免疫缀合物和方法与流程

本技术涉及包含用于将抗体靶向配体连接至细胞杀伤部分(诸如药物)的连接基团的缀合物、制备此类缀合物的方法以及使用此类缀合物将细胞杀伤部分递送至所选择的细胞或组织，例如用于治疗或抑制癌症的方法。描述许多抗体-药物缀合物(adc)已经被开发用于医学用途。参见，例如，nejadmoghaddam,m.等人，“antibody-drug conjugates:possibilities andchallenges”,avicenna j med biotech 11(1),3-23(2019)。adc中的抗体起到靶向剂的作用以将药物递送至所选择的细胞或组织，诸如癌细胞或肿瘤。在美国，美国食品药品监督管理局(fda)已经批准了几种adc制剂，包括奥加伊妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)(商品名besponsa)、吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin)(商品名mylotarg)、维布妥昔单抗(brentuximab vedotin)(商品名adcetris)和恩美曲妥珠单抗(ado-trastuzumabemtansine)(商品名kadcyla)。美国专利10,155,821公开了adc，其中抗肿瘤化合物经由接头与抗her2抗体缀合。还参见美国专利公布2020/0385486和2019/0077880。德曲妥珠单抗(trastuzumabderuxtecan)是adc的一个示例，其中抗her2抗体(曲妥珠单抗(trastuzumab))经由可裂解的马来酰亚胺四肽接头附接到抗肿瘤化合物(德鲁替康(deruxtecan))。fda已经批准了称为德喜曲妥珠单抗(fam-trastuzumab deruxtecan-nxki)(商品名enhertu)的制剂用于治疗患有不可切除或转移性her2阳性乳腺癌的成年患者，该成年患者在转移性环境中已经接受了两种或更多种先前的基于抗her2的方案。图1示出了认为接头将抗体(mab)连接到药物部分的方式。fda的批准代表正在进行的治疗性adc开发的里程碑。然而，仍然需要改进的adc以帮助解决长期以来对治疗癌症和/或将治疗有效载荷递送至所选择的细胞或组织的附加选择的需求。

背景技术：

技术实现思路

1、一些实施方案提供式(i)的免疫缀合物，该免疫缀合物包含抗体或抗原结合片段(ab)和药物部分(d)以及将ab连接至d的接头。在一个实施方案中，式(i)的免疫缀合物包含式(ii)的药物部分。

2、一个实施方案提供具有式(i)的免疫缀合物，

3、ab-[s-l1-l2-l3-l4-l5-l6-l7-d]n

4、(i)

5、其中：

6、ab为抗体或抗原结合片段；

7、l1为

8、l2为不存在、或

9、z1和z2各自独立地为氢、卤素、no2、-o-(c1-c6烷基)或c1-c6烷基；

10、l3为-(ch2)n1-c(＝o)-或-(ch2ch2o)n1-(ch2)n1c(＝o)-；

11、n1独立地为0至12的整数；

12、l4为四肽残基；

13、l5为不存在或-[nh(ch2)n2]n3-；

14、n2为0至6的整数；

15、n3为0至2的整数；

16、l6为不存在或

17、

18、l7为不存在、

19、d为药物部分；并且

20、n为1至10的整数。

21、在一个实施方案中，式(i)中的d为具有以下结构的式(ii)的药物部分：

22、

23、其中：

24、r1和r2各自独立地选自由氢、卤素、-cn、-or5、-nr5r6、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c1-c6卤代烷基、取代或未取代的-o-(c1-c6烷基)、取代或未取代的-o-(c1-c6卤代烷基)、-[(cy2)po(cy2)q]tcy3或者取代或未取代的-o-(cr5r6)m-o-组成的组，使得r1和r2合在一起形成环；

25、r3为氢或者取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c1-c6卤代烷基或-[(cy2)po(cy2)q]tcy3；

26、r4为氢、取代或未取代的-(c1-c6烷基)-x2、取代或未取代的-(c1-c6卤代烷基)-x2、取代或未取代的-(c1-c6烯基)-x2、取代或未取代的-(c1-c6卤代烯基)-x2、取代或未取代的-(c1-c6炔基)-x2或者取代或未取代的-(c1-c6卤代炔基)-x2；

