多核苷酸组合物、相关制剂、及其使用方法与流程

背景技术：

1、核酸，诸如转运rna(trna)可能被细胞用来表达蛋白质和多肽。一些细胞可能缺乏某种蛋白质或核酸，导致疾病状态。细胞还可以吸收和使用可以用于蛋白质合成反应的外源性trna，但许多因素影响trna的有效摄取和翻译。例如，免疫系统将许多外源性rna识别为外来物质，并触发旨在使rna失活的反应。

技术实现思路

1、本文提供了用于递送核酸的组合物和方法。核酸可能被用作治疗药物。特别是，trna可能被递送至对象的细胞。在将核酸递送至细胞后，核酸可能被用于合成多肽。在细胞或对象患有疾病或病症的情况下，核酸可能通过增加了多肽的表达来有效充当治疗药物。在多肽的异常表达或活性引起或相关的病症或疾病的情况下，多肽表达的增加可能是有益的。然而，细胞可能对外源性核酸的摄取有限，并且核酸的递送可能受益于使核酸摄取增加的组合物。

2、此外，治疗药物可以受益于器官特异性递送。许多不同类型的化合物，诸如化疗剂，表现出显著的细胞毒性。如果这些化合物可以更好地直接用于递送至所需的器官，则将看到更少的脱靶效应。

3、在一方面，本公开提供了一种包含与脂质组合物组装的合成的转运核糖核酸(trna)的组合物，该脂质组合物包括两性离子脂质，其中组合物为气雾剂组合物。

4、在另一方面，本公开提供了一种包含与脂质组合物组装的合成的转运核糖核酸(trna)的组合物，脂质组合物包含两性离子脂质，其中该组合物被配制用于气雾剂施用。在一些实施方案中，组合物具有从0.5微米(μm)至10μm的液滴粒度。在一些实施方案中，组合物具有从0.5μm至10μm的中值液滴粒度。在一些实施方案中，组合物具有从0.5μm至10μm的平均液滴粒度。在一些实施方案中，合成的trna为折叠的trna。在一些实施方案中，折叠的trna包括t臂、d臂、反密码子臂、可变环、接纳茎，或其组合。在一些实施方案中，合成的trna包括反密码子臂，其被配置为识别提前终止密码子。在一些实施方案中，合成的trna包括接纳茎，其被配置为可操作地连接到精氨酸。在一些实施方案中，trna包括多核苷酸序列，其具有与选自seq id no:1-seq id no:20的序列的至少约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。如权利要求1-10中任一项所述的组合物，其中两性离子脂质与合成的trna的(例如，重量或质量)比为不超过约50:1、40:1、30:1或20:1。在一些实施方案中，脂质组合物以约1％至约60％的摩尔百分比包含两性离子脂质。在一些实施方案中，脂质组合物还包含类固醇或类固醇衍生物。在一些实施方案中，组合物以约20％至约60％的摩尔百分比包含类固醇或类固醇衍生物。在一些实施方案中，脂质组合物还包含聚合物缀合脂质。在一些实施方案中，脂质组合物以约0.5％至约12％的摩尔百分比包含聚合物缀合脂质。在一些实施方案中，脂质组合物中的氮与合成的trna中的磷酸酯的摩尔比(n/p比)为不超过约50:1、40:1、30:1、20:1或10:1。在一些实施方案中，两性离子脂质包括磺酸盐阴离子。在一些实施方案中，两性离子脂质还包括季铵阳离子。在一些实施方案中，两性离子脂质包括烷基化或烯基化磷酸根阴离子。在一些实施方案中，烷基化或烯基化磷酸根阴离子具有结构式其中r为烷基或烯基；n为1、2、3、4、5或6；并且*指示烷基化或烯基化磷酸根阴离子的连接点。在一些实施方案中，*指示烷基化或烯基化磷酸根阴离子与季铵阳离子的连接点。

5、在另一方面，本公开提供了一种用于增强细胞中囊性纤维化跨膜传导调节因子(cftr)蛋白的表达和活性的方法，该方法包括：使细胞与包含与脂质组合物组装的转运核糖核酸(trna)的组合物接触，以将氨基酸引入细胞中cftr蛋白的生长肽链，从而在接触后至少48小时产生细胞中cftr蛋白的功能变体的治疗有效量或治疗有效活性，任选地，其中通过测量与缺失接触的参考多个细胞相比包括该细胞的多个细胞的跨上皮离子转运特征的变化来确定cftr蛋白的功能变体的治疗有效活性。

