一种液基薄层制片真菌荧光形态染色检测试剂盒及检测方法与流程

1.本发明涉及真菌采集检测技术领域，特别涉及一种液基薄层制片真菌荧光形态染色检测试剂盒及检测方法。


背景技术：

2.根据侵犯人体部位的不同，临床上将致病真菌分为浅部真菌和深部真菌。浅部真菌(癣菌)仅侵犯皮肤、毛发和指(趾)甲，而深部真菌能侵犯人体皮肤、黏膜、深部组织和内脏，甚至引起全身播散性感染，真菌和其他三种生物最大的不同之处在于，真菌的细胞有含甲壳素(又叫几丁质、甲壳素、壳多糖)为主要成分的细胞壁和植物的细胞壁主要是由纤维素组成的不同。而在对真菌进行采集检测的时候，从而就需要用到真菌采集检测一体试剂盒。
3.现有技术中在针对真菌样本进行检测时，首先需要将采集到的真菌样本放置于保存液中进行稀释，使附着于采样棉棒上的真菌混合到保存液中，同时为了方便后续获取样本液时，真菌样本可以均匀的分布于样本液中，因此还在加入处理液后还需要对样本液进行长时间放置。
4.但是当需要对真菌样本进行快速检测时，由于不具备长时间放置的条件，因此医护人员需要通过持续摇晃试剂盒的方式加快真菌样本与保存液的混合速度，较为消耗体力的同时，混合效果也无法得到保证。
5.因此，发明一种液基薄层制片真菌荧光形态染色检测试剂盒及检测方法来解决上述问题很有必要。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种液基薄层制片真菌荧光形态染色检测试剂盒及检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
7.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种液基薄层制片真菌荧光形态染色检测方法，具体包括以下步骤：
8.s1、样本采集：使用采样棉棒对真菌样本进行擦拭采集，采集完毕后，对顶盖进行旋转，使其由第一存储壳体顶部脱离，随后将手指插入到驱动环内侧后将顶盖向上拉动，进而使夹持机构与第二驱动机构均由第一存储壳体内侧移出，此时旋转轴带动升降座在第一存储壳体内侧上移，位于第一存储壳体内腔底部的保存液则穿过液体通道依旧留存在第一存储壳体内腔底部；
9.s2、样本保存：将采样棉棒顶端穿过避让孔并插入到限位导向环底部的环形限位槽中，随后将采样棉棒压入到橡胶夹持板内侧，并对采样棉棒进行旋转，使升降块位于升降板顶部，然后将顶盖复位，使其套接在第一存储壳体外侧顶部；
10.s3、样本处理：将拨板向下拨动，使拨板通过驱动杆对活塞进行推动，进而使活塞将第二存储壳体内部的处理液通过连接管推送到第一存储壳体内部与保存液混合，使用手
指带动驱动环重复升降，驱动环升降时，由于其方形机构的限制，带动旋转轴重复进行正向旋转以及逆向旋转，此时旋转轴通过连接块与橡胶夹持板带动采样棉棒在混合液内部以旋转轴为轴心继续旋转，采样棉棒旋转过程中，采样棉棒顶端在限位导向环底部的环形限位槽中进行移动，由于连续波纹面的限位，当采样棉棒顶端移动至连续波纹面的凸点时，采样棉棒在橡胶夹持板内侧整体下降，同时旋转轴旋转时带动往复螺纹旋转，往复螺纹旋转时则带动被导轨所限制的升降板升降，当升降板上升时，升降板通过升降块带动采样棉棒同步上升；
11.s4、样本制片：持续升降驱动环1-2分钟后，完成样本液的制备，此时将手指由驱动环内侧抽出，并对顶盖进行旋转，使其由第一存储壳体顶部脱离，然后将顶盖向上提拉，使顶盖带动升降座上升，随后将截止阀打开，此时第一存储壳体内部的样本液通过输出管流出，将流出的样本液加入到液基薄层制片装置中，按照液基薄层制片设备操作要求启动制片，制片结束后，取出载玻片；
12.s5、染色镜检：滴加1-2滴染色液，盖上盖玻片，然后将其置于荧光显微镜下紫外波段下镜检。
