利用新型植物乳植杆菌菌株中药发酵及应用的制作方法

1.本发明涉及微生物技术领域，特别涉及利用新型植物乳植杆菌菌株中药发酵及应用。


背景技术：

2.植物乳植杆菌属于不产芽孢的一种革兰氏阳性益生菌，主要应用于益生菌产品和中药发酵。植物乳植杆菌的生物活性越高，工业化生产的产量越高，功效作用也越强，进一步降低生产成本和提高生产效率。因此，筛选高活性的植物乳植杆菌成为行业的目标。
3.植物乳植杆菌开发益生菌产品，需要具有较强的耐胃酸和胆盐的能力，以保证有效通过胃和小肠到达大肠发挥作用。大肠埃希氏菌等肠道有害菌增加，会导致菌群失调，引发多种疾病，植物乳植杆菌如果具有较好的抑制有害菌的作用，会加快恢复肠道菌群平衡。自由基是机体氧化反应中产生的有害化合物，可促进机体老化、疾病和引发健康问题，清除自由基等抗氧化，有利于维护机体的健康。
4.药食同源中药等由于其安全性可以应用于食品，但功效相对不是很理想，如何提高药食同源中药的功效成为行业难点，通过中药发酵发酵技术可以解决药食同源中药等植物功效低的问题，但找到发酵中药的优秀菌株是中药发酵的关键。
5.未见在益生菌和中药等草本植物发酵方面均具有显著性能的植物乳植杆菌菌株的报道。
6.现有植物乳植杆菌生物活性越低、耐胃酸和胆盐的能力弱、抑制有害菌和调节菌群平衡功能弱、清除自由基和抗氧化的能力弱，中药等植物发酵能力和发酵后产品功能低。


技术实现要素：

7.有鉴于此，本发明提供了利用新型植物乳植杆菌菌株中药发酵及应用，所述菌株具有生物活性高、耐酸、耐胆盐、抗氧化能力强、调节植物发酵和菌群平衡的功能，能够提高植物发酵能力和发酵后产品的功能。
8.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
9.本发明提供了植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)lp-k0901，其保藏编号为gdmcc no:63007。
10.在本发明的一些具体实施方案中，上述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)lp-k0901包括其活菌、灭活菌体、发酵液、外泌体或代谢产物中的一种或多种。
11.在本发明的一些具体实施方案中，上述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)lp-k0901具有较高的生物活性、较强的耐胃酸能力和较强的耐胆盐能力。
12.本发明还提供了上述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)lp-k0901在制备以下任意项中的应用：
13.(i)、微生态制品、益生菌制品、合生元制品和/或后生元制品；和/或
14.(ii)、用于植物发酵的制品；
15.所述微生态制品、益生菌制品、合生元制品、后生元制品和/或所述用于植物发酵的制品包括但不限于药品、保健食品、特殊医学用途食品、功能性食品、食品、化妆品、饲料、饲料添加剂或宠物食品中的一种或多种；和/或
16.所述微生态制品、益生菌制品、合生元制品、后生元制品和/或所述用于植物发酵的制品的剂型包括但不限于粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、浸膏、液体制剂、糖或果冻中的一种或多种；和/或
17.所述糖包括但不限于软糖和/或压片糖果；和/或
18.所述植物发酵包括但不限于中药发酵、水果蔬菜发酵或新食品原料发酵中的一种或多种；
19.所述中药发酵包括但不限于药食同源中药发酵；
20.所述中药包括但不限于茯苓、葛根或灵芝中的一种或多种。
21.本发明还提供了制品，包括上述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)lp-k0901；
