1.本发明涉及一种玉米蛋白粉酶解制备寡肽的方法，属于酶解制备寡肽领域。
背景技术：
2.玉米蛋白粉是玉米淀粉生产中的副产物，大约含有60%的蛋白质，由于其组成复杂，口感粗糙，功能性尤其是水溶性非常差，从而严重限制了其在食品工业中的应用，只能作为饲料在畜牧业使用，为了进一步提高玉米蛋白粉的水溶性及其功能特性，玉米蛋白生产寡肽的研究已经得到人们的重视，研究表明酶解制备寡肽是可行的，并且酶解得到的寡肽具有很多生物功能，例如抑制血压升高、抗疲劳、促进酒精代谢等，进一步提高玉米蛋白粉的附加值。
3.玉米蛋白粉中的蛋白质以醇溶性蛋白为主，在溶液中显示出高度的旋光性，说明它的分子中存在着大区域的α-螺旋结构，使其具有很强的疏水性，如果不经过变性处理，液体中的酶解反应将变成两相界面间的反应，另外玉米蛋白粉中存在约14%的淀粉，这些淀粉与玉米蛋白牢牢地结合在一起，形成层层包裹的复合体，导致酶解的水解度低。
4.为了提高玉米蛋白粉的水溶性，可以采用适当的处理方法使蛋白变性，破坏蛋白的二、三级结构，使玉米蛋白分子内部的基团暴露于蛋白质分子表面，增加酶与蛋白的接触点，使其更容易被酶解，提高水解度。
5.常用的方法包括碱处理、蒸煮处理、膨化处理，其中蒸煮处理可以除去玉米蛋白粉中的淀粉，蛋白质结构被高温破坏，再经酶解可以获得较高的水解度，水解度可以达到20%以上，但是最终制备的产物中，分子量小于1000da的寡肽仅占总产物的80%，得率较低，是由于变性处理仍然不够理想造成的。
6.cn101531700a公开了一种玉米低聚肽及其制备方法，在酶解前，将玉米蛋白粉在碱性环境下进行蒸煮处理，可以提高酶解的水解度，但是其酶解产物中，分子量小于1000da的寡肽仅占总产物的80%左右，得率较低。
7.综上所述，现有技术中，通过蒸煮处理来使玉米蛋白变性，可以在酶解中获得较高的水解度，但是酶解产物中，分子量小于1000da的寡肽含量较低。
技术实现要素：
8.本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，通过玉米蛋白粉预处理，进一步进行酶解，提高酶解产物中分子量小于1000da的寡肽含量。
9.为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：一种玉米蛋白粉酶解制备寡肽的方法，所述方法包括玉米蛋白粉预处理、酶解。
10.以下是对上述技术方案的进一步改进：所述玉米蛋白粉预处理的步骤包括柠檬酸处理、蒸汽爆破处理、蒸煮处理；所述柠檬酸处理的方法为，将玉米蛋白粉粉碎至50-100目，与去离子水混合，加入柠檬酸，搅拌均匀后，用氢氧化钠溶液调节ph为6.3-6.5，控制温度为11-13℃，进行搅拌，搅
拌时间为23-25h，搅拌后进行过滤，将滤渣清洗、干燥，得到柠檬酸处理玉米蛋白粉。
11.所述玉米蛋白粉、去离子水、柠檬酸的质量比为45-55:450-550:14-16；所述玉米蛋白粉的粗蛋白质含量（以干基计）为62.87wt%，粗纤维含量（以干基计）为4.52wt%，粗脂肪含量（以干基计）为5.28wt%，水分含量为4.67wt%；所述氢氧化钠溶液的浓度为1.4-1.6wt%。
12.所述蒸汽爆破处理的方法为，将柠檬酸处理玉米蛋白粉、去离子水、氧化钙混合均匀后，送入爆破罐，维持压力为2.2-2.5mpa，进行保压，保压时间为275-310s，保压结束后，释放压力进行爆破，然后经干燥得到爆破后玉米蛋白粉。
13.所述柠檬酸处理玉米蛋白粉、去离子水、氧化钙的质量比为180-220:25-35:4.5-5.5。
14.所述蒸煮处理的方法为，将爆破后玉米蛋白粉、氢氧化钠、去离子水混合，搅拌均匀后，控制压力为0.20-0.25mpa，控制温度为107-122℃，对爆破后玉米蛋白粉进行蒸煮，蒸煮时间为41-52min，蒸煮同时进行通氧，每分钟通氧量为玉米蛋白粉质量的1.4-1.6%，蒸煮后控制温度为85-92℃，对水分进行蒸干，得到预处理玉米蛋白粉。
15.所述爆破后玉米蛋白粉、氢氧化钠、去离子水的质量比为180-220:11-13:650-750。
