鸡源罗伊氏乳杆菌MC1、筛选方法及其应用与流程

本发明属于兽用益生菌领域，涉及一种禽类原籍菌，具体地说是鸡源罗伊氏乳杆菌mc1、筛选方法及其应用。

背景技术：

1、罗伊氏乳杆菌几乎存于所有脊椎动物和哺乳动物肠道内的乳酸菌，对肠粘膜具有很强的黏附能力，可改善肠道菌群分布，拮抗有害菌定植，分泌的代谢产物能广泛抑制有害菌的生长，同时可以有效提高机体的抵抗力。

2、魏氏梭菌又称产气荚膜杆菌，本病是一种急性非接触性细菌传染病。此菌在机体抵抗力正常的情况下不致病；但当机体抵抗力下降或诱发因素存在时，可迅速成为病因，导致动物发病。主要危害14～40日龄的成年健康鸡,以小肠黏膜坏死为特征,病鸡食欲不振，饮欲增加，消瘦，脱水，多在1-2周内死亡。

3、目前，为治疗肠炎多采用抗生素，可用青霉素、链霉素混合或庆大霉素肌注；鸡群发病较多时，可在日粮中添加土霉素加甲硝唑或在饮水中加入阿莫西林克拉维酸甲和甲硝唑饮水，但是由于抗生素类药物因长期使用，造成细菌的耐药性增强、残留，从而影响食品安全等问题，对于抗生素的使用已进行限制。益生菌制剂可有效改善动物肠道菌群的平衡，抑制产气夹膜梭菌在肠道的定殖和生长并提高机体的免疫功能，改善鸡群肠炎、腹泻的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的，旨在提供一种鸡源罗伊氏乳杆菌mc1，作为禽用益生菌，在改善鸡肠炎的同时，提高鸡免疫力。

2、本发明的另一个目的，是要提供上述鸡源罗伊氏乳杆菌mc1的筛选方法。

3、本发明还有一个目的，是要提供上述鸡源罗伊氏乳杆菌mc1的应用。

4、为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

5、一种鸡源罗伊氏乳杆菌mc1，该菌菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2022年11月02日，保藏编号为cgmcc no.26013，拉丁文名称为lactobacillus reuteri。

6、作为一种限定，所述鸡源罗伊氏乳杆菌mc1的16srrna基因序列如下：

7、tgctcaggatgaacgccggcggtgtgctaatacatgcaagtcgtacgcactggcccaactgattgatggtgcttgcacctgattgacgatggatcaccagtgagtggcggacgggtgagtaacacgtaggtaacctgccccggagcgggggataacatttggaaacagatgctaataccgcataacaacaaaagccacatggcttttgtttgaaagatggctttggctatcactctgggatggacctgcggtgcattagctagttggtaaggtaacggcttaccaaggcgatgatgcatagccgagttgagagactgatcggccacaatggaactgagacacggtccatactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccacaatgggcgcaagcctgatggagcaacaccgcgtgagtgaagaagggtttcggctcgtaaagctctgttgttggagaagaacgtgcgtgagagtaactgttcatgcagtgacggtatccaaccagaaagtcacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgcaggcggttgcttaggtctgatgtgaaagccttcggcttaaccgaagaagtgcatcggaaaccgggcgacttgagtgcagaagaggacagtggaactccatgtgtagcggtggaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggcggctgtctggtctgcaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaacaggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgagtgctaggtgttggagggtttccgcccttcagtgccggagctaacgcattaagcactccgcctggggagtacgaccgcaaggttgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagctacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcttgcgctaaccttagagataaggcgttcccttcggggacgcaatgacaggtggtgcatggtcgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgttactagttgccagcattaagttgggcactctagtgagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggacgacgtcagatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggacggtacaacgagtcgcaaactcgcgagagtaagctaatctcttaaagccgttctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacgaagtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagtttgtaacgccc。

8、本发明还提供了上述鸡源罗伊氏乳杆菌mc1筛选方法，包括依次进行的以下步骤：

9、s1.无菌条件下取成年健康鸡盲肠中的内容物；

10、s2.将内容物接种于固体琼脂培养基中，置于30～40℃的厌氧条件下培养24～72h；

11、s3.选取固体琼脂培养基上的单菌落接种至mrs琼脂培养基，置于30～40℃的细菌培养箱静置培养24～72h，得纯培养物；

12、s4.取纯培养物的单个菌落接种至液体培养基中，将接种后的液体培养基于30～40℃的振荡培养24～72h，即得所述的鸡源罗伊氏乳杆菌mc1。

13、作为一种限定，所述步骤s2中，固体培养基为含1～3％小牛血清的胰酪蛋白胨大豆琼脂培养基、mrs琼脂培养基、亚硫酸铁琼脂培养基、lb液体培养基或mrs肉汤培养基。

14、作为另一种限定，所述步骤s2中，厌氧条件是由体积比为10：5：85的h2、co2和n2混合而成的。

15、作为第三种限定，所述步骤s4中，液体培养基为mrs肉汤培养基。

16、本发明还提供了上述鸡源罗伊氏乳杆菌mc1在制备改善鸡肠炎的制剂中的应用。

17、本发明还提供了上述的鸡源罗伊氏乳杆菌mc1在制备提高鸡免疫力制剂中的应用。

18、由于采用了上述技术方案，本发明与现有技术相比，所取得的技术进步在于：

19、本发明的鸡源罗伊氏乳杆菌mc1，为原籍菌，适应性强，能够黏附于肠上皮细胞上，改善肠道菌群，分泌罗伊氏素等抗菌物质能够抑制有害菌，分泌的其它代谢刺激机体产生粘膜相关免疫因子，提高机体免疫力，可改善鸡群的肠炎和腹泻作用。

20、本发明适用于分离筛选鸡源罗伊氏乳杆菌mc1，筛选的鸡源罗伊氏乳杆菌mc1适用于改善鸡群肠炎和腹泻，提高鸡免疫力。