细胞培养装置及活细胞浓度调整方法与流程

本发明涉及一种细胞培养装置及活细胞浓度调整方法。

背景技术：

1、在细胞培养技术中，关于使用于播种的细胞悬浮液，需要适当调节目标细胞的活细胞浓度。例如在国际公开第2016/013394号中公开了有关这种活细胞浓度调整的技术。

技术实现思路

1、发明要解决的技术课题

2、以往研究了以国际公开第2016/013394号等为起点的有关活细胞浓度的调整的技术，但目前的情况并不充分。

3、本发明是鉴于这种情况而完成的，本发明的一实施方式要解决的课题在于提供一种能够迅速地调整目标细胞的活细胞浓度的细胞培养装置。

4、本发明的另一实施方式要解决的课题在于提供一种能够迅速地调整目标细胞的活细胞浓度的活细胞浓度调整方法。

5、用于解决技术课题的手段

6、本发明包括以下方式。

7、＜1＞一种细胞培养装置，其具有：

8、第1容器，保持细胞悬浮液；

9、第2容器，保持稀释细胞悬浮液的稀释液；

10、活细胞浓度测定装置，通过对细胞悬浮液中的多个目标细胞分别进行生死判定来测定细胞悬浮液中的目标细胞的活细胞浓度；

11、控制装置，保持并控制活细胞浓度及细胞悬浮液的液量数据；

12、混合部，混合细胞悬浮液和稀释液；及

13、培养容器，播种稀释的细胞悬浮液并进行细胞培养，

14、控制装置根据活细胞浓度和细胞悬浮液的液量数据，确定所播种的细胞悬浮液的液量及将所播种的细胞悬浮液调整为预定的活细胞浓度所需的稀释液的液量，将上述液量的细胞悬浮液和上述液量的稀释液送液至混合部，播种稀释的细胞悬浮液。

15、＜2＞根据＜1＞所述的细胞培养装置，其中，活细胞浓度测定装置配置于从第1容器与混合部之间的流路分岔的流路或第1容器与混合部之间的流路。

16、＜3＞根据＜2＞所述的细胞培养装置，其中，在细胞悬浮液从第1容器到达混合部为止的送液时间的至少一部分时间内进行活细胞浓度的测定。

17、＜4＞根据＜1＞至＜3＞中任一项所述的细胞培养装置，其中，混合部兼作培养容器。

18、＜5＞根据＜1＞至＜4＞中任一项所述的细胞培养装置，其中，混合部兼作悬浮培养装置即培养容器。

19、＜6＞根据＜1＞至＜3＞中任一项所述的细胞培养装置，其中，混合部兼作第2容器。

20、＜7＞根据＜1＞至＜6＞中任一项所述的细胞培养装置，其中，培养容器为多层培养容器。

21、＜8＞根据＜1＞至＜7＞中任一项所述的细胞培养装置，其中，活细胞浓度测定装置具备：

22、光源，对目标细胞照射光；

23、摄像装置，拍摄目标细胞；

24、部件，使焦平面变化；

25、图像获取部，获取从被光照射的目标细胞的与被光照射的一侧相反的方向且在包含目标细胞的对焦面的多个焦平面拍摄的目标细胞的图像；

26、图像片段获取部，从各图像中获取包含目标细胞的中心部及外周部的图像片段；

27、分析用连结图像制作部，以焦平面的拍摄方向的顺序连结图像片段来制作分析用连结图像；

28、特征量提取部，从分析用连结图像中提取特征量；及

29、生死判定部，根据分析用连结图像的特征量和预定的特征量的范围，进行细胞悬浮液中的多个目标细胞的生死判定；以及

30、活细胞浓度确定部，根据生死判定结果来确定细胞悬浮液中的目标细胞的活细胞浓度。

31、＜9＞根据＜8＞所述的细胞培养装置，其中，使焦平面变化的部件是通过使载置保持目标细胞的保持容器的载物台移动以使目标细胞与摄像装置之间的距离变化的载物台移动机构。

