一种高产5-氨基乙酰丙酸的重组大肠杆菌的构建方法及其应用

文档序号:34460637发布日期:2023-06-15 02:34阅读:来源:国知局

技术特征:

1.重组大肠杆菌,其特征在于:所述重组大肠杆菌含有谷氨酰-trna连接酶的编码基因、trnaglu的编码基因、谷氨酰-trnaglu还原酶的编码基因和谷氨酰-1-半醛氨基转移酶的编码基因。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌,其特征在于:所述谷氨酰-trna连接酶为a1或a2的蛋白质:

3.根据权利要求1或2所述的重组大肠杆菌,其特征在于:所述谷氨酰-trna连接酶的编码基因为d1-d3中的任一种dna分子:

4.根据权利要求1-3中任一所述的重组大肠杆菌,其特征在于:所述重组大肠杆菌按照权利要求5或6所述的方法构建。

5.构建权利要求1-4中任一所述的重组大肠杆菌的方法,其特征在于:所述方法包括a1或a2:

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:所述重组大肠杆菌通过重组表达载体将含有权利要求1-3中任一所述的谷氨酰-trna连接酶的编码基因、trnaglu的编码基因、谷氨酰-trnaglu还原酶的编码基因和谷氨酰-1-半醛氨基转移酶的编码基因的重组表达载体导入所述出发菌中实现。

7.权利要求6中所述重组表达载体。

8.权利要求1-4任一所述的重组大肠杆菌,或权利要求5-6任一所述的构建方法在制备5-氨基乙酰丙酸中的应用。

9.一种5-氨基乙酰丙酸的制备方法,其特征在于:将权利要求1-4任一所述的重组大肠杆菌作为细胞催化剂,催化底物谷氨酸盐生成5-氨基乙酰丙酸。

10.根据权利要求9所述的制备方法,其特征在于:所述产5-氨基乙酰丙酸的大肠杆菌工程菌株进行固定化。


技术总结
本发明属于生物技术和代谢工程领域,涉及一种高产5‑氨基乙酰丙酸的重组大肠杆菌的构建方法及其应用。本发明通过过表达谷氨酰‑tRNA连接酶gltX基因与tRNA<supgt;Glu</supgt;提高5‑氨基乙酰丙酸的前体谷氨酰‑tRNA的合成,过表达谷氨酰‑tRNA还原酶hemA基因和谷氨酰‑1‑半醛氨基转移酶hemL基因,强化谷氨酰‑tRNA下游基因的表达,增强5‑氨基乙酰丙酸的合成能力。本发明还公开了利用构建的重组大肠杆菌菌体进行全细胞催化生产ALA的方法,从50mM谷氨酸盐中可产生4.56g/L ALA,底物转化率为75.60%。本发明还公开了固定化细胞催化生产ALA的方法,其固定化细胞可以多次重复使用。

技术研发人员:袁红莉,罗莹,刘亮,杨金水
受保护的技术使用者:中国农业大学
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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