16.所述酶解的方法为，将预处理玉米蛋白粉与去离子水混合，制备成底物浓度为6.45-6.55mg/ml的待酶解液，然后加入混合酶，控制温度为48-52℃，进行酶解，酶解时间为5.8-6.5h，酶解完成后，得到酶解液，控制离心速度为4500-5500r/min，将酶解液进行离心，离心后取上清液进行喷雾干燥，得到玉米寡肽粉。
17.所述混合酶由碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成，其质量比为3:1.8-2.2，其中碱性蛋白酶的酶活为7000u/g，中性蛋白酶的酶活为8000u/g。
18.所述混合酶的加入量为玉米蛋白粉质量的2.4-2.6%。
19.与现有技术相比，本发明取得以下有益效果：本发明的方法水解度高，使用ph-stat法测定酶解步骤中酶解液的水解度，水解度为31.6-32.2%；本发明的方法产物中寡肽含量高，到的玉米寡肽粉，使用凯氏定氮法检测寡肽含量，寡肽含量为91.0-91.5%；本发明的方法得到的寡肽中，通过1000da纳滤膜的肽段的含量高，将得到的酶解液进行离心，离心后取上清液，将上清液通过1000da纳滤膜进行过滤，通过1000da纳滤膜的肽段的含量为93.62-94.21%，被1000da纳滤膜截留的肽段的含量为5.79-6.38%。
具体实施方式
20.实施例1（1）玉米蛋白粉预处理a、柠檬酸处理将玉米蛋白粉粉碎至80目，与去离子水混合，加入柠檬酸，搅拌均匀后，用氢氧化钠溶液调节ph为6.4，控制温度为12℃，进行搅拌，搅拌时间为24h，搅拌后进行过滤，将滤渣清洗、干燥，得到柠檬酸处理玉米蛋白粉；
所述玉米蛋白粉、去离子水、柠檬酸的质量比为50:500:15；所述玉米蛋白粉的粗蛋白质含量（以干基计）为62.87wt%，粗纤维含量（以干基计）为4.52wt%，粗脂肪含量（以干基计）为5.28wt%，水分含量为4.67wt%；所述氢氧化钠溶液的浓度为1.5wt%；b、蒸汽爆破处理将柠檬酸处理玉米蛋白粉、去离子水、氧化钙混合均匀后，送入爆破罐，维持压力为2.3mpa，进行保压，保压时间为280s，保压结束后，释放压力进行爆破，然后经干燥得到爆破后玉米蛋白粉；所述柠檬酸处理玉米蛋白粉、去离子水、氧化钙的质量比为200:30:5；c、蒸煮处理将爆破后玉米蛋白粉、氢氧化钠、去离子水混合，搅拌均匀后，控制压力为0.22mpa，控制温度为120℃，对爆破后玉米蛋白粉进行蒸煮，蒸煮时间为43min，蒸煮同时进行通氧，每分钟通氧量为玉米蛋白粉质量的1.5%，蒸煮后控制温度为90℃，对水分进行蒸干，得到预处理玉米蛋白粉；所述爆破后玉米蛋白粉、氢氧化钠、去离子水的质量比为200:12:700。
21.（2）酶解将预处理玉米蛋白粉与去离子水混合，制备成底物浓度为6.50mg/ml的待酶解液，然后加入混合酶，控制温度为50℃，进行酶解，酶解时间为6h，酶解完成后，得到酶解液，控制离心速度为5000r/min，将酶解液进行离心，离心后取上清液进行喷雾干燥，得到玉米寡肽粉；所述混合酶由碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成，其质量比为3:2，其中碱性蛋白酶的酶活为7000u/g，中性蛋白酶的酶活为8000u/g；所述混合酶的加入量为玉米蛋白粉质量的2.5%。
22.实施例2（1）玉米蛋白粉预处理a、柠檬酸处理将玉米蛋白粉粉碎至50目，与去离子水混合，加入柠檬酸，搅拌均匀后，用氢氧化钠溶液调节ph为6.3，控制温度为11℃，进行搅拌，搅拌时间为25h，搅拌后进行过滤，将滤渣清洗、干燥，得到柠檬酸处理玉米蛋白粉；所述玉米蛋白粉、去离子水、柠檬酸的质量比为45:450:14；所述玉米蛋白粉的粗蛋白质含量（以干基计）为62.87wt%，粗纤维含量（以干基计）为4.52wt%，粗脂肪含量（以干基计）为5.28wt%，水分含量为4.67wt%；所述氢氧化钠溶液的浓度为1.4wt%；b、蒸汽爆破处理将柠檬酸处理玉米蛋白粉、去离子水、氧化钙混合均匀后，送入爆破罐，维持压力为2.2mpa，进行保压，保压时间为310s，保压结束后，释放压力进行爆破，然后经干燥得到爆破后玉米蛋白粉；所述柠檬酸处理玉米蛋白粉、去离子水、氧化钙的质量比为180:25:4.5；c、蒸煮处理
