技术特征：
1.同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：s1001：选取酶切位点a、酶切位点a1、酶切位点b、酶切位点b1作为载体构建的酶切位点；s1002：在设计目标基因片段的pcr扩增引物时，在正向引物上加上所述酶切位点a1、所述酶切位点a、所述酶切位点b，反向引物上加上所述酶切位点b1；s1003：pcr扩增所述目标基因片段，将所述基因片段和所述载体使用同尾酶分开进行双酶切。2.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，步骤s1002中，在设计所述目标基因片段的pcr扩增引物时，还可以在正向引物上加上所述酶切位点a1，反向引物上加上所述酶切位点b1、所述酶切位点b、所述酶切位点a。3.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，步骤s1003中，所述载体使用同尾酶a和同尾酶b进行酶切。4.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，步骤s1003中，所述基因片段使用同尾酶a1和同尾酶b1进行酶切。5.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，所述酶切位点a和所述酶切位点a1为一对同尾酶的两个酶切位点；所述酶切位点b和所述酶切位点b1为另一对同尾酶对应的两个酶切位点。6.如权利要求5所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，同一对所述同尾酶对应的酶切位点酶切后得到的粘性末端相同。7.如权利要求4所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，酶切后的产物使用dna连接酶连接。8.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，步骤s1002中，所述酶切位点排布包括以下排布方式：正向引物上5
，
至3
，
依次为酶切位点a1、酶切位点a、酶切位点b，反向引物上为酶切位点b1；和/或正向引物上5
，
至3
，
依次为酶切位点a1，反向引物上依次为酶切位点b1、酶切位点b、酶切位点a1。9.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，所述载体和所述基因片段的连接方法包括以下至少之一：dna连接酶连接、同源重组。10.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，所述同尾酶包括但不限于：bamhi/bgli、sali/xhoi、psti/nsii、xbai/spei。
技术总结
本发明提供了同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法。同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法包括如下步骤：S1001：在设计目的基因片段PCR扩增反应引物前，选取酶切位点A、酶切位点A1、酶切位点B、酶切位点B1作为载体构建的酶切位点。目标基因片段扩增完成后，对载体和片段分开进行双酶切；本发明的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法选用同样的限制性酶切位点，同样的引物设计方法，同样的酶切方法，连接更多的基因片段，不会因为接口处原有的酶切位点消失，出现不能被之前的同尾酶中的任意一个限制性内切酶所识别的现象。的现象。的现象。
技术研发人员：张胜南 吴子豪 鲁立 欧雅莉 郭鹏程 张织 邓红梅 李嫦 宾桂青
受保护的技术使用者：肇东星湖生物科技有限公司
技术研发日：2022.12.19
技术公布日：2023/4/18