一种卡络磺钠降解杂质A及其制备方法、检测方法和用途与流程

本发明属于药物分析及质量控制领域，具体涉及一种卡络磺钠降解杂质a及其制备方法、检测方法和用途。

背景技术：

1、卡络磺钠(carbazochrome sodium sulfonate)是卡巴克络的衍生物，其化学名称为1-甲基-6-氧代-2,3,5,6-四氢吲哚-5-缩氨脲-2-磺酸钠，分子式为c10h17n4nao8s。因卡络磺钠在卡巴克络结构的基础上引入了磺酸钠基团，克服了卡巴克络的溶解度小、必须由水杨酸助溶的缺点，从而产生了明显的止血效果。卡络磺钠最早由日本田边制药株式会社研制成功，临床上主要用于泌尿系统、上消化道、呼吸道和妇产科疾病出血，亦可用于外伤和手术出血，新近研究表明腔镜术、肾活检及某些感染性疾病也为卡络磺钠提供广阔的应用空间。卡络磺钠具有水溶性大、给药途径多、止血作用快、不良反应少、适用范围广等优点，值得临床进一步推广。其结构式为：

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3、发明人在进行卡络磺钠注射液稳定性研究时发现了降解杂质a的存在(式i所示化合物)，该杂质的含量(0.37％)超过了ich规定的质控限度(0.2％)，并且随着储存时间的增加，该杂质在注射液中的含量也会不断增加，当储存时间为30天时，该降解杂质含量达到了0.97％。因杂质a超过了ich规定的质控限度，会对卡络磺钠注射液的安全性和有效性产生重要影响，因此，为更好地对卡络磺钠进行质量研究，需制备出降解杂质a作为对照品，用于卡络磺钠注射液生产中杂质的定性及定量分析，从而提高卡络磺钠注射液的质量标准，为安全用药提供指导。

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技术实现思路

1、本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的目的在于提供一种卡络磺钠降解杂质a及其制备方法、检测方法和用途。相较于现有技术，本发明首次发现在特定条件下卡络磺钠与亚硫酸氢钠作用会降解产生杂质a，同时采用本发明制备方法得到的目标产物纯度高，除此之外，采用本发明检测方法检测目标物纯度的准确度高。

2、本发明提供了一种式i所示化合物或其盐的制备方法，包括如下步骤：将卡络磺钠和亚硫酸氢钠置于水中，调节ph至5.5～6.5，于60～100℃反应2～4天，其中，卡络磺钠：亚硫酸氢钠的质量比为(1～3)：(0.3～0.5)，卡络磺钠：水的质量体积比为(1～3)：(90～110)，g/ml；

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4、在本发明的一些具体实施方式中，式i所示化合物的盐为钠盐。

5、进一步地，卡络磺钠：亚硫酸氢钠的质量比为2：0.4。

6、进一步地，卡络磺钠：水的质量体积比为2：100，g/ml。

7、在上述优选的卡络磺钠、亚硫酸氢钠和水的用量条件下，能够提高杂质a的降解效率，提高反应收率。

8、进一步地，调节ph至6.0。

9、进一步地，用磷酸氢二钠调节ph。

10、进一步地，于80℃进行反应。

11、进一步地，反应时间为3天。经发明人实验考察，当其余反应条件均不变，将反应时间缩短至1天时，主要生成另一种卡络磺钠降解杂质b。本发明通过优化反应时间，提高了降解得到杂质a的效率。

12、进一步地，还包括采用制备液相色谱进行纯化的步骤，富集式i所示的化合物或其盐，所述制备液相色谱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为酸性水溶液-乙腈混合体系。

13、进一步地，固定相为ymc-triart-c18。采用此种类型的固定相用于分离纯化，对于式i化合物有较好的分离效果。

14、优选地，ymc-triart-c18的粒径为3～20μm。

15、进一步优选地，ymc-triart-c18的粒径为10μm。

16、优选地，ymc-triart-c18的孔径为12～20nm。

17、进一步优选地，ymc-triart-c18的孔径为12nm。

18、进一步地，采用sac或dac制备色谱柱。

19、优选地，采用sac制备色谱柱。

20、优选地，sac制备色谱柱的内径为80mm。

21、优选地，sac制备色谱柱的长度为225～275mm。

22、进一步优选地，sac制备色谱柱的长度为250mm。

23、进一步地，以卡络磺钠投料量计，上样量：制备色谱柱填料量的质量比为(0.45～0.55)：(730～830)。上样量和填料量的质量比例范围在此范围内能获得较高纯度的目标物。

24、优选地，以卡络磺钠投料量计，上样量：制备色谱柱填料量的质量比为0.5：780。

25、进一步地，流动相为三氟乙酸水溶液-乙腈混合体系。

26、优选地，水溶液中三氟乙酸的浓度为0.09～0.11％v/v。

27、进一步优选地，水溶液中三氟乙酸的浓度为0.1％v/v。

28、进一步地，流动相的洗脱程序为0～5min，1％乙腈；5～16min，1％→5％乙腈，v/v。

29、进一步地，运行流速为120ml/min。

30、进一步地，收集5.57～6.14min之间的馏分。

31、进一步地，检测波长为210～230nm和/或320～370nm。

32、优选地，检测波长为215nm。在此波长下检测，可较大程度上减少目标物的损失，提高目标物收率。

33、进一步地，以卡络磺钠投料量计，上样浓度为18～22mg/ml。上样浓度在上述范围内，目标物出峰时间更集中，更有利于合格馏分的收集，能够提高杂质a的收率。

34、优选地，以卡络磺钠投料量计，上样浓度为20mg/ml。

35、优选地，将未经稀释的反应液通过注射器上样。本发明优选采用注射器上样的方式，相较于现有技术常用的常规上样方式，由于注射器上样浓度较高，目标物出峰时间更集中，所以更有利于合格馏分的收集，有助于提高杂质a的收率。