6、在另一方面，本公开提供了一种用于增强对象的细胞中囊性纤维化跨膜传导调节因子(cftr)蛋白的表达或活性的方法，该对象表现出或疑似表现出cftr基因中的突变，该方法包括：使细胞与包含与脂质组合物组装的转运核糖核酸(trna)的组合物接触，以在对应于对象的cftr基因中的突变的位置将氨基酸引入细胞中cftr蛋白的生长肽链，从而产生细胞中cftr蛋白的功能变体的治疗有效量或治疗有效活性，任选地，其中通过测量与缺失接触的参考多个细胞相比包括该细胞的多个细胞的跨上皮离子转运特征的变化来确定cftr蛋白的功能变体的治疗有效活性。在一些实施方案中，该方法在接触后至少72小时产生细胞中cftr蛋白的功能变体的治疗有效量或治疗有效活性。在一些实施方案中，接触为重复的。在一些实施方案中，接触为至少一周一次。在一些实施方案中，接触为至少一周两次。在一些实施方案中，该方法在每次接触后至少24小时产生细胞中cftr蛋白的功能变体的治疗有效量或治疗有效活性。在一些实施方案中，接触为第一次接触，并且其中该方法包括第二次接触，任选地，在第一次接触后至少约1、2或3天进行。在一些实施方案中，该方法还包括第三次接触，任选地，其中第三次接触在第二次接触后至少约1、2或3天进行。在一些实施方案中，该方法在第二次接触后至少24小时产生细胞中cftr蛋白的功能变体的治疗有效量或治疗有效活性。在一些实施方案中，该方法在第三次接触后至少24小时产生细胞中cftr蛋白的功能变体的治疗有效量或治疗有效活性。在一些实施方案中，每次接触中的组合物为完全相同的。在一些实施方案中，细胞为肺气道细胞。在一些实施方案中，细胞为肺分泌细胞。在一些实施方案中，细胞为支气管上皮细胞。在一些实施方案中，细胞为未分化的。在一些实施方案中，细胞为分化的。在一些实施方案中，细胞源自对象。在一些实施方案中，接触为体内的。在一些实施方案中，接触为体外的。在一些实施方案中，接触为离体的。在一些实施方案中，cftr蛋白的功能变体为野生型cftr蛋白。在一些实施方案中，cftr蛋白的功能变体为全长cftr蛋白。在一些实施方案中，cftr蛋白的功能变体的治疗有效活性对应于至少约2微安(μa)的跨上皮电流，例如，如在体外测定中所确定。在一些实施方案中，cftr蛋白的功能变体的治疗有效活性对应于从约2微安(μa)至约30μa的跨上皮电流，例如，如在体外测定中所确定。在一些实施方案中，cftr蛋白的功能变体的治疗有效活性对应于至少约2微安(μa)每平方厘米每分钟(μa·cm-2·min-1)的跨上皮电流，例如，如在体外测定中所确定。在一些实施方案中，cftr蛋白的功能变体的治疗有效活性对应于从约2微安(μa)每平方厘米每分钟(μa·cm-2·min-1)至约30μa·cm-2·min-1的跨上皮电流，例如，如在体外测定中所确定。在一些实施方案中，该方法相对于对应的对照(例如，缺失接触的对应的细胞)增加了细胞中cftr蛋白的功能变体的量或活性(例如，为至少约1.1倍)。在一些实施方案中，该方法相对于对应的对照(例如，缺失接触的对应的细胞)增强了细胞中的(例如，氯化物)离子转运(例如，为至少约1.1倍)。在一些实施方案中，突变为功能丧失突变。在一些实施方案中，突变为无义突变或移码突变。在一些实施方案中，突变在cftr基因的外显子11-27的一个或多个中。在一些实施方案中，突变为r553x。在一些实施方案中，trna为抑制因子trna。在一些实施方案中，trna包括多核苷酸序列，其具有与选自seq id no:1-seq idno:20的序列的至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。在一些实施方案中，包含与脂质组合物组装的trna的组合物为气雾剂。在一些实施方案中，组合物被配制用于顶端递送。在一些实施方案中，组合物被配制用于雾化。

7、在另一方面，本公开提供了一种用于治疗患有或疑似患有囊性纤维化跨膜传导调节因子(cftr)相关病况的对象的方法，该方法包括向对象施用如本文其他地方所描述的组合物。在一些实施方案中，cftr相关病况为囊性纤维化、遗传性肺气肿或慢性阻塞性肺病(copd)。在一些实施方案中，对象为哺乳动物。在一些实施方案中，对象为人。在一些实施方案中，施用包括通过雾化吸入。

8、对于本领域的技术人员，本公开的附加方面和优点将易于变得从以下详细描述中显而易见，其中仅示出和描述本公开的说明性实施方案。如将要实现的，本公开能够实现其他的和不同的实施方案，并且其若干细节能够在各种明显方面进行修改，所有均不偏离本公开。因此，附图和描述应被视为说明性的，而不是限制性的。

9、援引并入

10、本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度与每个单独的出版物、专利或专利申请被明确地和单独地指示通过引用并入相同。如果通过引用并入的出版物和专利或专利申请与说明书中包含的公开相矛盾，则说明书旨在替代和/或优先于任何此类矛盾的材料。