13.本发明还提供了一种液基薄层制片真菌荧光形态染色检测试剂盒，用于实现上述的液基薄层制片真菌荧光形态染色检测方法，包括保存液存储机构，所述保存液存储机构内部与顶部共同设置有第一驱动机构，所述第一驱动机构上设置有夹持机构与第二驱动机构，所述夹持机构上可拆卸的设置有采样棉棒，所述保存液存储机构侧面固定设置有处理液存储机构，所述保存液存储机构内腔底部填充有保存液，所述处理液存储机构内部填充有处理液，所述第一驱动机构中驱动环通过夹持机构带动采样棉棒在保存液与处理液混合后形成的混合液中旋转，所述第二驱动机构带动采样棉棒在旋转过程中往复升降。
14.优选的，所述保存液存储机构包括第一存储壳体、输出管、截止阀、升降座、液体通道、滑块和滑槽。
15.优选的，所述输出管固定贯穿设置于第一存储壳体底部，所述截止阀固定设置于输出管底端，所述升降座沿竖直方向滑动设置于第一存储壳体内侧，所述液体通道设置有多个，多个所述液体通道均匀贯穿设置于升降座顶部，所述滑块与滑槽均设置有两个，两个所述滑块分别固定设置于升降座两侧，两个所述滑槽分别开设于第一存储壳体内部两侧壁上，两个所述滑块分别沿竖直方向滑动设置于两个滑槽内侧。
16.优选的，所述第一驱动机构包括顶盖、方形升降套管、驱动环和旋转轴，所述顶盖套接设置于第一存储壳体外侧顶部并与第一存储壳体螺纹连接，所述方形升降套管沿竖直方向贯穿顶盖并与顶盖滑动连接，所述驱动环固定设置于方形升降套管顶端，所述旋转轴位于方形升降套管内侧并与方形升降套管螺纹连接，所述旋转轴底端通过塑料轴承转动嵌套设置于升降座顶部。
17.优选的，所述夹持机构包括连接块与橡胶夹持板，所述连接块设置有两个，两个所述连接块均固定套接设置于旋转轴外侧，所述橡胶夹持板固定设置于两个连接块左侧。
18.优选的，所述第二驱动机构包括限位导向环、往复螺纹、升降板、导轨、避让孔和升降块。
19.优选的，所述限位导向环固定设置于顶盖底部，且其底部开设有环形限位槽，所述环形限位槽顶部设置为连续波纹面，所述往复螺纹开设于旋转轴外侧中部，所述升降板套
接设置于往复螺纹外侧并与往复螺纹螺纹连接，所述导轨滑动嵌套设置于升降板右侧且与第一存储壳体内壁固定连接，所述避让孔沿竖直方向贯穿设置于升降板顶部左侧，所述采样棉棒位于避让孔内侧，所述升降块位于升降板顶部且与采样棉棒固定连接。
20.优选的，所述处理液存储机构包括第二存储壳体、活塞、驱动杆、拨板、避让槽、连接管和瓣膜。
21.优选的，所述第二存储壳体固定设置于第一存储壳体右侧，所述活塞沿竖直方向滑动设置于第二存储壳体内侧，所述驱动杆固定设置于活塞顶部，所述拨板固定设置于驱动杆右侧，所述避让槽开设于第二存储壳体右侧顶部，所述拨板位于避让槽内侧，所述连接管固定贯穿设置于第二存储壳体底部，且其底端贯穿第一存储壳体侧壁并延伸至第一存储壳体内部，所述瓣膜固定设置于连接管内侧。
22.本发明的技术效果和优点：
23.本发明通过设置有保存液存储机构、第一驱动机构、夹持机构、第二驱动机构和处理液存储机构，以便于在对真菌样本进行快速检测时，使用者可以将采集有真菌样本的采样棉棒放置于夹持机构上，然后利用第一驱动机构通过夹持机构带动采样棉棒在混合液中重复正向以及逆向旋转，同时利用第二驱动机构带动采样棉棒在旋转过程中重复升降，进而加快采样棉棒上真菌样本的脱离速度，同时对含有真菌样本的混合液进行搅拌，使得真菌样本更均匀的分布于混合液中，相较于现有技术中的同类型装置，本发明应用于真菌样本的快速检测时更加便捷，有效提高真菌样本与混合液混合速度的同时还可以明显降低医护人员的体力消耗，同时混合效果也可以得到有效保证。
附图说明
24.图1为本发明的整体正视结构示意图。
25.图2为本发明的整体正面剖视结构示意图。
26.图3为本发明的保存液存储机构局部正面剖视是结构示意图。
27.图4为本发明的第一驱动机构与第二驱动机构正面剖视结构示意图。
28.图5为本发明的夹持机构俯视结构示意图。
29.图6为本发明的处理液存储机构正面剖视结构示意图。
30.图7位本发明的方法流程示意图。
31.图中：1、保存液存储机构；11、第一存储壳体；12、输出管；13、截止阀；14、升降座；15、液体通道；16、滑块；17、滑槽；2、第一驱动机构；21、顶盖；22、方形升降套管；23、驱动环；24、旋转轴；3、夹持机构；31、连接块；32、橡胶夹持板；4、采样棉棒；5、第二驱动机构；51、限位导向环；52、往复螺纹；53、升降板；54、导轨；55、避让孔；56、升降块；6、处理液存储机构；61、第二存储壳体；62、活塞；63、驱动杆；64、拨板；65、避让槽；66、连接管；67、瓣膜。
