用于胃癌诊断、治疗以及预后评估的肿瘤标志物及其应用

本发明属于生物医学，涉及一种用于胃癌诊断、治疗以及预后评估的肿瘤标志物及其应用。

背景技术：

1、胃癌(gastric cancer，gc)是全球范围内常见的恶性肿瘤，发明人数占所有癌症种类中的第五位，是癌症相关死亡的第三大原因，每年大约有100万新发胃癌病例和80万胃癌患者死亡。在临床上，胃癌起病隐匿，早期无特异症状；另一方面，目前缺乏可靠的早期诊断胃癌的生物标志物。这些原因导致多数胃癌患者就诊时已处于进展期，尽管临床上对此期胃癌患者进行了积极系统的治疗，但5年总生存率仍低于20％。因此，迫切需要进一步探索胃癌发生发展的确切机制，以期寻找新的胃癌诊断、预后判定的生物标志物和潜在的治疗靶点。

2、外泌体(exosomes)是一种由细胞(包括肿瘤细胞)分泌的直径约为30-150nm的膜性囊泡，分布于外周血、尿液、唾液、腹水、羊水等体液中。外泌体含有多种生物活性分子，包括蛋白质、脂质、mrna和非编码rna，这些内容物能够被受体细胞内化，从而作为细胞-细胞之间通信的载体，从而参与机体许多生理和病理过程如免疫反应、感染和肿瘤发生等。研究发现，mrna可稳定存在于血液循环外泌体中，恶性肿瘤患者循环外泌体mrna表达水平显著异常，并且其表达水平与相应肿瘤组织mrna表达成显著正相关，提示循环外泌体mrna有望成为肿瘤无创诊断、靶向治疗和预后评估的生物标志物。

3、由于现有技术中关于胃癌的发病因素尚不明确，而对于外泌体、mrna在胃癌的预防、治疗以及预后过程中的相关作用及影响更是少有研究，临床治疗缺乏有效的治疗手段。通过对胃癌患者与健康人群体内外泌体mrna进行分析，寻找与胃癌发生、发展相关的关键mrna靶点具有至关重要的意义，有助于为临床上进行胃癌的预防、诊断、治疗以及预后评估提供切实的理论依据和基础。

技术实现思路

1、本发明的目的在于解决现有技术中所存在的胃癌发病因素不明确、难以进行提前预防的技术问题，从而提供了一种与胃癌发生、发展高度相关的靶点，即tmem238。通过以tmem238作为标志物，能够用于对胃癌疾病的发生发展过程进行有效预测，从而筛选出胃癌的高发病人群，以进行合理的提前预防，显著降低疾病发生的概率及严重程度，减少对人体健康的损害。

2、为达到上述目的，本发明所采取的技术方案是：

3、本发明第一方面提供了检测tmem238表达水平的试剂在制备用于胃癌辅助诊断和/或预后评估的产品中的应用。

4、作为优选地，所述检测tmem238表达水平的试剂包括用于检测tmem238基因表达水平的引物对。

5、作为优选地，所述引物对上游序列为cggggacctgctcatctactcgg(5’-3’)，下游序列为cccagcaggctcaggaacacc(5’-3’)。

6、应理解的是，在没有特别说明的情况下，在本发明上下文中，所述引物和/或引物对是指用于在pcr中合成tmem238基因cdna链的pcr引物，从而用于检测tmem238基因mrna的表达水平。除本发明所列出的引物和/或引物对外，本领域技术人员完全有能力根据tmem238的基因序列采用包括但不限于分子生物学等本领域的常规方法手段进行相应引物和/或引物对的设计，并通过常规实验手段对所设计的引物和/或引物对进行筛选，只要能够实现特异性检测tmem238表达水平即可。

7、本发明第二方面提供了tmem238抑制剂在制备用于预防和/或治疗胃癌的药物中的应用。

8、应理解的是，在没有特别说明的情况下，在本发明上下文中，所述tmem238抑制剂是指能够特异性下调tmem238表达水平和/或其成熟mrna的转录水平和/或tmem238蛋白表达水平或活性的物质，例如采用反义寡核苷酸、sirna、shrna、sgrna、antagomirs、mirna海绵、mirna erasers、target masking和/或多靶点等方法以下调tm em238表达水平和/活性，只要是能够实现tmem238的水平和/或活性降低均可。

