生物工程真皮乳头和毛囊以及相关产品、方法和应用

文档序号:37168102发布日期:2024-03-01 12:11阅读:来源:国知局

技术特征:

1.产生生物工程毛囊的方法,所述方法包括:

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述间充质细胞和细胞外基质的悬浮物的液滴具有范围为0.5至10.0μl、1.0至5.0μl,或优选2.0至3.0μl的体积。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述间充质细胞和细胞外基质的悬浮物包含密度为1x 104至1x 107个细胞/ml的间充质细胞,以及浓度为0.01mg/ml至3.0mg/ml或0.01mg/ml至2.0mg/ml,优选0.05mg/ml至0.5mg/ml的细胞外基质。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中所述间充质细胞是人真皮乳头细胞(dpc)、人间充质干细胞、人成纤维细胞或其组合。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中所述细胞外基质包含胶原、纤连蛋白、纤维蛋白原、层粘连蛋白、糖胺聚糖、玻连蛋白或其组合。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中所述细胞外基质包含胶原或基本上由胶原组成。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中所述培养容器包含384孔培养板、定制88孔微孔或基于pdms的微孔。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其中所述补充因子包含fgf、hgf、wnt、bmp、pdgf或其组合。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法,其中将所述间充质细胞-基质微球在25℃至39℃,优选37℃下,在具有3.5%至6%co2的湿润气氛中,在补充因子存在下,在所述容器中培养1至100小时,优选12小时至30小时。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法,其中所述上皮细胞的悬浮物的液滴具有范围为0.5至10.0μl、1.0至5.0μl,或优选2.0至3.0μl的体积,并且优选地所述悬浮物含有密度为1x 104至1x 107个细胞/ml,或优选1x 105至1x 106个细胞/ml的上皮细胞。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法,其中将所述间充质微球-上皮细胞混合物在35℃至39℃下,在具有3.5%至6%co2的湿润气氛中,培养1小时至100小时、5小时至50小时,或优选18小时至30小时。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法,其中所述上皮细胞是人表皮角质形成细胞、人毛囊角质形成细胞、人表皮祖细胞或干细胞、人ipsc衍生的上皮细胞或其组合。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法,其中间充质细胞与上皮细胞的比率为0.1:1至10:1,优选1:1。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法,其中将间充质细胞和细胞外基质的所述液滴孵育过夜,其中将所述间充质细胞-基质微球培养过夜,并且其中将所述间充质细胞微球-上皮细胞混合物培养过夜。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法,其中将所述间充质细胞微球-上皮细胞混合物在表皮化培养基中培养8天。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法,其中间充质细胞和基质的所述液滴含有约500至约10000个细胞、约1000至约5000个细胞或约1000至约3000个细胞,或优选约1250个间充质细胞。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法,其中所述间充质细胞微球-上皮细胞混合物含有至少一个或一个间充质细胞-基质微球,以及约500至约10000、约1000至约5000或约1000至约3000,或优选约1250个上皮细胞。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法,其中所述间充质细胞-基质微球具有指示其毛发诱导性的一个或多个特征,优选地,指示所述间充质细胞-基质微球的毛发诱导性的所述一个或多个特征包括碱性磷酸酶的表达、多能蛋白聚糖的表达、纤连蛋白的表达、wnt信号传导途径的激活、bmp信号传导途径的激活或其组合。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法,其中所述生物工程毛囊具有指示毛发诱导性的一个或多个特征,优选地,指示所述生物工程毛囊的毛发诱导性的所述一个或多个特征包括碱性磷酸酶的表达、纤连蛋白的表达或其组合。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法,其中所述生物工程毛囊具有指示上皮细胞增殖的一个或多个特征,优选地,指示上皮细胞增殖的所述一个或多个特征包括细胞角蛋白的表达、整合素α6的表达或其组合。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法,其中所述生物工程毛囊具有指示毛发分化的一个或多个特征,优选地,指示毛发分化的所述一个或多个特征包括角蛋白75的表达。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法,其中所述生物工程毛囊中的细胞具有细胞-细胞接触以及细胞-细胞外基质接触两者。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法,其中所述间充质细胞-基质微球包含形态上类似于天然真皮乳头结构的球形结构。

24.根据权利要求23所述的方法,其中所述球形结构具有50至2000μm范围内的直径。

25.根据权利要求1至22中任一项所述的方法,其中所述生物工程毛囊包含形态上类似于天然毛囊的管状结构。

26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法,其中将所述间充质细胞-基质微球在不存在任何其他间充质细胞-基质微球的情况下在同一容器中,或者在多孔板的单个孔中培养。

27.通过根据权利要求1至26中任一项所述的方法产生的生物工程毛囊。

28.使用根据权利要求27所述的生物工程毛囊的方法,所述方法包括:

29.根据权利要求28所述的方法,其中所述测量的特征是毛囊生长,其中所述测量的毛囊生长的差异指示所述测试化合物影响毛囊生长。

30.使用根据权利要求27所述的生物工程毛囊来预防性或治疗性治疗毛发减少状态的方法。

31.使用根据权利要求27所述的生物工程毛囊来治疗秃发的方法。


技术总结
公开了组合物和方法,该组合物和方法涉及由间充质细胞(如真皮乳头细胞(DPC))和细胞外基质、上皮细胞如含角质形成细胞构成的微球。已发现,通过平衡DPC‑基质混合物中DPC和细胞外基质的比例,并且通过孵育特定范围的小体积的DPC‑基质混合物,可以形成具有有用特性的DPC‑基质微球。最显著地,所得的DPC基质微球特别适合用于产生具有天然毛囊特征的生物工程毛囊。

技术研发人员:陈佩,欧宛靖
受保护的技术使用者:香港大学
技术研发日:
技术公布日:2024/2/29
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