植物乳杆菌J26组合物、制法和在减肥产品中的应用

本发明涉及一种植物乳杆菌j26组合物及其制法和应用，具体涉及一种植物乳杆菌j26与0.3mg/ml的副干酪乳杆菌jy56胞外多糖复合配方粉剂及其制备方法及在缓解高脂饮食诱导肥胖小鼠中的减肥功能应用。属于微生物。

背景技术：

1、饮食是影响宿主营养吸收和代谢的主要因素。随着人们生活水平的提高，营养过剩的问题日渐严重，高脂饮食的摄入量不断增加，严重危害着人们的身体健康。过去几十年里，在发达国家和一些发展中国家，一些由高脂饮食为主要诱因而引起的代谢疾病（如肥胖、糖尿病以及非酒精性脂肪肝等），已经成为重要的社会问题。肥胖是一种长期处于能量摄入超过能量消耗状态而引起的慢性疾病。在这种情况下，脂肪组织将多余的能量储存为甘油三酯，脂质溢出进入循环系统增加对非脂肪组织（例如肝脏和骨骼肌）的脂质供应，并增加促炎因子的含量。这些肥胖相关的组织和器官代谢功能紊乱还会导致胰岛素抵抗、糖尿病和非酒精性脂肪肝的发生和发展。

2、肥胖的发生多伴随着脏器损伤现象与机体内免疫因子含量的变化。现有的乳杆菌减肥作用研究一般单一乳杆菌复配，多数依赖于乳杆菌本身的功能特性并进行制备处理，虽然也具有一定的减肥作用，但效果一般。虽然在现有技术中的报道中，很多已知菌或组合物的也具有一定的减肥效果。如中国专利cn114344344 a中公开了罗伊氏乳杆菌在缓解高脂饮食诱导小鼠肥胖功能中的应用及含有罗伊氏乳杆菌的复合物，其中公开了组合物由罗伊氏乳杆菌和胞外多糖组成，胞外多糖的制备方法如下：37℃培养条件下，副干酪乳杆菌jy062菌株在mrs肉汤培养基中培养24h，在容量为1.0l的三角瓶子中进行分批发酵，接种物的初始密度为1.5×109cfu/ml，接种物浓度为5.0％，胞外多糖按照水提醇沉法进行提取，采用三氯乙酸去除蛋白的方法进行纯化，将去除蛋白的胞外多糖重悬于去离子水中，透析72h，分子截流量为：12000-14000da，然后将上清液冻干，获得胞外多糖。胞外多糖的浓度为0.5mg/ml。但是，上述专利存在胞外多糖需要经过水提醇沉-去除蛋白-透析等纯化操作，每步操作均会损失部分胞外多糖，故该专利中的多糖的产量必然会很低，另外，该专利对胞外多糖的分子量有严格要求，只有分子量在12000-14000da的范围内的胞外多糖与罗伊氏乳杆菌复配后，另外还要求“罗伊氏乳杆菌及罗伊氏乳杆菌j1 1010cfu/ml与胞外多0.5mg/ml混合组均有一定的降胆固醇能力”，才可以起到强化功效作用的效果。由此可见，上述专利在菌浓度和糖浓度均较高，且对糖的分子量具有特定要求的情况下，才能起到较好的减肥效果。故亟需一种胞外多糖产量和纯度均较高、对胞外多糖的分子量无要求，起效浓度低、便于制备、可实现工业化生产的具有减肥作用的组合物及其制法和应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供植物乳杆菌j26与0.3mg/ml的副干酪乳杆菌jy56胞外多糖复配的微生物制剂在缓解高脂饮食诱导肥胖小鼠的减肥功能应用。减低由高脂饮食诱导的肥胖小鼠的体重，显著降低肥胖小鼠血清和肝脏中tc、tg、ldl-c和glu的含量，降低肥胖小鼠血清中的alt、ast、tnf-α、il-6、il-1β和ifn-γ含量。减轻肥胖小鼠肝脏脂肪变性情况，缓解炎症细胞浸润和纤维组织增生现象。

2、同时，本发明提供了一种植物乳杆菌j26与副干酪乳杆菌jy56胞外多糖复配的粉剂制法。

3、同时，本发明提供一种含有植物乳杆菌j26组合物的粉剂。

4、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

5、一种植物乳杆菌j26组合物，包括副干酪乳杆菌(lacticaseibacillusparacasei)jy56胞外多糖，副干酪乳杆菌jy56保藏于广东省微生物菌种保藏中心，广州，保藏日期为2022年11月21日，保藏编号为gdmcc no：62988。

6、一种植物乳杆菌j26组合物，还包括植物乳杆菌（ lactobacillus plantarum）j26，其中植物乳杆菌j26菌泥与副干酪乳杆菌jy56胞外多糖的质量比例为1:1。