9、作为优选地，所述tmem238抑制剂选自基于tmem238基因设计的sirna和/或shrna。

10、作为优选地，所述基于tmem238基因设计的sirna序列为ggcuggauccucugguacatt。

11、本发明第三方面提供了一种用于胃癌辅助诊断和/或预后评估的试剂盒，包括用于检测tmem238基因表达水平的引物对。

12、作为优选地，所述引物对上游序列为cggggacctgctcatctactcgg(5’-3’)，下游序列为cccagcaggctcaggaacacc(5’-3’)。

13、作为优选地，所述试剂盒还包括pcr酶、pcr缓冲液、dntps、荧光底物中的一种或多种。

14、作为优选地，所述荧光底物选自syber green或荧光标记的探针。

15、本发明第四方面提供了一种用于胃癌辅助诊断和/或预后评估的芯片，包括固相载体，以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针；所述寡核苷酸探针包括对tmem238表达水平进行特异性检测的引物对。

16、作为优选地，所述引物对上游序列为cggggacctgctcatctactcgg(5’-3’)，下游序列为cccagcaggctcaggaacacc(5’-3’)。

17、本发明第五方面提供了一种用于预防和/或治疗胃癌的药物组合物，包括下调tmem238抑制剂以及药学上可接受的载体。

18、作为优选地，所述tmem238抑制剂选自基于tmem238基因设计的sirna和/或shrna。

19、作为优选地，所述基于tmem238基因设计的sirna序列为ggcuggauccucugguacatt。

20、跨膜(transmembrane，tmem)蛋白家族是各种细胞生物膜的组成成分，广泛表达于各种组织细胞。近年来有研究表明，tmem表达异常(表达下调或上调)可能与人类肿瘤的发生发展存在一定关联性。tmem238是tmem家族的一个成员，然而其功能及与人类疾病尤其是胃癌的关系尚未见报道。

21、本发明则通过大量研究发现，tmem238在胃癌患者体内表达水平与正常人存在显著的差异性，从而推定tmem238的表达水平可能与胃癌的发生、发展、治疗以及预后等具有高度关联性。本发明中进一步通过实验发现，tmem238在胃癌细胞中表达显著升高。本发明基于荧光定量rt-pcr方法，对3种胃癌细胞及1种正常胃粘膜上皮细胞进行检测，获得tmem238 mrna的表达数据，再同时对临床胃癌样本进行分析、调研和验证，结果显示，tmem238高表达与较晚的tnm分期及肿瘤组织分化程度差相关。体外和体内实验结果显示，在tmem238高表达的胃癌细胞内，无论是细胞增殖、迁移还是侵袭性能相对于常规胃癌细胞均得到了明显提升，而当抑制tmem238的表达时，则能够有效降低胃癌细胞的各项功能活性；同时tmem238表达水平对于e-cadherin以及cyclin d1的表达均有显著影响，从而影响胃癌细胞的生长和侵袭能力。由此可以明确tmem238与胃癌密切相关，可用于预防检测及临床诊治，具有很好的临床应用价值。

22、本发明相对于现有技术具有如下技术效果：

23、(1)本发明对胃癌的发病、发展机制进行了深入研究，发现tm em238的表达水平是一个与胃癌高度关联的因素；进而，通过对受试者体内tmem238进行检测，获得其表达水平指标，从而可以有效对受试者罹患胃癌的几率进行合理预测，即tmem238的表达水平可以作为临床辅助诊断胃癌疾病的生物标志物，当tmem238表达水平明显增高时，则可以明确受试者为胃癌患者或罹患胃癌的高风险人群，有效防止疾病的迅速发展和恶化对患者造成不可以的健康损害。

24、(2)通过对胃癌患者体内tmem238表达水平进行检测，可以判断对患者体内肿瘤分化程度进行合理预测，从而提供个性化的治疗方案，以改善临床治疗效果；也可对患者的预后进行合理评估，为治疗及康复提供合理有效的指导作用。

25、(3)本发明明确了通过抑制tmem238表达能够对胃癌细胞产生显著的抑制作用，进而对胃癌的发生、发展、转移等起到显著的抑制活性，为人类攻克胃癌提供了一个新的药物治疗靶点，为寻找新型胃癌诊断相关的肿瘤标记物或新的治疗策略对于胃癌的控制提供新的方向，有助于为后续的药物研发、临床治疗等，具有重要的科学意义。