1.本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种苗期鉴定不结球白菜花瓣花色的方法。
背景技术：
2.不结球白菜（brassica campestris ssp. chinensis makino）属十字花科芸薹属芸薹种白菜亚种。芸薹属植物中常见的花色为黄色，也存在白色、橙色等变异颜色。花色性状稳定遗传，容易观察，能作为标记性状、对杂株进行鉴定，在生产实践中具有重要作用。不结球白菜在我国广泛种植，其产量和品质是极被关注的特性。花是不结球白菜重要的生殖器官，对不同品种的花色进行初步鉴定，有助于加快不结球白菜花色性状的育种进程，培育出更多花色丰富的不结球白菜品种。
3.因此，设计专用于不结球白菜黄色花瓣/白色花瓣品种或材料的筛选、鉴定方法极为重要。
技术实现要素：
4.本发明的目的是提供一种苗期鉴定不结球白菜黄色花瓣/白色花瓣的方法，借助引物组wf35可快速鉴定待测品种或材料的花瓣颜色，以及实现在抽薹开花前对花色的准确预测，加速育种进程。
5.为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种用于鉴定不结球白菜黄色花瓣/白色花瓣的试剂盒，包括引物组wf35，所述引物组wf35的序列为：wf35f：5
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cgaaacgaagaagaagagtcc-3
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（seq id no.1），wf35r：5
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gggtgggaacaaaagagctac-3
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（seq id no.2）。
6.上述试剂盒在鉴定不结球白菜黄色花瓣或白色花瓣中的应用。
7.一种苗期鉴定不结球白菜花瓣花色的方法，包括以下步骤：步骤1，提取待鉴定品种或材料的基因组dna；步骤2，以步骤1提取的dna为模板，利用上述试剂盒中的引物组wf35对其进行pcr扩增；步骤3，以步骤2的pcr扩增产物进行聚丙烯酰胺电泳分离，获得待鉴定品种或材料的带型，如果得到115bp的片段，则说明待鉴定品种或材料的花瓣为黄色；如果得到93bp的片段，则说明待鉴定品种或材料的花瓣为白色。
8.进一步地，步骤2中，pcr扩增的体系为：在10μl反应体系中，50ng/μl dna模板1μl、10μm wf35引物各0.5μl、2
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primer star 5μl、去离子水3μl；pcr扩增程序为：95℃预变性2min，98℃变性30s，55.7℃退火30s，72℃延伸30s，72℃后延伸10min，35个循环，4℃保存。
9.有益效果：1. 本发明通过使用标记引物组wf35，可在抽薹开花前快速、高效的鉴定不结球白
菜品种或材料的花瓣颜色。
10.2. 本发明辅助选择方便，节约成本。若在花期对不结球白菜的花色进行筛选，则前期耗费周期长，成本高，消耗人力物力大。借助本发明，可实现苗期选择，减少工作量，提高选择效率。
11.3. 花不仅是不结球白菜重要的生殖器官还具有一定的观赏价值。花色的早期鉴定有助于加快不结球白菜的育种进程，进而快速培育出更多花色丰富的不结球白菜品种，具有更为深远的观赏意义。
附图说明
12.图1为引物组wf35在不同花色的不结球白菜pcr扩增后的电泳结果图，其中：m为dl500 marker，泳道1、2、5、6、8、10、13、15、17、19为黄色花瓣品种或材料，泳道3、4、7、9、11、12、14、16、18、20为白色花瓣品种或材料。
具体实施方式
13.下面将针对具体实例进一步对本发明做说明。应注意，下例中所用的实验方法及材料试剂等，如无特别说明，皆为常规方法、皆可从商业途径获得；同时，这些方法或试剂材料仅作为示范，对本发明并非唯一。
14.本发明主要技术实施路线为：提取不结球待测品种或材料的基因组dna作为模板，采用引物组wf35，通过聚合酶链反应（pcr）扩增片段，经聚丙烯酰胺凝胶电泳后，分析条带的大小，即可鉴定出待测品种不结球白菜花瓣颜色。
15.该方法提供一组不结球白菜黄/白色花瓣的分子标记，可快速检测不结球白菜花色，极大的节约时间和资源，提高选择效率，助力我国蔬菜产业，特别是观赏性蔬菜的发展，在生产实践中也具有重要作用。
16.实施例1本实施提供的一种苗期鉴定不结球白菜花色的方法，包括以下步骤：步骤1，不结球白菜基因组dna的提取根据植物基因组dna快速提取试剂盒（购自于北京天根生化科技有限公司）说明书提取dna，简要如下：1）取植物新鲜组织约100mg，加入液氮充分碾磨；2）将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700
µ
l已在65℃预热缓冲液gp1的离心管中（实验前在预热的gp1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在 65℃水浴20min；3）加入700
µ
l氯仿，充分混匀，12,000rpm离心5min；4）小心地将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中，加入700
µ
l缓冲液gp2，充分混匀；5）将混匀的液体转入吸附柱cb3中，12,000rpm离心30 s，弃掉废液；6）向吸附柱cb3中加入500
µ
l缓冲液gd（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中；7）向吸附柱cb3中 加入600
µ
l 漂洗液pw（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），
12,000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中；8）重复操作步骤7；9）将吸附柱cb3放回收集管中，12,000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱cb3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；10）将吸附柱cb3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μl洗脱缓冲液te，室温放置5min，12,000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中；11)dna经纯度及浓度检测，稀释到50ng/μl，存放于-20℃冰箱中备用。
17.步骤2，标记引物wf35在不结球白菜基因组中扩增在10μl反应体系中，50ng/μl dna模板1μl、10um标记引物wf35各0.5μl、2
×
primer star 5μl、去离子水3μl。
18.wf35标记引物：wf35f：5
’‑
cgaaacgaagaagaagagtcc-3’，wf35r：5
’‑
gggtgggaacaaaagagctac-3’。
19.pcr扩增程序为：95℃预变性2min，98℃变性30s，55.7℃退火30s，72℃延伸30s，72℃后延伸10min，35个循环，4℃保存。
20.步骤3，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测pcr扩增结束后，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（page胶电泳），电泳缓冲液为1
×
tbe，1μl上样，150v电泳56min后，染色、观察并拍照。
21.电泳结果如图1可知，在泳道1、2、5、6、8、10、13、15、17、19的黄色花瓣材料均能扩增出115bp的片段，在泳道3、4、7、9、11、12、14、16、18、20的白色花瓣材料均能扩增出93bp的片段。
22.由以上结果可知，采用标记引物wf35扩增不结球白菜黄花材料/白花材料，如果得到115bp的片段，则说明待鉴定品种或材料花瓣为黄色；如果得到93bp的片段，则说明待鉴定品种或材料花瓣为白色。