22.所述制品包括以下任意项：
23.(i)、微生态制品、益生菌制品、合生元制品、和/或后生元制品；和/或
24.(ii)、用于植物发酵的制品；
25.所述微生态制品、益生菌制品、合生元制品、后生元制品和/或所述用于植物发酵的制品包括但不限于药品、保健食品、特殊医学用途食品、功能性食品、食品、化妆品、饲料、饲料添加剂或宠物食品中的一种或多种；和/或
26.所述微生态制品、益生菌制品、后生元制品和/或所述用于植物发酵的制品的剂型包括但不限于粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、浸膏、液体制剂、糖或果冻中的一种或多种；和/或
27.所述糖包括但不限于软糖和/或压片糖果；和/或
28.所述植物发酵包括但不限于中药发酵、水果蔬菜发酵或新食品原料发酵中的一种或多种；
29.所述中药发酵包括但不限于药食同源中药发酵；
30.所述中药包括但不限于茯苓、葛根或灵芝中的一种或多种。
31.本发明还提供了产品，其经上述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)lp-k0901发酵制得。
32.在本发明的一些具体实施方案中，上述产品中，所述产品包括但不限于植物发酵的产品；和/或
33.所述产品包括但不限于药品、保健食品、特殊医学用途食品、功能性食品、食品、化妆品、饲料、饲料添加剂或宠物食品中的一种或多种；和/或
34.所述产品的剂型包括但不限于粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、浸膏、液体制剂、糖或果冻中的一种或多种；和/或
35.所述糖包括但不限于软糖和/或压片糖果；和/或
36.所述植物发酵包括但不限于中药发酵、水果蔬菜发酵或新食品原料发酵中的一种或多种；
37.所述中药发酵包括但不限于药食同源中药发酵；
38.所述中药包括但不限于茯苓、葛根或灵芝中的一种或多种。
39.本发明还提供了上述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)lp-k0901；和/或
40.上述制品；和/或
41.上述产品在以下任意项中的应用：
42.(i)、制备抑制有害菌生长的产品；和/或
43.(ii)、制备促进有益菌生长的产品；和/或
44.(iii)、制备调节菌群平衡的产品；和/或
45.(iv)、制备抗氧化的产品；和/或
46.(v)、提高植物发酵的产品性能；和/或
47.(vi)、制备预防和/或治疗疾病的药物或制剂；和/或
48.(vii)、制备健康保健的产品。
49.在本发明的一些具体实施方案中，上述应用中，所述有害菌包括但不限于金黄色葡萄球菌和/或大肠埃希氏菌；和/或
50.所述有益菌包括但不限于双歧杆菌和/或乳杆菌；和/或
51.所述菌群平衡包括但不限于肠道菌群、阴道菌群、皮肤菌群、口腔菌群、胃部菌群或泌尿系统菌群中的一种或多种；和/或
52.所述抗氧化包括但不限于清除自由基；作为优选，所述清除自由基包括但不限于清除dpph自由基；和/或
53.所述提高植物发酵的产品性能包括但不限于提高安全性和/或增强免疫力功能；和/或
54.所述预防和/或治疗疾病包括但不限于消化系统疾病、运动系统疾病、呼吸系统疾病、泌尿系统疾病、生殖系统疾病、循环系统疾病、内分泌系统疾病、神经系统疾病或免疫系统疾病中的一种或多种；和/或
55.所述健康保健包括但不限于营养保健、维护身体健康或养颜美容中的一种或多种。
56.在本发明的一些具体实施方案中，上述应用中，所述消化系统疾病包括但不限于脾虚、养胃、腹泻、肠易激综合征、溃疡性结肠炎、克罗恩病、抗生素相关性腹泻、伪膜性肠炎、小儿肺炎继发性腹泻、肠癌、肿瘤放化疗辅助治疗、腹胀和消化不良、便秘、便臭、肝胆疾病、病毒性腹泻、喂养不耐受、坏死性小肠结肠炎、黄疸、口腔溃疡、鹅口疮、促进小儿肠道发育成熟、消化吸收、营养保健或生长发育或营养吸收障碍性疾病中的一种或多种；
