方式
[0027]
以下结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明，但下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。以下实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行，使用的方法如无特别说明，均为本领域公知的常规方法，使用的耗材和试剂如无特别说明，均为市场购得。除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。
[0028]
实施例1 2-(联苯-4-基)-2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮(化合物1)的合成
[0029][0030]
在100毫升圆底烧瓶中，分别加入邻氨基苯甲酰胺1.0克(7.34mmol)和4-苯基苯甲醛1.6克(8.81mmol)置于茄形瓶中，加15ml无水乙醇，磁力搅拌溶解，再加对甲基苯磺酸0.1克，于60℃反应至邻氨基苯甲酰胺耗尽。冷却至室温，搅拌下缓慢加水至有沉淀析出，置冰箱中过夜，过滤，沉淀用蒸馏水洗涤三次，真空干燥即得1.95克白色粉末，即为化合物1，产率：88.56％；熔点:222.0-223.1℃；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ8.32(d,j＝2.32hz,1h),7.64(m,5h),7.56(d,j＝7.96hz,2h),7.44(t,j＝7.79hz,2h),7.34(td,j＝7.33,1.26hz,1h),7.23(ddd,j＝8.50,7.20,1.54hz,1h),7.14(s,1h),6.75(d,j＝8.12hz,1h),6.66(t,j＝7.48hz,1h),5.78(s,1h)；
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ164.03,148.23,141.28,140.76,140.15,133.78,129.39,128.00,127.87,127.81,127.13,127.07,117.58,115.40,114.86,66.62；hrms(esi
+
):m/z calcd for c
20h16
n2o[m+h]
+
301.13409,found 301.13401。
[0031]
实施例2 2-(4'-氯联苯-4-基)-2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮(化合物2)的合成
[0032][0033]
将4'-氯联苯-4-甲醛替代实施例1中的4-苯基苯甲醛，合成方法同实施例1；得到化合物2，结构数据如下：白色固体，产率：80.7％；熔点:274.7-275.3℃；1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.33(d,j＝3.78hz,1h),7.67(d,j＝8.00hz,4h),7.60(t,j＝5.58hz,1h),7.55(d,j＝7.90hz,2h),7.49(d,j＝8.11hz,2h),7.23(t,j＝7.72hz,1h),7.15(s,1h),6.75(t,j＝5.48hz,1h),6.66(t,j＝7.47hz,1h),5.78(s,1h)；
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ163.98,148.17,141.72,139.34,138.92,133.79,132.91,129.33,128.88,127.91,127.76,127.03，117.61,115.40,114.86,66.46；hrms(esi
+
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20h15
n2ocl[m+h]
+
335.09512,found 335.09506。
[0034]
实施例3 2-(联苯-3-基)-2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮(化合物3)的合成
[0035][0036]
将联苯-3-甲醛替代实施例1中的4-苯基苯甲醛，合成方法同实施例1；得到化合物
3，结构数据如下：白色固体，产率：79.5％；熔点:141.4-143.1℃：1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ8.34(d,j＝2.31hz,1h),7.76(s,1h),7.61(td,j＝8.09,6.25hz,4h),7.45(m,4h),7.35(t,j＝7.44hz,1h),7.22(m,1h),7.16(s,1h),6.74(d,j＝8.10hz,1h),6.65(t,j＝7.49hz,1h),5.81(s,1h)；
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ164.08,148.29,142.66,140.60,140.36,135.08,133.78,129.41,128.03,127.78,127.40,127.10,126.29,125.82,117.64,115.43,114.85,66.84；hrms(esi
+
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20h16
n2o for[m+na]
+
323.1154844,found 323.11593。
[0037]
实施例4 2-(2-羟基萘-1-基)-2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮(化合物4)的合成
