抗EGFRviii抗体、多肽、表达前述多肽的细胞、包含前述细胞的医药组合物、前述细胞的制造方法、及包含编码前述多肽的碱基序列的多核苷酸或载体与流程

本公开文本涉及抗egfrviii抗体、多肽、表达前述多肽的细胞、包含前述细胞的医药组合物、前述细胞的制造方法、及包含编码前述多肽的碱基序列的多核苷酸或载体。

背景技术：

1、嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor：以下，也称为“car”。)是使识别癌细胞的细胞表面抗原的靶抗原结合区、与诱导t细胞的活化的信号传导区融合而成的人工嵌合蛋白质。

2、例如，通过向外周血t细胞(外周血t淋巴球)导入编码car的基因，从而能够大量地制作car表达t细胞(以下，也称为“car-t细胞”。)。该car-t细胞具有肿瘤反应性，能够在不依赖与主要组织相容性基因复合体(mhc)的相互作用的情况下导入对癌细胞的伤害。

3、对于通过car-t细胞的施予进行的癌症免疫疗法，更具体而言是从患者采集t细胞，向该t细胞导入编码car的基因并进行扩增，再次移入患者的疗法而言，正在当今全世界进行临床试验，获得了在白血病、淋巴瘤等造血器官恶性肿瘤等中显示出有效性的结果。

4、在基于car-t细胞的癌症免疫疗法中，需要寻找在目标肿瘤中特异性表达的靶抗原。此外，需要与该靶抗原特异性结合、能够作为car的靶抗原结合区使用的抗体。对于作为靶抗原结合区使用的抗体而言，在作为car的一部分表达时表达率需要充分高，表达car的细胞需要显示出高的抗肿瘤效果。与抗原的亲和性高的抗体未必可用于car，能够作为靶抗原结合区使用的抗体的探索并不容易。

5、另一方面，认为car-t细胞疗法难以对实体肿瘤获得效果。作为其主要原因，认为有如下原因等：car-t细胞在生物体内的存活率低；向肿瘤局部的聚集低；肿瘤细胞所分泌的免疫抑制因子等对活性产生抑制。

6、作为解决这样的问题的方法，报道了将编码car的核酸、以及编码t细胞的免疫功能促进因子的核酸一同导入t细胞的方法。例如，日本专利第6761113号公报公开了以实体肿瘤抗原作为靶抗原的car、及对实体肿瘤有效的car-t细胞。

技术实现思路

1、发明所要解决的课题

2、日本专利第6761113号公报公开了对作为靶抗原的神经节苷脂gm2显示有效性的car-t细胞，但要求开发以实体肿瘤抗原中的神经节苷脂gm2以外的抗原作为靶抗原的car、以及对实体肿瘤进一步有效的car-t细胞及能够用于其的肽。

3、本公开文本涉及的一实施方式所要解决的课题在于提供与egfrviii特异性地结合、且也能够作为嵌合抗原受体的靶抗原结合区使用的新型抗体。

4、本公开文本涉及的另一实施方式所要解决的课题在于提供包含上述新型抗体的多肽、表达该多肽的细胞、包含编码该多肽的碱基序列的多核苷酸或载体、以及包含该细胞的医药组合物。

5、用于解决课题的手段

6、本公开文本的一实施方式包含以下的方式。

7、<1>抗egfrviii抗体，其为选自由下述(a-1)～(a-3)组成的组中的抗体或其抗原结合片段：

8、(a-1)包含含有由序列号1或4所记载的氨基酸序列构成的重链可变区的cdr1、cdr2及cdr3的重链可变区、和

9、含有由序列号2、3、5或6所记载的氨基酸序列构成的轻链可变区的cdr1、cdr2及cdr3的轻链可变区、并且

10、具有与egfrviii的结合能力的抗体或其抗原结合片段；

11、(a-2)包含由序列号1或4所记载的氨基酸序列中1个或多个氨基酸突变而得的氨基酸序列构成的重链可变区、和

12、由序列号2、3、5或6所记载的氨基酸序列中1个或多个氨基酸突变而得的氨基酸序列构成的轻链可变区、并且

13、具有与egfrviii的结合能力的抗体或其抗原结合片段；及

14、(a-3)包含由与序列号1或4所记载的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列构成的重链可变区、和