57.所述肝胆疾病包括但不限于肝病和/或解酒护肝；
58.作为优选，所述肝胆疾病包括但不限于脂肪肝、肝炎、肝硬化或肝癌中的一种或多种；
59.作为优选，所述肝胆疾病包括但不限于酒精性肝病和/或非酒精性肝病；
60.作为优选，所述肝胆疾病包括但不限于酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、非酒精性脂肪肝或非酒精性脂肪性肝炎中的一种或多种；和/或
61.所述运动系统疾病包括但不限于关节炎、骨质疏松或佝偻病中的一种或多种；
62.作为优选，所述运动系统疾病包括但不限于退行性关节炎、类风湿性关节炎或强
直性脊柱炎中的一种或多种；和/或
63.所述呼吸疾病疾病包括但不限于养肺、润肺止咳、肺部结节、肺炎、新型冠状病毒肺炎、新型冠状病毒感染、反复呼吸道感染或抗病毒感染中的一种或多种；和/或
64.所述泌尿系统疾病包括但不限于肾虚；
65.作为优选，所述泌尿系统疾病包括但不限于肾阴虚和/或肾阳虚；和/或
66.所述生殖系统疾病包括但不限于阴道炎、子宫肌瘤、痛经、乳房结节、乳腺癌或更年期综合征中的一种或多种；和/或
67.所述循环系统疾病包括但不限于心脑血系统疾病、高脂血症或高血压中的一种或多种；和/或
68.所述内分泌系统疾病包括但不限于高血糖、血糖异常、糖尿病、高尿酸、高尿酸血症、痛风或甲状腺结节中的一种或多种；和/或
69.所述神经系统疾病包括但不限于失眠、缓解情绪、睡眠异常、头痛、抑郁或焦虑中的一种或多种；和/或
70.所述免疫系统疾病包括但不限于变态反应性疾病、过敏、皮肤病、增强免疫、过敏性鼻炎中的一种或多种；和/或
71.所述维护身体健康包括但不限于祛湿、补气、补阳、补血、补阴或抗氧化中的一种或多种；和/或
72.所述养颜美容包括但不限于抗糖、保湿或美白中的一种或多种。
73.本发明还提供了药物，包括以下任意项以及可接受的辅料：
74.(i)、上述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)lp-k0901；和/或
75.(ii)、上述制品；和/或
76.(iii)、上述产品。
77.本发明还提供了药物组合，包括上述药物以及其他任意有效成分。
78.本发明的菌株及应用有如下效果：
79.生物活性实验的结果表明植物乳植杆菌lp-k0901培养16h和24h的od值对比其他菌株高，说明植物乳植杆菌lp-k0901生物活性比其他菌株高。耐酸能力实验结果表明ph 2.0条件下5株植物乳植杆菌随着时间延长存活率都有不同程度下降，其中植物乳植杆菌lp-k0901存活率最高，说明其在ph 2.0条件下耐酸能力最强。其中植物乳植杆菌lp-k0901在ph 3.0条件下随着时间延长，存活率反而升高，4h后大于100％，说明其在ph 3.0条件下耐酸能力最强。其他4株菌随时间延长存活率都呈下降趋势。耐胆盐能力实验的结果表明在0.3％胆盐条件下，5株植物乳植杆菌存活率都下降，其中植物乳植杆菌lp-k0901存活率最高，说明该菌耐受0.3％胆盐能力最强，并且能快速适应高胆盐浓度。清除dpph自由基实验结果表明植物乳植杆菌lp-k0901发酵液对dpph自由基的清除率最高，说明该菌种对dpph自由基的清除能力最强。抑菌能力实验结果表明通过对比5株植物乳植杆菌对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径表明植物乳植杆菌lp-k0901抑制金黄色葡萄球菌的能力最强。通过对比5株植物乳植杆菌对大肠埃希氏菌的抑菌圈直径表明植物乳植杆菌lp-k0901抑制大肠埃希氏菌的能力最强。发酵中药实验结果表明用植物乳植杆菌lp-k0901发酵茯苓24h至48h，od值最高、ph值最低，说明该菌在茯苓发酵液中长势最好，产酸最多；用植物乳植杆菌lp-k0901发酵灵芝24h至48h，od值最高、ph值最低，说明该菌在灵芝发酵液中长势最好，产酸最多；用
