技术特征：
1.一种重组肉毒杆菌神经毒素，其特征在于：其氨基酸序列如seq id no:6所示。2.如权利要求1所述的重组肉毒杆菌神经毒素，其特征在于：所述重组肉毒杆菌神经毒素的编码基因的核酸序列包括seq id no:1-5所示。3.一种权利要求1或2所述的重组肉毒杆菌神经毒素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将重组肉毒杆菌神经毒素的编码基因插入质粒pet-15b中，得到重组pet-15b质粒；2)将重组pet-15b质粒导入大肠杆菌中，培养并诱导表达，得到重组肉毒杆菌神经毒素。4.如权利要求3所述的重组肉毒杆菌神经毒素的制备方法，其特征在于：步骤2)中，具体操作为：将重组pet-15b质粒导入bl21(de3)或bl21(de3)plyss感受态细胞中，筛选获取表达重组肉毒杆菌神经毒素的单克隆菌株，将单克隆菌株接种至lb培养基中，培养至od值为0.4-0.6后，加入iptg诱导剂在25-37℃下诱导表达，得到重组肉毒杆菌神经毒素。5.一种双链式肉毒杆菌神经毒素的制备方法，其特征在于：切割权利要求1或2所述的重组肉毒杆菌神经毒素制成。6.如权利要求5所述的双链式肉毒杆菌神经毒素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s101，将重组肉毒杆菌神经毒素的编码基因和外源蛋白酶插入质粒pcdfduet-1中，得到重组pcdfduet-1质粒；s102，将重组pcdfduet-1质粒导入大肠杆菌中，培养并诱导表达，得到重组工程菌；s103，将所述重组工程菌裂解，分离纯化，得到所述双链式肉毒杆菌神经毒素。7.如权利要求6所述的双链式肉毒杆菌神经毒素的制备方法，其特征在于：所述外源蛋白酶为ev71-3c蛋白。8.如权利要求5所述的双链式肉毒杆菌神经毒素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s201，构建表达重组肉毒杆菌神经毒素的工程菌；s202，将所述工程菌裂解，得到含重组肉毒杆菌神经毒素的裂解液；s203，将所述裂解液流经固定外源蛋白酶的反应柱，分离纯化，得到所述双链式肉毒杆菌神经毒素。9.一种双链式肉毒杆菌神经毒素，其特征在于：由权利要求5-8任一项所述的双链式肉毒杆菌神经毒素的制备方法制得。10.一种权利要求9所述的双链式肉毒杆菌神经毒素的应用，其特征在于：所述双链式肉毒杆菌神经毒素在制备皮肤治疗药物和医美产品中的应用。
技术总结
一种重组肉毒杆菌神经毒素及其制备方法和应用，属于生物工程技术领域，重组肉毒杆菌神经毒素的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。本发明的一种重组肉毒杆菌神经毒素，其插入外源蛋白酶识别位点，有效提高对单链多肽的切割效率，得到具有较高生物活性的双链形式BoNT/A。本发明的一种双链式肉毒杆菌神经毒素的制备方法，通过高效切割所述的重组肉毒杆菌神经毒素制得双链式肉毒杆菌神经毒素。进一步地，在大肠杆菌中定量等比表达单链形式重组肉毒杆菌神经毒素和外源蛋白酶，外源蛋白酶可在大肠杆菌中切割单链形式重组肉毒杆菌神经毒素产生活性形式的双链式肉毒杆菌神经毒素，从而实现利用大肠杆菌进行一步生产。现利用大肠杆菌进行一步生产。现利用大肠杆菌进行一步生产。
技术研发人员：王师亮 王江田 张彦军 刘应康
受保护的技术使用者：海雅美生物技术（珠海）有限公司
技术研发日：2022.12.02
技术公布日：2023/3/21