技术特征：
1.一种基于双重pcr检测羊肚菌交配型的引物组，其特征在于，包括针对羊肚菌交配型基因mat1-1和mat1-2的引物对；其中针对mat1-1的引物对的核苷酸序列如seq id no.1和seq id no.2所示；针对mat1-2的引物对的核苷酸序列如seq id no.3和seq id no.4所示。2.一种基于双重pcr检测羊肚菌交配型的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物组。3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括阳性对照和阴性对照；所述阳性对照为分别包含羊肚菌交配型基因mat1-1和mat1-2的基因。4.根据权利要求2或3所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括构建双重pcr检测体系的其他试剂。5.权利要求1所述引物组或权利要求2～4任一项所述试剂盒在鉴定羊肚菌交配型中的应用。6.一种基于双重pcr鉴定羊肚菌交配型的方法，其特征在于，包括以下步骤：构建包含权利要求1所述引物组和待测样品基因组模板dna的双重pcr检测体系；对所述双重pcr检测体系进行pcr扩增，当扩增产物同时出现650bp和428bp两个条带，表明待测样品同时含有mat1-1和mat1-2两种交配型基因；当扩增产物只出现650bp的一个条带，表明待测样品只含有mat1-1一种交配型基因；当扩增产物只出现428bp的一个条带，表明待测样品只含有mat1-2一种交配型基因。7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述双重pcr检测体系以25μl计，包括：2
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taq dna聚合酶混合液12.5μl，ddh2o 7.5μl，针对mat1-1的引物对各1μl，针对mat1-2的引物对各1μl和模板dna 1μl。8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述双重pcr检测体系中mat1-1引物对的上下游引物终浓度均为0.4μm，mat1-2引物对的上下游引物终浓度均为0.05～0.2μm。9.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述pcr扩增的程序，包括：94℃预变性3min；94℃变性60s，50～53℃退火30s，72℃延伸60～120s，35个循环；72℃延伸10min。10.权利要求1所述引物组或权利要求2～4任一项所述试剂盒或权利要求6～9任一项所述方法在培育目标交配型羊肚菌新品种中的应用。
技术总结
本发明提供了一种基于双重PCR检测羊肚菌交配型的引物组、试剂盒和检测方法，涉及生物学鉴定技术领域。本发明所述引物组包括羊肚菌交配型基因MAT1-1和MAT1-2特异性引物对，核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4所示。本发明利用双重PCR技术，单次单管反应即可对羊肚菌栽培菌种进行同步检测，克服了以往单一检测的操作繁琐、灵敏度低、适用性低等诸多限制。本发明建立了一种特异性强、快速、高效、易于操作的双重PCR检测方法体系，可用于实际生产中对羊肚菌交配型基因的快速鉴定。羊肚菌交配型基因的快速鉴定。羊肚菌交配型基因的快速鉴定。
技术研发人员：顾丹丹 王立安 王美华 邓晓晴
受保护的技术使用者：石家庄学院
技术研发日：2022.12.15
技术公布日：2023/3/21