植物乳植杆菌lp-k0901发酵葛根24h至48h，od值最高、ph值最低，说明该菌在灵芝发酵液中长势最好，产酸最多。增强免疫力实验结果表明植物乳植杆菌lp-k0901发酵中药茯苓、灵芝、葛根24h后，发酵液吞噬指数高于其他菌株发酵液，说明经过该菌株发酵后，发酵液的免疫力比其他菌株提升的更多。
80.生物保藏说明
81.生物材料：lactiplantibacillus plantarum lp-k0901，分类命名：lactiplantibacillus plantarum，于2022年11月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏中心地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所；保藏编号为gdmcc no:63007。
82.本发明中所述lp-k0901即为上述保藏编号为gdmcc no:63007的菌株。
具体实施方式
83.本发明公开了利用新型植物乳植杆菌菌株中药发酵及应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
84.针对现有益生菌菌株生物活性、耐酸、耐胆盐、抗氧化、植物发酵和调节菌群等功能不理想等问题，本发明提供了一株综合性能优于市场植物乳植杆菌的菌种——植物乳植杆菌lp-k0901。
85.基于本领域现有技术存在的上述不足和需求，本发明的目的在于提供一株新型植物乳植杆菌lp-k0901，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：gdmcc no:63007。该株植物乳植杆菌在生物活性、耐胃酸和胆盐的能力、抑制有害菌、促进有益菌和调节肠道菌群平衡功能、抗氧化、植物发酵能力和发酵后产品功能、防治疾病和健康保健等方面优于市场已上市的植物乳植杆菌菌株和本发明人筛选到的其他植物乳植杆菌菌株。
86.所述调节菌群平衡，包括肠道菌群、阴道菌群、皮肤菌群、口腔菌群、胃部菌群、泌尿系统菌群等人体菌群。
87.所述抑制有抑菌，包括金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌等。
88.所属促进有益菌生长，包括促进双歧杆菌、乳杆菌等。
89.所述抗氧化，包括清除自由基，进一步包括清除dpph自由基。
90.所述植物发酵能力，包括中药发酵、水果蔬菜发酵、新食品原料发酵等，中药发酵进一步包括药食同源中药发酵。
91.所述提高植物发酵产品功能，指通过对上述植物发酵，提高上述植物的功能，进一步包括提高安全性和增强免疫力功能。
92.所述上述产品在防治疾病和健康保健中的应用。
93.所述防治疾病和健康保健，包括治疗消化系统疾病、运动系统疾病、呼吸系统疾病、泌尿系统疾病、生殖系统疾病、循环系统疾病、内分泌系统疾病、神经系统疾病、免疫系统疾病、营养保健、维护身体健康、养颜美容等。
94.所述消化系统疾病，包括脾虚、养胃、腹泻、肠易激综合征、溃疡性结肠炎、克罗恩
病、抗生素相关性腹泻、伪膜性肠炎、小儿肺炎继发性腹泻、肠癌、肿瘤放化疗辅助治疗、腹胀和消化不良、便秘、便臭、肝胆疾病、病毒性腹泻、喂养不耐受、坏死性小肠结肠炎、黄疸、口腔溃疡、鹅口疮、促进小儿肠道发育成熟、消化吸收、营养保健或生长发育、营养吸收障碍性疾病等。
95.所述肝胆疾病，包括肝病或解酒护肝，进一步包括脂肪肝、肝炎、肝硬化或肝癌，进一步包括酒精性肝病或非酒精性肝病，进一步包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、非酒精性脂肪肝或非酒精性脂肪性肝炎等。
96.所述运动系统疾病，包括关节炎、骨质疏松、佝偻病，进一步包括退行性关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎等。
