用于高血压药物基因多种SNP位点检测的核酸组合物、试剂盒和方法与流程

本发明属于基因多态性检测，尤其涉及一种用于高血压药物基因多种snp位点检测的核酸组合物、试剂盒和方法。

背景技术：

1、高血压，是日常生活中最常见的疾病，是慢性非传染性疾病之首。全国高血压患病率26.6％，患病人数高达2亿，高血压一般可防可控。研究表明，降压治疗可降低脑卒中风险35％-40％，降低心肌梗死风险20％-25％，降低心力衰竭风险超过50％。因此，预防和控制高血压，是遏制心脑血管疾病流行的核心策略。

2、药物是治疗高血压患者最有效的措施。为了控制病情，防止其他并发症发生，患者需要长期服药。但在临床上，高血压药物治疗中存在不合理用药导致高血压控制不良、药物的疗效及不良反应不稳定，遗传因素影响存在明显的个体差异等。导致血压的控制率得不到显著的改善，控制达标率仅达到15.3％。由于治疗药物品种繁多，在实际治疗过程中，多数患者都会经历“试药”过程，包括试品种、试剂量、试给药品次、试服药时间等，直至各项生理指标达标。而这种“试药”的模式，对高血压患者来讲无疑是痛苦的，还会造成资源和时间的浪费，以及难以预知的药物不良反应。进行降压药物基因检测，可提供个体化用药指导，缩短药物调整时间，避免以身试药。

3、患者个体基因差异会造成药物代谢能力不同，同一药物不同患者的用药反应也有很大差别。医生通常需要让患者“试药”三到六个月才能筛选出适合的药物，在这个过程中，不少人会中断甚至放弃治疗。每个人的基因都不尽相同，而药物作用于身体的疗效和副作用会因患者的个体基因型不同而产生差异。2015年《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行)》中明确提到了降压药物的相关基因位点，建议临床根据相关基因型选择降压药物进行治疗，而在2017年《高血压合理用药指南(第2版)》中明确提出药物物基因组学已经成为临床个体化用药的重要工具，高血压用药时应该考虑药物基因多态性的影响。

4、高血压基因检测主要用于高血压药物的选择，即高血压药物敏感基因检测。患者对药物敏感度不同，除临床评估外还有基因决定，即携带等位基因，该基因多态性可能对此类药物更加敏感，而对其他药物不敏感，可帮助进行判断。但目前药物敏感基因比较复杂，属于多效性决定。降压的五大类药物有：1、利尿剂类，常用的药物有速尿、托拉噻米、双氢克尿噻、螺内酯。2、β受体阻滞剂类，常用的药物美托洛尔、比索洛尔等。3、钙离子通道阻滞剂，常用的药物有苯磺酸氨氯地平、硝苯地平控释片、非洛地平缓释片。4、血管紧张素转换酶抑制剂，如卡托普利、依那普利、雷米普利等。5、血管紧张素ii受体拮抗剂，如氯沙坦、缬沙坦、厄贝沙坦、坎地沙坦等。对于根据临床经验给药却不能达到理想降压效果的患者来说，药物基因检测技术能够分析其治疗失败的原因，制定更加有针对性的降压药物治疗方案，从而提高降压药物疗效、降低药物不良反应、缩短治疗周期和减轻患者经济负担。

5、因此，提供一种用于高血压药物基因多种snp位点检测的核酸组合物具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的主要目的在于提供一种用于高血压药物基因多种snp位点检测的核酸组合物、试剂盒和方法，以克服现有技术中的不足。

2、为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

3、本发明实施例的第一方面，提供一种用于高血压药物基因多种snp位点检测的核酸组合物，所述核酸组合物包括引物探针组合1-引物探针组合12中的任意一种或两种以上的组合；

4、所述引物探针组合1包括seq id no.1所示的正向引物，seq id no.2所示的反向引物，seq id no.3所示的突变探针，seq id no.4所示的野生探针；

5、所述引物探针组合2包括seq id no.5所示的正向引物，seq id no.6所示的反向引物，seq id no.7所示的突变探针，seq id no.8所示的野生探针；