32、＜10＞根据＜8＞所述的细胞培养装置，其中，使焦平面变化的部件是通过使摄像装置移动以使目标细胞与摄像装置之间的距离变化的摄像装置移动机构。

33、＜11＞根据＜8＞所述的细胞培养装置，其中，摄像装置具备液体透镜作为使焦平面变化的部件。

34、＜12＞根据＜1＞至＜7＞中任一项所述的细胞培养装置，其中，活细胞浓度测定装置具备：

35、数字全息显微镜，拍摄目标细胞；

36、相位图像获取部，获取目标细胞的相位图像；

37、生死判定部，根据上述相位图像的相位量分布和预定的相位量分布，进行细胞悬浮液中的多个目标细胞的生死判定；及

38、活细胞浓度确定部，根据生死判定结果来确定细胞悬浮液中的目标细胞的活细胞浓度。

39、＜13＞根据＜1＞至＜12＞中任一项所述的细胞培养装置，其中，活细胞浓度测定装置具备：细胞生存率确定部，根据生死判定结果来确定细胞悬浮液中的目标细胞的细胞生存率。

40、＜14＞一种活细胞浓度调整方法，其包括：

41、获取从被光照射的目标细胞的与被光照射的一侧相反的方向且在包含目标细胞的对焦面的多个焦平面拍摄的目标细胞的图像的工序；

42、通过对细胞悬浮液中的多个目标细胞分别进行生死判定来测定细胞悬浮液中的目标细胞的活细胞浓度的工序；

43、根据活细胞浓度和细胞悬浮液的液量数据来确定所播种的细胞悬浮液的液量及将所播种的细胞悬浮液调整为预定的活细胞浓度所需的稀释液的液量的工序；及

44、将上述液量的细胞悬浮液和上述液量的稀释液进行混合的工序。

45、＜15＞根据＜14＞所述的活细胞浓度调整方法，其中，测定活细胞浓度的工序包括：

46、获取从被光照射的目标细胞的与被光照射的一侧相反的方向且在包含目标细胞的对焦面的多个焦平面拍摄的目标细胞的图像的工序；

47、从各图像中获取包含目标细胞的中心部及外周部的图像片段的工序；

48、以焦平面的拍摄方向的顺序连结图像片段来制作分析用连结图像的工序；

49、从分析用连结图像中提取特征量的工序；

50、根据分析用连结图像的特征量和预定的特征量的范围，进行细胞悬浮液中的多个目标细胞的生死判定的工序；及

51、根据生死判定结果来确定细胞悬浮液中的目标细胞的活细胞浓度的工序。

52、＜16＞根据＜14＞所述的活细胞浓度调整方法，其中，测定活细胞浓度的工序包括：

53、用数字全息显微镜拍摄目标细胞并获取目标细胞的相位图像的工序；

54、根据相位图像的相位量分布和预定的相位量分布，进行细胞悬浮液中的多个目标细胞的生死判定的工序；及

55、根据生死判定结果来确定细胞悬浮液中的目标细胞的活细胞浓度的工序。

56、＜17＞根据＜14＞至＜16＞中任一项所述的活细胞浓度调整方法，其包括根据生死判定结果来确定细胞悬浮液中的目标细胞的细胞生存率的工序。

57、＜18＞根据＜1＞至＜13＞中任一项所述的细胞培养装置，其中，目标细胞为源自人滑膜的间充质干细胞。

58、＜19＞一种关节病治疗剂的制造方法，其使用了如＜14＞至＜17＞中任一项所述的活细胞浓度调整方法，其中，目标细胞为源自人滑膜的间充质干细胞。

59、＜20＞一种关节病治疗剂，其通过＜19＞所述的关节病治疗剂的制造方法来制造。

60、发明效果

61、根据本发明的一实施方式，提供一种能够迅速地调整目标细胞的活细胞浓度的细胞培养装置。

62、根据本发明的另一实施方式，提供一种能够迅速地调整目标细胞的活细胞浓度的活细胞浓度调整方法。