27、x1为-o-、-s(on6)-、-nh-、-o-(c＝o)-、-nh-(c＝o)-、-nh-(c＝o)-o-、-nh-(c＝o)-nh-或-nh-s(on6)-；

28、x2为-or9、-sr9或-nhr9；

29、r5和r6各自独立地为氢、卤素、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c1-c6卤代烷基或-[(cy2)po(cy2)q]tcy3；

30、m为1或2；

31、n4和n5各自独立地为0、1或2，条件是n4和n5均不为0；

32、n6为0、1或2；

33、每个y独立地为h或卤素；

34、每个p独立地为1、2、3、4、5或6；

35、每个q独立地为0、1、2、3、4、5或6；

36、每个t独立地为1、2、3、4、5或6；

37、r7为h、-cor8、-co2r8、-(co)-nhr8、l4、l5、l6或l7；

38、r8为取代或未取代的c1-c6烷基-x3、取代或未取代的c1-c6卤代烷基-x3、或-[(cy2)po(cy2)q]tcy2-x3；

39、r9为h、-cor8、-co2r8、-(co)-nhr8、l4、l5、l6或l7，条件是恰好r7和r9中的一者为l4、l5、l6或l7；并且

40、每个x3独立地为-h、-oh、-sh或-nh2。

41、一个实施方案提供式(iv)的化合物或其药学上可接受的盐，其具有以下结构：

42、

43、其中：

44、r1和r2各自独立地选自由氢、卤素、-cn、-or5、-nr5r6、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c1-c6卤代烷基、取代或未取代的-o-(c1-c6烷基)、取代或未取代的-o-(c1-c6卤代烷基)、-[(cy2)po(cy2)q]tcy3、或者取代或未取代的-o-(cr5r6)m-o-组成的组，使得r1和r2合在一起形成环；

45、r3为氢或者取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c1-c6卤代烷基、或-[(cy2)po(cy2)q]tcy3；

46、r4为氢、取代或未取代的-(c1-c6烷基)-x2、取代或未取代的-(c1-c6卤代烷基)-x2、取代或未取代的-(c1-c6烯基)-x2、取代或未取代的-(c1-c6卤代烯基)-x2、取代或未取代的-(c1-c6炔基)-x2、或者取代或未取代的-(c1-c6卤代炔基)-x2；

47、x1为-o-、-s(on6)-、-nh-、-o-(c＝o)-、-nh-(c＝o)-、-nh-(c＝o)-o-、-nh-(c＝o)-nh-或-nh-s(on6)-；

48、x2为-oh、-sh或-nr5r6；

49、r5和r6各自独立地为氢、卤素、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c1-c6卤代烷基、或-[(cy2)po(cy2)q]tcy3；

50、r7为h、-cor8、-co2r8或-(co)-nhr8；

51、r8为取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c1-c6卤代烷基、或-[(cy2)po(cy2)q]tcy3；

52、m为1或2；

53、n4和n5各自独立地为0、1或2，条件是n4和n5均不为0；

54、n6为0、1或2；并且

55、每个y独立地为h或卤素；

56、每个p独立地为1、2、3、4、5或6；

57、每个q独立地为0、1、2、3、4、5或6；并且

58、每个t独立地为1、2、3、4、5或6；

59、条件是式(iv)不代表德鲁替康或依沙替康(exatecan)。

60、一个实施方案提供一种药物组合物，该药物组合物包含如本文所述的免疫缀合物、如本文所述的药物化合物或其药学上有活性的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合。

61、一个实施方案提供一种用于治疗癌症或肿瘤的方法，该方法包括向患有癌症或肿瘤的受试者施用有效量的如本文所述的免疫缀合物、如本文所述的药物化合物或其药学上有活性的盐或如本文所述的药物组合物。

62、一个实施方案提供有效量的如本文所述的免疫缀合物、如本文所述的药物化合物或其药学上有活性的盐或如本文所述的药物组合物在制造用于治疗癌症或肿瘤的药剂中的用途。

63、一些实施方案提供式(iii)的缀合物，该缀合物包含官能团m1、药物部分(d)和将mi连接至d的接头。在一个实施方案中，式(iii)的缀合物包含式(ii)的药物部分。