6、所述引物探针组合3包括seq id no.9所示的正向引物，seq id no.10所示的反向引物，seq id no.11所示的突变探针，seq id no.12所示的野生探针；

7、所述引物探针组合4包括seq id no.13所示的正向引物，seq id no.14所示的反向引物，seq id no.15所示的突变探针，seq id no.16所示的野生探针；

8、所述引物探针组合5包括seq id no.17所示的正向引物，seq id no.18所示的反向引物，seq id no.19所示的突变探针，seq id no.20所示的野生探针；

9、所述引物探针组合6包括seq id no.21所示的正向引物，seq id no.22所示的反向引物，seq id no.23所示的突变探针，seq id no.24所示的野生探针；

10、所述引物探针组合7包括seq id no.25所示的正向引物，seq id no.26所示的反向引物，seq id no.27所示的突变探针，seq id no.28所示的野生探针；

11、所述引物探针组合8包括seq id no.29所示的正向引物，seq id no.30所示的反向引物，seq id no.31所示的突变探针，seq id no.32所示的野生探针；

12、所述引物探针组合9包括seq id no.33所示的正向引物，seq id no.34所示的反向引物，seq id no.35所示的突变探针，seq id no.36所示的野生探针；

13、所述引物探针组合10包括seq id no.37所示的正向引物，seq id no.38所示的反向引物，seq id no.39所示的突变探针，seq id no.40所示的野生探针；

14、所述引物探针组合11包括seq id no.41所示的正向引物，seq id no.42所示的反向引物，seq id no.43所示的突变探针，seq id no.44所示的野生探针；

15、所述引物探针组合12包括seq id no.45所示的正向引物，seq id no.46所示的反向引物，seq id no.47所示的突变探针，seq id no.48所示的野生探针。

16、进一步的，所述snp分别选自rs1801133、rs1801253、rs5182、rs5030865、rs1065852、rs12248560、rs4961、rs16960228、rs7297610、rs5186、rs5051、rs776746。

17、本发明实施例的第二方面，提供一种用于高血压药物基因多种snp位点检测的试剂盒，包括上述的核酸组合物。

18、进一步的，所述的试剂盒还包括pcr缓冲液、dntps和taq dna聚合酶。

19、本发明实施例的第三方面，提供一种不以疾病诊断治疗为目的高血压药物基因多种snp位点检测的方法，包括以下步骤：

20、s1、提取样本dna，备用；

21、s2、将样本dna、阴性对照、阳性对照分别加入装有权利要求1所述核酸组合物的pcr反应管中，将pcr反应管放入pcr仪中进行pcr扩增。

22、进一步的，所述pcr扩增包括95℃预变性5min，进行1个循环；95℃变性10s，60℃退火45s，进行40个循环。

23、进一步的，将pcr反应管放入pcr仪前置于温度为2-8℃的环境中保存。

24、进一步的，所述pcr扩增时采集fam、vic、rox三种荧光信号，根据采集的fam、vic、rox三种荧光信号，进行检测结果分析。

25、本发明实施例的第四方面，提供一种上述的核酸组合物在人全血样本中高血压相关药物基因多态性定性检测中的应用。

26、进一步的，所述高血压相关药物包括氢氯噻嗪、布美他尼、呋塞米、托拉塞米、氨氯地平、硝苯地平、厄贝沙坦、缬沙坦、替米沙坦、氯沙坦、坎地沙坦贝那普利、培哚普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、群多普利、雷米普利、阿替洛尔、美托洛尔。

27、与现有技术相比，本发明的优点包括：

28、本发明提供了一种用于高血压药物基因多种snp位点检测的核酸组合物、试剂盒和方法，所述用于高血压药物基因多种snp位点检测的核酸组合物，通过12个引物探针组合能够对多种snp位点进行检测，通过pcr扩增时相应通道的信号强度进行实时监测和输出，能够实现检测结果的定性分析，从而得出药物治疗失败的原因，制定更加有针对性的降压药物治疗方案，提高降压药物疗效、降低药物不良反应、缩短治疗周期和减轻患者经济负担。