97.所述呼吸疾病疾病，包括养肺、润肺止咳、肺部结节、肺炎、新冠肺炎、反复呼吸道感染、抗病毒感染等。
98.所述泌尿系统疾病，包括肾虚，进一步包括肾阴虚和肾阳虚等。
99.所述生殖系统疾病，包括阴道炎、子宫肌瘤、痛经、乳房结节、乳腺癌、更年期综合征等
100.所述循环系统疾病，包括心脑血系统疾病、高脂血症、高血压等。
101.所述内分泌系统疾病，包括高血糖、血糖异常、糖尿病、高尿酸、高尿酸血症、痛风、甲状腺结节等。
102.所述神经系统疾病，包括失眠、缓解情绪、睡眠异常、头痛、抑郁、焦虑等。
103.所述免疫系统疾病，包括变态反应性疾病、过敏、皮肤病、增强免疫、过敏性鼻炎等。
104.所述维护身体健康，包括祛湿、补气、补阳、补血、补阴、抗氧化等。
105.所述养颜美容，包括抗糖、保湿、美白等。
106.微生态制品、益生菌制品、合生元制品或后生元制品，包括活性成分；所述活性成分包括植物乳植杆菌lp-k0901，保藏编号：gdmcc no:63007。所述的一种微生态制品、益生菌制品或后生元制品还包括：辅料；所述辅料选自药用辅料或食用辅料；所述制品包括药品、保健食品、特殊医学用途食品、食品、化妆品、饲料、饲料添加剂、宠物食品等；所述制品的剂型包括粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、浸膏、液体制剂、糖、果冻，糖进一步包括软糖、压片糖果。
107.植物发酵制品，所用发酵菌种至少包含植物乳植杆菌lp-k0901，保藏编号：gdmcc no:63007。所述的植物发酵制品还包括：辅料；所述辅料选自药用辅料或食用辅料；所述制品包括药品、保健食品、特殊医学用途食品、食品、化妆品、饲料、饲料添加剂、宠物食品等；所述制品的剂型包括粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、浸膏、液体制剂、糖、果冻，糖进一步包括软糖、压片糖果。
108.本发明所述植物乳植杆菌lp-k0901包括活的菌体、灭活菌体或代谢产物等。
109.本发明从自然条件筛选到植物乳植杆菌。
110.实施例说明：本发明以植物乳植杆菌lp-k0901为代表说明实施方法和效果，但不是对本发明的限制。
111.本发明所述的植物乳植杆菌即为lactiplantibacillus plantarum。
112.如无特殊说明，本发明涉及的原料、试剂、耗材以及仪器皆为普通市售品，均可由
市场购得。
113.下面结合实施例，进一步阐述本发明：
114.实施例1
115.制备例说明：这里通过植物乳植杆菌lp-k0901散剂为例进行具体说明，其他植物乳植杆菌lp-k0901制剂的制备方法本领域技术人员通过本实施例很容易掌握，其他剂型的制备方法本领域技术人员通过本实施很容易掌握，在此不再一一叙述说明。制备方法并不局限于本发明实施例所述，公知的能够达到制备目的的方法均可以，实施例的制备说明只是对本发明的说明，并不是对本发明保护范围的限制。
116.1菌粉的制备
117.将植物乳植杆菌lp-k0901接种于mrs液体培养基中，37℃培养24h后，将所得培养液离心分离出菌体后，将菌体冷冻真空干燥，调制出干燥菌粉。
118.2制备成散剂等剂型
119.将植物乳植杆菌lp-k0901制成菌粉，然后按照需要添加相关辅料制成各种剂型，优选根据植物乳植杆菌lp-k0901菌粉的活菌数，制成散剂，使活菌数不低于1
×
107cfu/g，然后装袋。
120.实施例2：生物活性实验
121.实验方法：lp-k0901菌种在mrs液体培养基中活化7h，用无菌水稀释od值为1，按1％接种量，接种至100ml的mrs液体培养基中，在37℃下静置培养16～24小时，在第16小时和第24小时取样检测od值。结果见表1。
122.表1：菌种生物活性od值