[0038][0039]
将2-羟基萘-1-甲醛替代实施例1中的4-苯基苯甲醛，合成方法同实施例1；得到化合物4，结构数据如下：白色固体，产率86.9％；熔点:173.9-174.2℃；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.09(s,1h),8.80(d,j＝8.71hz,1h),8.02(s,1h),7.80(dd,j＝8.56,5.13hz,2h),7.69(dd,j＝7.96,1.56hz,1h),7.39(t,j＝7.76hz,1h),7.26(dt,j＝17.97,7.21hz,2h),7.18(dd,j＝8.99,2.81hz,1h),6.86(s,1h),6.73(dd,j＝13.63,5.97hz,3h)；
13
cnmr(151mhz,dmso-d6)δ165.29,154.43,150.16,133.52,133.46，131.24,129.29,128.74,128.14,126.26,125.88,122.94,118.42,117.63,115.83,114.91,114.41,61.16；hrms(esi
+
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18h14
n2o2[m+h]
+
29 1.11335,found 291.11286。
[0040]
实施例5 2-(2-烯丙氧基萘-1-基)-2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮(化合物5)的合成
[0041][0042]
将2-烯丙氧基-1-萘醛替代实施例1中的4-苯基苯甲醛，合成方法同实施例1；得到化合物5，结构数据如下：产率：84.8％；熔点:290℃(分解)；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ8.93(d,j＝8.78hz,1h),8.10(s,1h),7.98(d,j＝9.03hz,1h),7.88(dd,j＝8.24,1.39hz,1h),7.70(dd,j＝7.73,1.67hz,1h),7.44(m,2h),7.37(ddd,j＝8.13,6.71,1.26hz,1h),7.25(td,j＝7.68,1.68hz,1h),6.91(s,1h),6.85(d,j＝2.29hz,1h),6.72(m,2h),6.06(ddt,j＝17.31,10.41,5.10hz,1h),5.39(dq,j＝17.22,1.76hz,1h),5.23(dq,j＝10.57,1.63hz,1h),4.72(dt,j＝5.12,1.69hz,2h)；
13
cnmr(151mhz,dmso-d6)δ165.10,155.13,149.96,134.20,133.58,132.93,131.69,130.07,128.79,128.15,126.78,126.03,124.00,118.64,117.98,117.64,115.69,114.86,114.83，70.62,61.0.hrms(esi
+
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21h18
n2o2[m+h]
+
331.14465，found 331.14458。
[0043]
实施例6 2-(3-甲基-吲哚-2-基)-2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮(化合物6)的合成
[0044][0045]
将3-甲基-吲哚-2-甲醛替代实施例1中的4-苯基苯甲醛，合成方法同实施例1；得到化合物6，结构数据如下：白色固体，产率：81.2％；熔点:197.8-198.8℃；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.08(s,1h),8.10(s,1h),7.66(d,j＝7.75hz,1h),7.48(d,j＝7.86hz,1h),7.33(d,j＝8.14hz,1h),7.26(t,j＝7.80hz,1h),7.08(t,j＝7.67hz,1h),6.97(m,2h),6.76(d,j＝8.16hz,1h),6.72(t,j＝7.62hz,1h),6.11(s,1h),2.27(d,j＝2.37hz,3h)；
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ164.37,148.93,136.03,133.66,132.31,128.43,127.88,122.19,118.90，118.74,117.87,115.55,114.96,111.86,108.86,60.83,8.80；hrms(esi
+
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17h15
n3o[m+h]
+
278.12934,found 278.12918。
[0046]
实施例7 2-(吲哚-3-基)-2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮(化合物7)的合成
[0047][0048]
将吲哚-3-甲醛替代实施例1中的4-苯基苯甲醛，合成方法同实施例1；得到化合物7，结构数据如下：白色固体，产率：85.8％；熔点:196.1-197.8；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.07(s,1h),8.14(s,1h),7.69(s,1h),7.51(m,2h),7.38(d,j＝7.5hz,1h),7.23(m,4h),6.99(t,j＝7.48hz,1h),6.66(q,j＝7.99hz,1h),6.02(d,j＝3.25hz,1h)；