64、一个实施方案提供具有式(iii)的缀合物，

65、mi-l2-l3-l4-l5-l6-l7-d

66、(iii)

67、其中：

68、mi为

69、l2为不存在、

70、z1和z2各自独立地为氢、卤素、no2、-o-(c1-c6烷基)或c1-c6烷基；

71、l3为-(ch2)n1-c(＝o)-或-(ch2ch2o)n1-(ch2)n1c(＝o)-；

72、n1独立地为0至12的整数；

73、l4为四肽残基；

74、l5为不存在或-[nh(ch2)n2]n3-；

75、n2为0至6的整数；

76、n3为0至2的整数；

77、l6为不存在或

78、并且

79、l7为不存在、

80、d为药物部分。

81、一个实施方案提供一种制备免疫缀合物的方法，该方法包括：使有效量的硫醇官能化抗体或抗原结合片段与如本文所述的缀合物在有效形成如本文所述的免疫缀合物的反应条件下反应。

82、优选的另选方案包括：

83、1.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：

84、a)重链，所述重链包含：

85、包含与seq id no:1的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vhcdr 1；

86、包含与seq id no:2的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vhcdr 2；以及

87、包含与seq id no:3的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vhcdr 3；以及

88、b)轻链，所述轻链包含：

89、包含与seq id no:8的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vlcdr 1；

90、包含与aas的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vlcdr 2；以及

91、包含与seq id no:10的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vlcdr 3；

92、其中所述抗体或其抗原结合片段特异性地结合至人受体酪氨酸激酶如孤儿受体1(ror1)的细胞外结构域。

93、2.根据另选方案1所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含与seq id no:5、7、12或14中的任一者的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。

94、3.一种或多种核酸，所述一种或多种核酸编码根据另选方案1或2中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，诸如由包含与seq id no:4、6、11或13中的任一者所示的核酸序列具有至少95％序列同一性的序列的一种或多种核酸编码的抗体或其抗原结合片段。

95、4.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据另选方案3所述的一种或多种核酸。

96、5.根据前述实施方案中任一项所述的免疫缀合物，其中ab为根据权利要求另选方案1或2所述的抗体或抗原结合片段。

97、6.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：

98、a)重链，所述重链包含：

99、包含与seq id no:15的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vhcdr 1；

100、包含与seq id no:16的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vhcdr 2；以及

101、包含与seq id no:17的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vhcdr 3；以及

102、b)轻链，所述轻链包含：

103、包含与seq id no:22的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vlcdr 1；

104、包含与day的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vlcdr 2；以及

105、包含与seq id no:24的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vlcdr 3；

106、其中所述抗体或其抗原结合片段特异性地结合至人受体酪氨酸激酶如孤儿受体1(ror1)的细胞外结构域。

107、7.根据另选方案6所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含与seq id no:19、21、26或28中的任一者的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。

108、8.一种或多种核酸，所述一种或多种核酸编码根据另选方案6或7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，诸如由包含与seq id no:18、20、25或27中的任一者所示的核酸序列具有至少95％序列同一性的序列的一种或多种核酸编码的抗体或其抗原结合片段。

109、9.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据另选方案8所述的一种或多种核酸。

110、10.根据前述实施方案中任一项所述的免疫缀合物，其中ab为根据另选方案6或7所述的抗体或抗原结合片段。

111、11.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：

112、a)重链，所述重链包含：

113、包含与seq id no:29的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vhcdr 1；

114、包含与seq id no:30的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vhcdr 2；以及

115、包含与seq id no:31的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vhcdr 3；以及

116、b)轻链，所述轻链包含：

117、包含与seq id no:36的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vlcdr 1；

118、包含与das的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vlcdr 2；以及

119、包含与seq id no:38的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的vlcdr 3；

120、其中所述抗体或抗原结合片段特异性地结合至人受体酪氨酸激酶如孤儿受体1(ror1)的细胞外结构域。

121、12.根据另选方案11所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含与seq id no:33、35、40或42中的任一者的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。