[0123][0124]
结论：经统计学分析植物乳植杆菌lp-k0901组与其他组相比(p《0.05)差异显著。植物乳植杆菌lp-k0901培养16小时和24小时od值对比其他菌株高，说明植物乳植杆菌lp-k0901生物活性比其他菌株高。
[0125]
实施例3：耐酸能力实验
[0126]
实验方法：用1mol/l hcl将mrs液体培养基ph值分别调为2.0和3.0；121℃灭菌15min，lp-k0901菌种在mrs液体培养基中活化16h，用无菌水稀释od值为5.0，接种量为2％，使培养基中的初始活菌数相同，于37℃恒温培养，在0h、4h取样测od值，其中，菌株存活率(％)＝nt/n0
×
100％，式中n0表示菌株0h的od值，nt表示菌株4h的活菌数od值。结果见表2和表3。
[0127]
表2：菌种在ph 2.0条件下的数据表
[0128][0129]
表3：菌种在ph 3.0条件下的数据表
[0130][0131]
结论：经统计学分析植物乳植杆菌lp-k0901组与其他组相比(p《0.01)差异极显著。
[0132]
1、ph 2.0条件下5株植物乳植杆菌随着时间延长存活率都有不同程度下降，其中植物乳植杆菌lp-k0901存活率最高，说明其在ph 2.0条件下耐酸能力最强。
[0133]
2、植物乳植杆菌lp-k0901在ph 3.0条件下随着时间延长，存活率反而升高，4h后大于100％，说明其在ph 3.0条件下耐酸能力最强。其他4株菌随时间延长存活率都呈下降趋势。
[0134]
实施例4：耐胆盐能力实验
[0135]
实验方法：猪胆盐称好后用纯水搅拌溶解，加到mrs肉汤中配置成浓度为0.3％胆盐液体培养基。lp-k0901菌种在mrs液体培养基中活化16h。以相同od值的种子液接种2％至含0.3％胆盐液体培养基中，37℃培养4h。在0h、4h分别取样测od，统计存活率。其中，菌株存活率(％)＝nt/n0
×
100％，式中n0表示菌株0h的od值，nt表示菌株4h的活菌数od值。结果见表4。
[0136]
表4：菌种在0.3％胆盐条件下的存活率
[0137][0138]
结论：经统计学分析植物乳植杆菌lp-k0901组与其他组相比(p《0.01)差异极显著。在0.3％胆盐条件下，5株植物乳植杆菌存活率都下降，其中植物乳植杆菌lp-k0901存活率最高，说明该菌耐受0.3％胆盐能力最强，并且能快速适应高胆盐浓度。
[0139]
实施例5：清除dpph自由基实验
[0140]
实验方法：将2ml发酵24h的lp-k0901发酵液加入到2ml 0.1mmol/l新鲜配制的dpph-无水乙醇溶液中，混匀，在黑暗中避光室温反应30min，10000r/min离心2min，取上清液在517nm波长处测定吸光值，记为as。空白组以等体积无水乙醇替换dpph溶液测量吸光值，记为ab；对照组以超纯水替换样品溶液测量吸光值，记为ac。
[0141]
dpph自由基清除率(％)＝[1-(as-ab)/ac]
×
100％，其中as为样品组吸光值；ac为对照组吸光值(蒸馏水替代样品)；ab为空白组吸光值(无水乙醇替代dpph)。结果见表5。
[0142]
表5：dpph自由基清除率
[0143][0144]
结论：经统计学分析植物乳植杆菌lp-k0901组与其他组相比(p《0.05)差异显著。实验数据表明植物乳植杆菌lp-k0901发酵液对dpph自由基的清除率最高，说明该菌种对dpph自由基的清除能力最强。
[0145]
实施例6：抑菌能力实验
[0146]
实验方法：lp-k0901菌种在mrs肉汤中37℃活化16h。每个平板倒20ml mrs琼脂培养基，取100μl供试菌液(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)进行梯度稀释，稀释后的菌液浓度在105～106cfu左右即可，分别取稀释好的菌液100μl滴加在固体平板上，用涂布棒进行涂布，正放备用。将灭过菌的牛津杯轻放在平板培养基表面(3个/板)，静置5min之后，吸取100μl活化后的菌液加入牛津杯中，待菌液充分扩散2h后，将平板转移至37℃培养箱培养24～72h，定时观察现象，用直尺测量抑菌圈直径，并拍照记录。结果见表6。