15、由与序列号2、3、5或6所记载的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列构成的轻链可变区、并且

16、具有与egfrviii的结合能力的抗体或其抗原结合片段。

17、<2>如<1>所述的抗egfrviii抗体，其中，前述重链可变区在序列号1或4所记载的氨基酸序列中在21位具有t，在24位具有f，在54位具有f，在59位具有k，在67位具有s，在73位具有k，在77位具有t或k，及在83位具有k或t。

18、<3>如<1>或<2>所述的抗egfrviii抗体，其中，前述轻链可变区在序列号2、3、5或6所记载的氨基酸序列中在4位具有m，在16位具有e或g，在27位具有q，在35位具有k，在55位具有s，在58位具有n，在74位具有r，在79位具有k，在81位具有s，在87位具有d，在99位具有v。

19、<4>如<1>～<3>中任一项所述的抗egfrviii抗体，其中，

20、前述重链可变区含有序列号1所记载的氨基酸序列，并且前述轻链可变区含有序列号2所记载的氨基酸序列；

21、前述重链可变区含有序列号1所记载的氨基酸序列，并且前述轻链可变区含有序列号3所记载的氨基酸序列；

22、或者，

23、前述重链可变区含有序列号4所记载的氨基酸序列，并且前述轻链可变区含有序列号5或序列号6所记载的氨基酸序列。

24、<5>如<1>～<4>中任一项所述的抗egfrviii抗体，其中，前述抗体为单链抗体。

25、<6>如<5>所述的抗egfrviii抗体，其中，前述单链抗体从n末端起依次包含前述轻链可变区、将前述重链可变区与前述轻链可变区连结的肽接头、和前述重链可变区。

26、<7>如<5>所述的抗egfrviii抗体，其中，前述单链抗体为选自由下述(i)～(iii)组成的组中的多肽：

27、(i)包含选自由序列号12～18及38组成的组中的氨基酸序列的多肽；

28、(ii)由与选自由序列号12～18及38组成的组中的氨基酸序列具有70％以上的序列同一性的氨基酸序列构成、并且具有与egfrviii的结合能力的多肽；以及，

29、(iii)由选自由序列号12～18及38组成的组中的氨基酸序列中1个或多个氨基酸突变而得的氨基酸序列构成、并且具有与egfrviii的结合能力的多肽。

30、<8>多肽，其包含靶抗原结合区、跨膜区、和信号传导区，

31、前述靶抗原结合区包含<1>～<7>中任一项所述的抗egfrviii抗体。

32、<9>如<8>所述的多肽，其为嵌合抗原受体。

33、<10>细胞，其表达<8>或<9>所述的多肽。

34、<11>如<10>所述的细胞，其还表达il-7及ccl19中的至少一者，优选还表达外源il-7及外源ccl19中的至少一者。

35、<12>如<10>或<11>所述的细胞，其中，前述细胞为免疫细胞。

36、<13>如<12>所述的细胞，其中，前述免疫细胞为t细胞。

37、<14>多核苷酸，其包含编码<8>或<9>所述的多肽的碱基序列。

38、<15>如<14>所述的多核苷酸，其还包含编码il-7的碱基序列及编码ccl19的碱基序列中的至少一者，优选以外源核酸的形式还包含编码il-7的碱基序列及编码ccl19的碱基序列中的至少一者。

39、<16>载体，其包含<14>或<15>所述的多核苷酸。

40、<17>如<16>所述的载体，其还包含编码il-7的碱基序列及编码ccl19的碱基序列中的至少一者。

41、<18>表达多肽的细胞的制造方法，其包括将<14>或<15>所述的多核苷酸导入细胞中。

42、<19>表达多肽的细胞的制造方法，其包括将<16>或<17>所述的载体导入细胞中。

43、<20>医药组合物，其包含<10>～<13>中任一项所述的细胞。

44、<21>如<20>所述的医药组合物，其为用于治疗或预防肿瘤的医药组合物。

45、发明的效果

46、根据本公开文本的一实施方式，能够提供与egfrviii特异性地结合、且也能够作为嵌合抗原受体的靶抗原结合区使用的新型抗体。

47、根据本公开文本的另一实施方式，能够提供包含上述新型抗体的多肽、表达该多肽的细胞、包含编码该多肽的碱基序列的多核苷酸或载体、及包含该细胞的医药品组合物。