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ164.37,148.93,136.03,133.66,132.31,128.43,127.88,122.19,118.90,118.74,117.87,115.55,114.96,111.86,108.86,60.83；hrms(esi
+
):m/z calcd for c
16h13
n3o[m+h]
+
264.11369,found 264.11350。
[0049]
实施例8 2-(吲哚-5-基)-2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮(化合物8)的合成
[0050][0051][0052]
将吲哚-5-甲醛替代实施例1中的4-苯基苯甲醛，合成方法同实施例1；得到化合物8，结构数据如下：白色固体，产率：83.2％；熔点:194.7-196.0℃；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),8.12(d,j＝2.21hz,1h),7.61(dd,j＝7.67,1.64hz,2h),7.39(d,j＝8.37hz,1h),7.34(q,j＝2.68hz,1h),7.26(dd,j＝8.46,1.74hz,1h),7.21(t,j＝7.62hz,1h),6.98
(s,1h),6.72(m,1h),6.65(td,j＝7.51,2.05hz,1h),6.42(t,j＝2.40hz,1h),5.79(d,j＝3.37hz,1h)；
13
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+
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16h13
n3o[m+h]
+
264.11369,found 264.11333。
[0053]
实施例9 2-(吲哚-6-基)-2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮(化合物9)的合成
[0054][0055]
将吲哚-6-甲醛替代实施例1中的4-苯基苯甲醛，合成方法同实施例1；得到化合物9，结构数据如下：白色固体，产率：82.3％；熔点:204.9-206.2℃；1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.14(s,1h),8.20(s,1h),7.61(d,j＝7.6hz,1h),7.52(d,j＝8.18hz,1h),7.48(s,1h),7.34(d,j＝2.84hz,1h),7.21(m,1h),7.14(d,j＝8.23hz,1h),7.05(s,1h),6.72(d,j＝8.06hz,1h),6.64(t,j＝7.47hz,1h),6.39(d,j＝3.13hz,1h),5.81(s,1h)；
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ164.07,148.43,135.93,134.76,133.64,128.19,127.77,126.50,120.25,118.40,117.32,115.35,114.75,110.35,101.36,67.74；hrms(esi
+
):m/z calcd for c
16h13
n3o[m+h]
+
264.11369,found 264.11353。
[0056]
实施例10 2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物体外抗肿瘤作用
[0057]
1.细胞培养与传代
[0058]
人肝癌细胞系(hepg2)、人恶性黑色素瘤细胞系(a375)、人非小细胞肺癌细胞系(a549)、人胰腺癌细胞系(panc1)和人胶质瘤细胞系(u251)于含10％fbs的dmem高糖培养基中培养，生长至80-90％丰度时传代，37℃，5％co2环境下培养。
[0059]
2.化合物配制
[0060]
待测化合物溶解于dmso中制成浓度为50mg/ml母液，而后以含5％fbs高糖dmem培养基稀释成50μg/ml、15μg/ml、5μg/ml、1.5μg/ml、0.5μg/ml、0.15μg/ml、0.05μg/ml、0.015μg/ml系列浓度。5-氟尿嘧啶作为阳性对照药物。
[0061]
3.化合物对肿瘤细胞抑制实验
[0062]
当肿瘤细胞生长至80-90％丰度时接种于96孔板，每孔接种约2000个细胞。次日细胞贴壁后将培养基更换为含有浓度分别为50μg/ml、15μg/ml、5μg/ml、1.5μg/ml、0.5μg/ml、0.15μg/ml、0.05μg/ml、0.015μg/ml化合物的5％fbs高糖dmem培养基，置于37℃，5％co2环境下培养72小时。mtt粉末通过浓度为0.1mol/l pbs溶解配置为5mg/ml的mtt溶液，每孔加入10μl mtt溶液，于细胞培养箱中避光孵育4小时。mtt染色4小时后用移液器吸走上清，每孔加入100μl dmso溶解板底紫色结晶，酶标仪检测570nm处各孔吸光度，通过下述公式计算各浓度化合物对肿瘤细胞生长的抑制率。抑制率＝(od对照组-od给药组)/od对照组*100％。通过graphpad prism9软件计算获得各化合物的ic
50
，实验结果见表1。
[0063]
从表1看，9个化合物对人肝癌细胞系(hepg2)、人胶质瘤细胞系(u251)、人胰腺癌细胞系(panc1)、人非小细胞肺癌细胞系(a549)和人恶性黑色素瘤细胞系(a375)等均显示了较强的广谱抗肿瘤活性，其中化合物1、化合物2、化合物4和化合物8有更强的广谱抗肿瘤
活性，优于5-氟尿嘧啶(5-fu),显示了较好的应用前景。
[0064]
表1 2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物抗肿瘤活性