具体实施方式
32.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
33.实施例1
34.如图7所示，本发明提供了一种液基薄层制片真菌荧光形态染色检测方法，具体包括以下步骤：
35.s1、样本采集：使用采样棉棒4对真菌样本进行擦拭采集，采集完毕后，对顶盖21进行旋转，使其由第一存储壳体11顶部脱离，随后将手指插入到驱动环23内侧后将顶盖21向上拉动，进而使夹持机构3与第二驱动机构5均由第一存储壳体11内侧移出，此时旋转轴24带动升降座14在第一存储壳体11内侧上移，位于第一存储壳体11内腔底部的保存液则穿过液体通道15依旧留存在第一存储壳体11内腔底部；
36.s2、样本保存：将采样棉棒4顶端穿过避让孔55并插入到限位导向环51底部的环形限位槽中，随后将采样棉棒4压入到橡胶夹持板32内侧，并对采样棉棒4进行旋转，使升降块56位于升降板53顶部，然后将顶盖21复位，使其套接在第一存储壳体11外侧顶部；
37.s3、样本处理：将拨板64向下拨动，使拨板64通过驱动杆63对活塞62进行推动，进而使活塞62将第二存储壳体61内部的处理液通过连接管66推送到第一存储壳体11内部与保存液混合，使用手指带动驱动环23重复升降，驱动环23升降时，由于其方形机构的限制，带动旋转轴24重复进行正向旋转以及逆向旋转，此时旋转轴24通过连接块31与橡胶夹持板32带动采样棉棒4在混合液内部以旋转轴24为轴心继续旋转，采样棉棒4旋转过程中，采样棉棒4顶端在限位导向环51底部的环形限位槽中进行移动，由于连续波纹面的限位，当采样棉棒4顶端移动至连续波纹面的凸点时，采样棉棒4在橡胶夹持板32内侧整体下降，同时旋转轴24旋转时带动往复螺纹52旋转，往复螺纹52旋转时则带动被导轨54所限制的升降板53升降，当升降板53上升时，升降板53通过升降块56带动采样棉棒4同步上升；
38.s4、样本制片：持续升降驱动环231-2分钟后，完成样本液的制备，此时将手指由驱动环23内侧抽出，并对顶盖21进行旋转，使其由第一存储壳体11顶部脱离，然后将顶盖21向上提拉，使顶盖21带动升降座14上升，随后将截止阀13打开，此时第一存储壳体11内部的样本液通过输出管12流出，将流出的样本液加入到液基薄层制片装置中，按照液基薄层制片设备操作要求启动制片，制片结束后，取出载玻片；
39.s5、制片镜检：滴加1-2滴染色液，盖上盖玻片，然后将其置于荧光显微镜下紫外波段下镜检。
40.实施例2
41.本发明还提供了如图1-6所示的一种液基薄层制片真菌荧光形态染色检测试剂盒，包括保存液存储机构1，所述保存液存储机构1内部与顶部共同设置有第一驱动机构2，所述第一驱动机构2上设置有夹持机构3与第二驱动机构5，所述夹持机构3上可拆卸的设置有采样棉棒4，所述保存液存储机构1侧面固定设置有处理液存储机构6，所述保存液存储机构1内腔底部填充有保存液，所述处理液存储机构6内部填充有处理液，所述第一驱动机构2中驱动环23通过夹持机构3带动采样棉棒4在保存液与处理液混合后形成的混合液中旋转，所述第二驱动机构5带动采样棉棒4在旋转过程中往复升降。
42.如图3与图4所示，所述保存液存储机构1包括第一存储壳体11、输出管12、截止阀13、升降座14、液体通道15、滑块16和滑槽17。
43.更为具体的，所述输出管12固定贯穿设置于第一存储壳体11底部，所述截止阀13固定设置于输出管12底端，所述升降座14沿竖直方向滑动设置于第一存储壳体11内侧，所
述液体通道15设置有多个，多个所述液体通道15均匀贯穿设置于升降座14顶部，所述滑块16与滑槽17均设置有两个，两个所述滑块16分别固定设置于升降座14两侧，两个所述滑槽17分别开设于第一存储壳体11内部两侧壁上，两个所述滑块16分别沿竖直方向滑动设置于两个滑槽17内侧。