7、植物乳杆菌j26的浓度为109cfu/ml；胞外多糖的浓度为0.3mg/ml。

8、一种植物乳杆菌j26组合物的制法，包括以下步骤：

9、步骤一，植物乳杆菌j26的菌泥的制备：取活化后的植物乳杆菌j26菌株，以5~7%的接种量接种于200ml脱脂乳粉培养基，37℃扩大培养14h后，以5%的接种量进行4l高密度发酵，发酵14h，离心得到植物乳杆菌j26菌泥；

10、步骤二，将步骤一获得的植物乳杆菌j26菌泥与0.3mg/ml的副干酪乳杆菌jy56胞外多糖按照质量比例1:1进行复配，获得组合物，均质后冷冻干燥，得到含有植物乳杆菌j26菌粉的组合物。

11、高密度发酵的液体发酵环境为：温度35～37℃，湿度65～70%，ph值<7，通氧气量0.7～1.5vvm，搅拌机功率1.5～2kwh/m3。

12、胞外多糖的制备方法为：在ph为6.0的条件下，接种5%的副干酪乳杆菌jy56至mrs培养基上，在30℃温度条件下发酵26h，胞外多糖的产量达5.88 mg/ml，且胞外多糖的纯度为98.791μg/ml。

13、一种植物乳杆菌j26组合物在制备减肥药品或减肥食品中的应用。

14、一种植物乳杆菌j26组合物在制备降血糖药品中的应用。

15、一种植物乳杆菌j26组合物在制备治疗肝损伤药物中的应用。

16、本发明的组合物含有药学上可接受的辅料。

17、组合物用于功能性食品或保健品中的成分。

18、组合物在制备降低体重、缓解脂质积蓄水平升高的减肥产品中的应用。

19、组合物在制备降低体重、缓解脂质积蓄水平升高的缓解肥胖造成的脏器损伤产品中的应用。

20、本发明具有以下有益效果：

21、本发明提供了一种安全有效的植物乳杆菌j26与副干酪乳杆菌jy56胞外多糖复配的微生物制剂在缓解高脂饮食诱导肥胖小鼠的减肥功能应用及一种含有减肥成分的植物乳杆菌j26与副干酪乳杆菌jy56胞外多糖复配粉剂的制法，可降低由高脂饮食诱导的肥胖小鼠的体重，显著降低肥胖小鼠血清和肝脏中tc、tg、ldl-c和glu的含量，降低肥胖小鼠血清中的alt、ast、tnf-α、il-6、il-1β和ifn-γ含量。减轻肥胖小鼠肝脏脂肪变性情况，缓解炎症细胞浸润和纤维组织增生现象。且本发明的制法使得制备的粉末中含有109cfu/ml植物乳杆菌j26菌粉减肥成分，再通过添加一定比例的具有减肥作用的副干酪乳杆菌jy56胞外多糖与之复配，可显著提升组合物粉剂的减肥作用，并且能够保护植物乳杆菌j26的活性；可见本发明的植物乳杆菌j26与副干酪乳杆菌jy56胞外多糖复配的组合物在制备减肥产品中具有巨大的应用前景。

22、本发明公开了一种含有植物乳杆菌j26（植物乳杆菌ndc75017的分类命名为植物乳杆菌 lactobacillus plantarum，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc），北京，保藏日期为2011年11月08日，保藏编号为cgmcc no.5448；植物乳杆菌j26简称 l. plantarumj26、lj26或j26；植物乳杆菌td109简称td109；植物乳杆菌j26和植物乳杆菌td109均为植物乳杆菌ndc75017的其他命名，植物乳杆菌j26和植物乳杆菌td109经序列鉴定与中国发明专利201210552498.3记载的保藏编号为cgmcc no.5448的植物乳杆菌（ lactobacillus plantarum）ndc75017系同一株菌，申请人在相关证明文件中提交了植物乳杆菌j26和植物乳杆菌td109即为植物乳杆菌（ lactobacillus plantarum）ndc75017的证明文件，故本发明用植物乳杆菌j26来代表植物乳杆菌ndc75017）的组合物，采用响应面法优化副干酪乳杆菌jy56胞外多糖（eps）的提取工艺，同时考察了eps对植物乳杆菌j26体外生长情况的影响，明确了按照质量比例1：1加入0.3mg/ml的副干酪乳杆菌jy56胞外多糖。本发明的组合物能对植物乳杆菌j26体外生长情况具有一定的促进作用。当eps作为唯一碳源时，0.3mg/ml的eps能够促进植物乳杆菌j26生长，此时活菌数高达3.92×109cfu/ml。经扫描电镜观察，当eps作为唯一碳源培养时，植物乳杆菌j26表观形状丰满，边缘清晰，组合物对功能性益生菌植物乳杆菌j26具有促进生长和保护活性的作用。本发明还公开了一种含有植物乳杆菌j26的组合物在减肥产品中的应用。本发明可显著提升植物乳杆菌j26的减肥作用；在制备减肥的产品中具有巨大的应用前景。