[0147]
表6：菌种对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌圈直径数据
[0148][0149]
结论：经统计学分析植物乳植杆菌lp-k0901组与其他组相比(p《0.05)差异显著。
[0150]
1、通过对比5株植物乳植杆菌对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径表明植物乳植杆菌lp-k0901抑制金黄色葡萄球菌的能力最强。
[0151]
2、通过对比5株植物乳植杆菌对大肠埃希氏菌的抑菌圈直径表明植物乳植杆菌lp-k0901抑制大肠埃希氏菌的能力最强。
[0152]
实施例7：发酵中药实验
[0153]
实验方法：分别将茯苓、灵芝、葛根加水后煮沸提取1～2h，过滤收集上清液，加4％结晶果糖，分装后121℃灭菌30min；lp-k0901菌种在mrs肉汤中37℃活化16h。按2％接种量接种，37℃培养48h，在24h、48h取样检测od值和ph值。结果见表7～9。
[0154]
表7：发酵茯苓实验数据
[0155][0156]
结论：经统计学分析植物乳植杆菌lp-k0901组与其他组相比(p《0.01)差异极显著。实验结果表明用植物乳植杆菌lp-k0901发酵茯苓24h至48h，od值最高、ph值最低，说明该菌在茯苓发酵液中长势最好，产酸最多。
[0157]
表8：发酵灵芝实验数据
[0158][0159]
结论：经统计学分析植物乳植杆菌lp-k0901组与其他组相比(p《0.01)差异极显著。实验结果表明用植物乳植杆菌lp-k0901发酵灵芝24h至48h，od值最高、ph值最低，说明该菌在灵芝发酵液中长势最好，产酸最多。
[0160]
表9：发酵葛根实验数据
[0161][0162]
结论：经统计学分析植物乳植杆菌lp-k0901组与其他组相比(p《0.01)差异极显著。实验结果表明用植物乳植杆菌lp-k0901发酵葛根24h至48h，od值最高、ph值最低，说明该菌在灵芝发酵液中长势最好，产酸最多。
[0163]
实施例8：增强免疫力实验
[0164]
实验方法：raw264.7细胞加到96孔板中，每孔200μl，37℃，5％ co2条件培养16h，用0.8～1mmol/l的h2o2溶液加到96孔板中对细胞进行损伤，对照组加培养液，37℃，5％ co2条件培养24h。将lp-k0901发酵液稀释后加到96孔板中，h2o2组和对照组加培养液，37℃，5％ co2条件培养24h。吸出液体后，每孔加10％浓度的中性红染液，继续培养4h。吸出中性红染液，加入中性红裂解液150μl/孔，混匀10min，酶标仪490nm波长下检测。吞噬指数＝实验组od值/对照组od值，提高率＝(实验组吞噬指数-h2o2组吞噬指数)/h2o2组吞噬指数*100％。结果见表10～12。
[0165]
表10：茯苓发酵液增强免疫力实验数据
[0166][0167]
表11：茯苓灵芝液增强免疫力实验数据
[0168][0169]
表12：葛根发酵液增强免疫力实验数据
[0170][0171]
结论：经统计学分析植物乳植杆菌lp-k0901组与其他组相比(p《0.05)差异显著。经过细胞吞噬指数实验证明，植物乳植杆菌lp-k0901发酵中药茯苓、灵芝、葛根24h后，发酵液吞噬指数高于其他菌株发酵液，说明经过该菌株发酵后，发酵液的免疫力比其他菌株提升的更多。
[0172]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。