44.如图4所示，所述第一驱动机构2包括顶盖21、方形升降套管22、驱动环23和旋转轴24。
45.更为具体的，所述顶盖21套接设置于第一存储壳体11外侧顶部并与第一存储壳体11螺纹连接，所述方形升降套管22沿竖直方向贯穿顶盖21并与顶盖21滑动连接，所述驱动环23固定设置于方形升降套管22顶端，所述旋转轴24位于方形升降套管22内侧并与方形升降套管22螺纹连接，所述旋转轴24底端通过塑料轴承转动嵌套设置于升降座14顶部。
46.综上所述可知，驱动环23升降时，由于其方形机构的限制，带动旋转轴24重复进行正向旋转以及逆向旋转。
47.如图4与图5所示，所述夹持机构3包括连接块31与橡胶夹持板32。
48.更为具体的，所述连接块31设置有两个，两个所述连接块31均固定套接设置于旋转轴24外侧，所述橡胶夹持板32固定设置于两个连接块31左侧。
49.如图4所示，所述第二驱动机构5包括限位导向环51、往复螺纹52、升降板53、导轨54、避让孔55和升降块56。
50.更为具体的，所述限位导向环51固定设置于顶盖21底部，且其底部开设有环形限位槽，所述环形限位槽顶部设置为连续波纹面，所述往复螺纹52开设于旋转轴24外侧中部，所述升降板53套接设置于往复螺纹52外侧并与往复螺纹52螺纹连接，所述导轨54滑动嵌套设置于升降板53右侧且与第一存储壳体11内壁固定连接，所述避让孔55沿竖直方向贯穿设置于升降板53顶部左侧，所述采样棉棒4位于避让孔55内侧，所述升降块56位于升降板53顶部且与采样棉棒4固定连接。
51.综上所述可知，当采样棉棒4以旋转轴24为轴心进行旋转时，采样棉棒4顶端在限位导向环51底部的环形限位槽中进行移动，由于连续波纹面的限位，当采样棉棒4顶端移动至连续波纹面的凸点时，采样棉棒4在橡胶夹持板32内侧整体下降，同时旋转轴24旋转时带动往复螺纹52旋转，往复螺纹52旋转时则带动被导轨54所限制的升降板53升降，当升降板53上升时，升降板53通过升降块56带动采样棉棒4同步上升。
52.如图6所示，所述处理液存储机构6包括第二存储壳体61、活塞62、驱动杆63、拨板64、避让槽65、连接管66和瓣膜67。
53.更为具体的，所述第二存储壳体61固定设置于第一存储壳体11右侧，所述活塞62沿竖直方向滑动设置于第二存储壳体61内侧，所述驱动杆63固定设置于活塞62顶部，所述拨板64固定设置于驱动杆63右侧，所述避让槽65开设于第二存储壳体61右侧顶部，所述拨板64位于避让槽65内侧，所述连接管66固定贯穿设置于第二存储壳体61底部，且其底端贯穿第一存储壳体11侧壁并延伸至第一存储壳体11内部，所述瓣膜67固定设置于连接管66内侧。
54.综上所述可知，医护人员可以将拨板64向下拨动，进而使拨板64通过驱动杆63带动活塞62对第二存储壳体61内部的处理液进行挤压，进而使处理液通过连接管66进入到第一存储壳体11内部与保存液混合。
55.实施例3
56.所述保存液主要成分包括二硫苏糖醇、胰蛋白酶、杀菌剂或碱液，所述处理液主要成分包括碱液或蛋白酶k以及表面活性剂，所述染色液主要成分包括荧光提亮剂、背景复染剂、助溶剂、碱液、离子螯合剂和蒸馏水。
57.所述保存液用于针对样本进行液化、稀释以及灭活病原微生物，所述处理液用于消化样本中的黏液以及杂质等干扰物质，染色液用于消除背景干扰，提高检测灵敏度，使镜检阅片傻瓜式；
58.综上所述可知，保存液用于杀灭样本中微生物，降低生物传染性，实现样本长时间保存、运输而不会出现菌丝生长出现假阳性结果，并保证目标菌丝形态和结构保持原始状态，保证结果的准确性，处理液则消化样本中粘蛋白、食物残渣以及其他杂质，便于后期形态学检测；
59.总结：本发明对样本进行了灭活、消化处理，避免了病原微生物传染的风险提高了样本富集密度，辅助提高阳性检出率及准确度降低人工操作误差及人工成本。
60.最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。