[0065][0066]
5-fu：5-氟尿嘧啶
[0067]
实施例11 2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物细胞周期检测
[0068]
选择活性较好的化合物8进行细胞周期检测
[0069]
1.细胞培养与传代
[0070]
人肝癌细胞系(hepg2)、人恶性黑色素瘤细胞系(a375)、人非小细胞肺癌细胞系(a549)、人胰腺癌细胞系(panc1)和人胶质瘤细胞系(u251)于含10％fbs的dmem高糖培养基中培养，生长至80-90％丰度时传代，37℃，5％co2环境下培养。
[0071]
2.化合物处理
[0072]
2.1化合物配制
[0073]
待测化合物溶解于dmso中制成浓度为50mg/ml母液，以含5％ fbs的高糖dmem培养基稀释至10μg/ml和2μg/ml。
[0074]
2.2细胞化合物处理
[0075]
细胞生长至80-90％丰度时接种于六孔板中，次日细胞贴壁后经过无血清高糖dmem培养基过夜处理，使细胞同步化于细胞分裂g0期；
[0076]
同步化后，将无血清培养基更换为化合物浓度分别为10μg/ml(适用于a375、a549、panc1细胞系)和2μg/ml(适用于hepg2细胞系)的培养基。37℃，5％co2环境下孵育72小时。
[0077]
3.细胞周期检测
[0078]
3.1收集六孔板中培养基上清于离心管中，用胰酶消化细胞，至细胞可被移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的培养液，吹打下所有贴壁细胞，收集入离心管中。1000rpm离心5分钟，沉淀细胞；
[0079]
3.2去除上清，保留细胞沉淀，加入冰上预冷的0.01mol/l pbs缓冲液1ml，重悬细胞，再次1000rpm离心5分钟沉淀细胞，小心去除上清，保留细胞沉淀；
[0080]
3.3细胞固定：加入1ml冰浴预冷的70％乙醇，吹打混匀，4℃固定。细胞固定完全后，1000rpm离心5分钟，沉淀细胞。小心去除上清。向细胞沉淀中加入1ml冰浴预冷pbs，重悬细胞。再次离心沉淀细胞，去除上清，得到细胞沉淀；
[0081]
3.4碘化丙啶染色：按照细胞周期检测试剂盒说明书配制碘化丙啶染色液。每管细胞中加入0.5ml碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光孵30分钟；
[0082]
3.5流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。flowjo软件分析细胞dna含量和光散射。
[0083]
4细胞周期检测结果
[0084]
4.1化合物作用于人肝癌细胞系(hepg2)的细胞周期检测
[0085]
化合物8作用于人肝癌细胞系(hepg2)的细胞周期检测结果如下：空白对照组细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为42.60
±
2.0％、26.10
±
0.67％、23.07
±
1.03％；化合物8给药组的细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为21.73
±
3.71％、11.55
±
2.14％、50.6
±
1.63％；此外，给予5-fu阳性给药组的细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为52.55
±
2.05％、21.95
±
2.75％和9.58
±
0.33％；紫杉醇阳性给药组的细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为21.73
±
3.71％、11.55
±
2.14％和50.6
±
1.63％，提示化合物8作用于人肝癌细胞系(hepg2)细胞的g2/m期。
[0086]
4.2化合物作用于人胶质瘤细胞系(u251)的细胞周期检测
[0087]
化合物8作用于人胶质瘤细胞系(u251)的细胞周期检测结果如下：空白对照组细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为45.05
±
3.11％、19.66
±
2.09％和18.30
±
1.23％；化合物8给药组的细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比为32.98
±
0.35％、27.27
±
4.56％和29.7
±
5.58％；此外，5-fu给药组的u251细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为66.47
±
3.54％、10.57
±
2.82％和5.85
±
4.66％；紫杉醇给药组的u251细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为6.29
±
0.88％、14.0
±
2.00％和57.93
±
4.25％，上述结果提示化合物8作用于人胶质瘤细胞系(u251)的细胞在g0/g1、s、g2/m期分布较均衡。
[0088]
4.3化合物作用于人胰腺癌细胞系(panc1)的细胞周期检测
[0089]
化合物8作用于人胰腺癌细胞系(panc1)的细胞周期检测结果如下：空白对照组的panc1细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为39.77
±
0.91％、21.17
±
0.69％和27.23
±
0.95％，化合物8给药组的panc1细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为14.67
±
5.30％、17.38
±
3.95％和59.18