将爆破后玉米蛋白粉、氢氧化钠、去离子水混合，搅拌均匀后，控制压力为0.20mpa，控制温度为107℃，对爆破后玉米蛋白粉进行蒸煮，蒸煮时间为52min，蒸煮同时进行通氧，每分钟通氧量为玉米蛋白粉质量的1.4%，蒸煮后控制温度为85℃，对水分进行蒸干，得到预处理玉米蛋白粉；所述爆破后玉米蛋白粉、氢氧化钠、去离子水的质量比为180:11:650。
23.（2）酶解将预处理玉米蛋白粉与去离子水混合，制备成底物浓度为6.45mg/ml的待酶解液，然后加入混合酶，控制温度为48℃，进行酶解，酶解时间为5.8h，酶解完成后，得到酶解液，控制离心速度为4500r/min，将酶解液进行离心，离心后取上清液进行喷雾干燥，得到玉米寡肽粉；所述混合酶由碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成，其质量比为3:1.8，其中碱性蛋白酶的酶活为7000u/g，中性蛋白酶的酶活为8000u/g；所述混合酶的加入量为玉米蛋白粉质量的2.4%。
24.实施例3（1）玉米蛋白粉预处理a、柠檬酸处理将玉米蛋白粉粉碎至100目，与去离子水混合，加入柠檬酸，搅拌均匀后，用氢氧化钠溶液调节ph为6.5，控制温度为13℃，进行搅拌，搅拌时间为23h，搅拌后进行过滤，将滤渣清洗、干燥，得到柠檬酸处理玉米蛋白粉；所述玉米蛋白粉、去离子水、柠檬酸的质量比为55:550:16；所述玉米蛋白粉的粗蛋白质含量（以干基计）为62.87wt%，粗纤维含量（以干基计）为4.52wt%，粗脂肪含量（以干基计）为5.28wt%，水分含量为4.67wt%；所述氢氧化钠溶液的浓度为1.6wt%；b、蒸汽爆破处理将柠檬酸处理玉米蛋白粉、去离子水、氧化钙混合均匀后，送入爆破罐，维持压力为2.5mpa，进行保压，保压时间为275s，保压结束后，释放压力进行爆破，然后经干燥得到爆破后玉米蛋白粉；所述柠檬酸处理玉米蛋白粉、去离子水、氧化钙的质量比为250:35:5.5；c、蒸煮处理将爆破后玉米蛋白粉、氢氧化钠、去离子水混合，搅拌均匀后，控制压力为0.25mpa，控制温度为122℃，对爆破后玉米蛋白粉进行蒸煮，蒸煮时间为41min，蒸煮同时进行通氧，每分钟通氧量为玉米蛋白粉质量的1.6%，蒸煮后控制温度为92℃，对水分进行蒸干，得到预处理玉米蛋白粉；所述爆破后玉米蛋白粉、氢氧化钠、去离子水的质量比为220:13:750。
25.（2）酶解将预处理玉米蛋白粉与去离子水混合，制备成底物浓度为6.55mg/ml的待酶解液，然后加入混合酶，控制温度为52℃，进行酶解，酶解时间为6.5h，酶解完成后，得到酶解液，控制离心速度为5500r/min，将酶解液进行离心，离心后取上清液进行喷雾干燥，得到玉米寡肽粉；
所述混合酶由碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成，其质量比为3:2.2，其中碱性蛋白酶的酶活为7000u/g，中性蛋白酶的酶活为8000u/g；所述混合酶的加入量为玉米蛋白粉质量的2.6%。
26.对比例1在实施例1的基础上，玉米蛋白粉预处理步骤中，省去柠檬酸处理步骤，蒸汽爆破处理步骤中，直接使用未处理的粉碎至80目的玉米蛋白粉代替柠檬酸处理玉米蛋白粉，进行蒸汽爆破，其余步骤相同，制备玉米寡肽粉；所述玉米蛋白粉的粗蛋白质含量（以干基计）为62.87wt%，粗纤维含量（以干基计）为4.52wt%，粗脂肪含量（以干基计）为5.28wt%，水分含量为4.67wt%。
27.对比例2在实施例1的基础上，玉米蛋白粉预处理步骤中，省去蒸汽爆破处理步骤，将柠檬酸处理步骤得到的柠檬酸处理玉米蛋白粉，直接进行蒸煮处理，其余步骤相同，制备玉米寡肽粉。
28.实施例4水解度检测按照实施例1-3、对比例1-2的方法进行酶解，使用ph-stat法测定酶解步骤中酶解液的水解度，结果见表1。
29.实施例5产物含量检测按照实施例1-3、对比例1-2的方法进行酶解，将得到的玉米寡肽粉，使用凯氏定氮法检测寡肽含量，结果见表2。
30.实施例6酶解液中小分子肽含量检测按照实施例1-3、对比例1-2的方法进行酶解，将得到的酶解液进行离心，离心后取上清液，将上清液通过1000da纳滤膜进行过滤，分别检测通过1000da纳滤膜的肽段的含量，以及被1000da纳滤膜截留的肽段的含量，结果见表3。