122、13.一种或多种核酸，所述一种或多种核酸编码根据另选方案11或12中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，诸如由包含与seq id no:32、34、39或41中的任一者所示的核酸序列具有至少95％序列同一性的序列的一种或多种核酸编码的抗体或其抗原结合片段。

123、14.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据另选方案13所述的一种或多种核酸。

124、15.根据前述实施方案中任一项所述的免疫缀合物，其中ab为根据另选方案11或12所述的抗体或抗原结合片段。

125、16.一种抗体或其结合片段，或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述重链由seq id no:6所示的核酸序列编码并且所述轻链由seq id no:13所示的核酸序列编码。

126、17.根据另选方案16所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述抗体的所述重链包含seq id no:7的多肽序列并且所述轻链包含seq idno:14的多肽序列。

127、18.根据另选方案16或17中任一项所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述抗体或其结合片段与分子缀合。

128、19.根据另选方案18所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述分子为药物、毒素或细胞因子。

129、20.根据权利要求1至25中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体或其结合片段为根据另选方案16或17中任一项所述的抗体或其结合片段。

130、21.一种使用根据另选方案16至19中任一项所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，诸如根据另选方案20所述的免疫缀合物来抑制或治疗疾病，诸如癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据另选方案16至19中任一项所述的抗体或其结合片段或所述组合物，任选地选择接受所述疾病，诸如癌症的治疗的受试者和/或任选地在施用所述抗体或其结合片段之后测定对所述疾病，诸如癌症的抑制。

131、22.根据另选方案16至19中任一项所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，诸如根据另选方案20所述的免疫缀合物，其用作药剂，诸如用于抑制或治疗疾病诸如癌症的目的。

132、23.一种抗体或其结合片段，或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述重链由seq id no:20所示的核酸序列编码并且所述轻链由seq id no:27所示的核酸序列编码。

133、24.根据另选方案23所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述抗体的所述重链包含seq id no:21的多肽序列并且所述轻链包含seq idno:28的多肽序列。

134、25.根据另选方案23或24中任一项所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述抗体或其结合片段与分子缀合。

135、26.根据另选方案25所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述分子为药物、毒素或细胞因子。

136、27.根据权利要求1至25中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体或其结合片段为根据另选方案23或24中任一项所述的抗体或其结合片段。

137、28.一种使用根据另选方案23至26中任一项所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，诸如根据另选方案27所述的免疫缀合物来抑制或治疗疾病，诸如癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据权利要求另选方案23至26中任一项所述的抗体或其结合片段或所述组合物，任选地选择接受所述疾病，诸如癌症的治疗的受试者和/或任选地在施用所述抗体或其结合片段之后测定对所述疾病，诸如癌症的抑制。

138、29.根据另选方案23至26中任一项所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，诸如根据另选方案27所述的免疫缀合物，其用作药剂，诸如用于抑制或治疗疾病诸如癌症的目的。

139、30.一种抗体或其结合片段，或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述重链由seq id no:34所示的核酸序列编码并且所述轻链由seq id no:41所示的核酸序列编码。

140、31.根据另选方案30所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述抗体的所述重链包含seq id no:35的多肽序列并且所述轻链包含seq idno:42的多肽序列。

141、32.根据另选方案30或31中任一项所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述抗体或其结合片段与分子缀合。

142、33.根据另选方案32所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，其中所述分子为药物、毒素或细胞因子。

143、34.根据权利要求1至25中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体或其结合片段为根据另选方案30或31中任一项所述的抗体或其结合片段。

144、35.一种使用根据另选方案30至33中任一项所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，诸如根据另选方案34所述的免疫缀合物来抑制或治疗疾病，诸如癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据另选方案30至33中任一项所述的抗体或其结合片段或所述组合物，任选地选择接受所述疾病，诸如癌症的治疗的受试者和/或任选地在施用所述抗体或其结合片段之后测定对所述疾病，诸如癌症的抑制。

145、36.根据另选方案30至33中任一项所述的抗体或其结合片段或包含所述抗体或其结合片段的组合物，诸如根据另选方案34所述的免疫缀合物，其用作药剂，诸如用于抑制或治疗疾病诸如癌症的目的。