±
7.36％；5-fu阳性给药组的panc1细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为34.03
±
1.72％、20.63
±
1.59％和35.17
±
1.32％；紫杉醇阳性给药组的panc1细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为8.94
±
1.99％、15.43
±
2.87％和65.3
±
5.24％，提示化合物8的panc1细胞周期分布同阳性药紫杉醇类似，作用于人胰腺癌细胞系(panc1)的细胞g2/m期。
[0090]
4.4化合物作用于人非小细胞肺癌细胞系(a549)的细胞周期检测
[0091]
化合物8作用于人非小细胞肺癌细胞系(a549)的细胞周期检测结果如下：空白对照组a549细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比为66.32
±
2.47％、15.54
±
1.74％和11.74
±
2.40％，化合物8给药组的a549细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为17.80
±
1.49％、19.38
±
2.04％和55.77
±
2.38％；5-fu阳性给药组的a549细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为65.73
±
1.33％、11.97
±
0.61％和14.20
±
0.37％；而给予紫杉醇阳性给药组的a549细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为16.40
±
0.60％、18.35
±
1.85％和56.88
±
3.06％，上述结果提示化合物8的a549细胞周期分布同阳
性药紫杉醇类似，作用于人非小细胞肺癌细胞系(a549)的细胞g2/m期。
[0092]
4.5化合物作用于人恶性黑色素瘤细胞系(a375)的细胞周期检测
[0093]
化合物8作用于人恶性黑色素瘤细胞系(a375)的细胞周期检测结果如下：空白对照组的a375细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比为42.67
±
1.28％、26.27
±
4.61％和21
±
4.57％；化合物8给药组的a375细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比为26.42
±
3.47％和45.08
±
1.22％和20.86
±
2.52％；5-fu阳性给药组的a375细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比为31.1
±
14.16％、11.25
±
2.54％和9.94
±
7.88％。紫杉醇阳性给药组的a375细胞周期分布g0/g1、s、g2/m期所占百分比分别为23.07
±
0.45％、35.73
±
1.43％和29.57
±
4.76％。上述结果提示化合物8的a375细胞周期分布同阳性药紫杉醇类似。
[0094]
实施例12 2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮衍生物急性毒性实验
[0095]
以活性较好的化合物8为例考察2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮的c2位衍生物急性毒性。
[0096]
一、实验材料与方法：
[0097]
1.实验动物：km小鼠，雄性，体质量36
±
4g，spf级
[0098]
2.实验耗材：
[0099]
(1)20％dmso溶液：分析纯dmso用双蒸水稀释至浓度为20％
[0100]
(2)0.2％吐温80-5％葡萄糖水溶液(100ml)：5g葡萄糖溶于100ml双蒸水中，充分溶解后，加入0.2ml吐温80溶液，充分混匀，即得。
[0101]
(3)化合物组分化合物8供试品溶液：称取化合物4 800mg，溶于20％dmso中，加入0.2％吐温80-5％葡萄糖水溶液，混匀，定容至50ml。即得供试液16mg/ml(其中dmso浓度为1.6％，v/v)，静置5h后仍有部分沉淀，适量加入0.5％cmc-na助悬，额外加入少量dmso，致终浓度为4.8％。
[0102]
3.实验动物分组
[0103]
(1)低浓度组：20mg/kg 3只
[0104]
(2)中浓度组：100mg/kg 3只
[0105]
(3)高浓度组：200mg/kg 3只
[0106]
(4)空白对照组等体积的溶剂1只
[0107]
4.实验过程：各组小鼠每天11:00灌胃相应剂量的化合物8，隔天记录小鼠的基本生长情况和体重，连续给药7天。结束后，5％水合氯醛麻醉，下腔静脉采血后，肝素抗凝采血管，3500rpm离心10min，吸取上清液转移至新的ep管中，-80℃保存备用。取小鼠肝小叶和肾组织，中性多聚甲醛固定液固定24h后，脱水、包埋后，行h&e染色。
[0108]
二、实验结果
[0109]
小鼠体重观察结果见表2，小鼠肝肾生化指标检测结果见表3，小鼠肝组织(200
×
)病理切片见图1，小鼠肾组织(200
×
)病理切片见图2。从上述结果看，三个剂量组小鼠连续7天给药后，体重毛发没有明显变化，肝肾功能指标正常，小鼠肝、肾组织病理切片也显示化合物8对肝肾无明显损害，上述结果表明2,3-二氢喹唑啉-4(1h)-酮的c2位衍生物是一种新型安全有效的抗肿瘤药物。
[0110]
表2小鼠体重观察结果(单位：g)
[0111][0112]
表3小鼠肝肾生化指标检测结果
[0113][0114]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型，均应包含在本发明的保护范围之内。