36、进一步地，还包括将所述制备液相色谱收集的馏分进行冻干的步骤。

37、进一步地，冻干过程的冷阱温度≤-60℃，真空度为≤30pa。

38、优选地，冷阱温度为-75～82℃，真空度为20～10pa。

39、本发明采用冻干工艺除去馏分中的溶剂，相较于现有技术，不会引入其它保护剂，得到的产物纯度更高。

40、本发明还提供了一种式i所示化合物或其盐的纯度的检测方法，采用液相色谱法，在210～230nm和320～370nm双波长下进行检测。

41、优选地，在220nm和360nm双波长下进行检测。

42、经发明人实验考察，卡络磺钠降解杂质a在346nm处有最大吸收，但发现在360nm左右其它部分卡络磺钠降解杂质无吸收，导致对杂质a的纯度分析结果不准确。基于此，本发明采用220nm和360nm双波长检测，保证了主要的卡络磺钠降解杂质均能被准确检测，提高了测定纯度的准确性。在220nm下可判断杂质a中是否有其余杂质的残留，在360nm下可对杂质a进行定量分析。

43、进一步地，液相色谱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶。

44、优选地，固定相为ace excel 5super c18、shim-pack gist 5μm c18-aq或其等效色谱柱。

45、进一步优选地，固定相为ace excel 5super c18色谱柱。

46、优选地，ace excel 5super c18的填料粒径为2～10μm。

47、进一步优选地，ace excel 5super c18的填料粒径为5μm。

48、优选地，ace excel 5super c18的内径为2.1～4.6mm。

49、进一步优选地，ace excel 5super c18的内径为4.6mm。

50、优选地，ace excel 5super c18的长度为50～250mm。

51、进一步优选地，ace excel 5super c18的长度为250mm。

52、进一步地，流动相由流动相a、流动相b进行梯度洗脱，流动相a为水相-乙腈＝(94～99):(1～6)，v/v，流动相b为100％乙腈，其中水相中添加了浓度为0.008～0.012mol/l的磷酸二氢铵。

53、优选地，所述水相中磷酸二氢铵的浓度为0.01mol/l。

54、优选地，流动相a为水相-乙腈(94:6，v/v)。

55、优选地，所述水相用磷酸调节ph至2.8～3.2。

56、进一步优选地，所述水相用磷酸调节ph至3.0。

57、优选地，梯度洗脱程序：0～10min，0％乙腈；10～20min，0％→15％乙腈；20～30min，15％→50％乙腈；30～35min，50％乙腈；35～36min，50％→0％乙腈；36～42min，0％乙腈，v/v。

58、本发明在现有检测技术上通过调整流动相梯度，使得检测得到的谱图基线更平缓，无过多毛刺，确保在对杂质a进行定量分析时，准确度更高。

59、进一步地，流速为0.9～1.1ml/min。

60、优选地，流速为1.0ml/min。

61、进一步地，进样量为8～12μl。

62、优选地，进样量为10μl。

63、进一步地，柱温为38～42℃。

64、优选地，柱温为40℃。

65、本发明还提供了一种式i所示的化合物或其盐，其纯度在95％以上。

66、优选地，其纯度在99.5％以上。

67、进一步优选地，其纯度在99.9％以上。

68、本发明最后提供了式i所示的化合物或其盐在制备对照品或标准品中的用途。

69、其中，所述对照品包括但不限于杂质对照品、主成分对照品。

70、根据本发明的一些具体实施方式，采用面积归一法测定所述杂质的含量。

71、根据本发明的一些具体实施方式，对所述卡络磺钠降解杂质a进行lcms、nmr分析测试从而确认杂质a的结构。

72、本发明提供了一种卡络磺钠降解杂质a及其制备方法、检测方法和用途，至少具有以下有益技术效果：

73、1、本发明首次发现在特定条件下卡络磺钠与亚硫酸氢钠作用会降解产生杂质a，为获取杂质a提供了一条高效的制备途径。

74、2、本发明制备得到了纯度为100％的卡络磺钠降解杂质a，完全满足作为对照品或标准品使用时的纯度要求，能够应用于卡络磺钠原料药或其制剂产品的质量控制。

75、3、大多数卡络磺钠的降解杂质具有不稳定、易降解的特性，现有技术多采用减压蒸干的方式进行纯化产物的浓缩，在减压蒸干时往往需要加入稳定剂保护杂质不被降解，而这些稳定剂通常为不可挥发性盐，很难除去，会残留在最终产物中，影响产物的纯度。本发明采用冻干工艺除去溶剂，相较于现有技术，不会引入其它保护剂，得到的产物纯度更高。

76、4、本发明采用双波长法检测杂质a的纯度，相较于单波长检测，能够避免部分残留杂质在单波长条件下不易检出的问题，确保了最终检测的纯度的准确性。

77、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。