产细菌素的植物乳植杆菌及其应用的制作方法

本发明涉及微生物，特别涉及产细菌素的植物乳植杆菌及其应用。

背景技术：

1、随着经济与社会的发展，人民群众对食品安全的要求越来越高，特别是对食品生产过程中使用各种添加剂的安全性尤为关注。食品的腐败变质以及加工过程中食源性致病菌的控制是一个迫切需要解决的问题。苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸酯类等化学合成防腐剂，研究发现，这一类防腐剂对人体有一定的毒性作用，长期食用会对健康造成不利影响。因此，研究者把目光投向了天然防腐剂的开发，天然防腐剂较化学合成防腐剂安全性更高，迎合了食品防腐剂的发展趋势和食品加工的需要。

2、目前，乳酸链球菌细菌素(nisin)是唯一被fao/who认定为安全的允许应用在食品中的天然防腐剂，广泛应用于肉制品、果蔬制品及乳制品的防腐保鲜。细菌素是细菌在特定的代谢途径中，通过核糖体产生的蛋白质多肽或者蛋白类复合物，细菌素能杀死与产细菌素菌株关系相近的其他细菌，或抑制其生长繁殖，而对产细菌素菌株本身不发生拮抗作用。细菌素进入人体消化道后可以被消化道内各种蛋白酶消化掉，具有作用范围广、无毒性、强抗菌性、无残留等特点。

3、乳酸菌(lactic acidbacteria，lab)是fda认定的食品级安全微生物，在其发酵过程中会产生有机酸、过氧化氢、细菌素等抑菌物质，是目前细菌素的主要产生菌。因此，提供一株新型产细菌素的乳酸菌菌株，在开发新型防腐剂方面具有广大的应用价值。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了产细菌素的植物乳植杆菌及其应用。本发明提供了一株有抑菌作用的aup2203，其保藏编号为cgmcc no.25920。本发明通过实验发现所述aup2203具有抑菌、产细菌素、将亚硝酸盐、耐酸、耐胆盐、抗炎和抗氧化的功能。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种植物乳植杆菌(lactiplantibacillusplantarum)aup2203，其保藏编号为cgmcc no.25920。

4、在本发明的一些具体实施方案中，所述植物乳植杆菌(lactiplantibacillusplantarum)aup2203的使用形式包括活菌、灭活菌体、发酵液、外泌体或代谢产物中的一种或多种。

5、本发明还提供了一种组合物，包括所述植物乳植杆菌(lactiplantibacillusplantarum)aup2203，以及可接受的辅料和/或助剂。

6、本发明还提供了所述植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)aup2203或所述组合物在制备如下任意项的产品中的应用：

7、(i)、抑菌；和/或

8、(ii)、产细菌素；和/或

9、(iii)、降亚硝酸盐；和/或

10、(iv)、耐酸；和/或

11、(v)、耐胆盐；和/或

12、(vi)、抗氧化；和/或

13、(vii)、抗炎；

14、所述产品包括药物，食品或化妆品中的一种或多种。

15、在本发明的一些具体实施方案中，所述抑菌：

16、(i)、排除有机酸抑菌作用效果的影响；

17、(ii)、排除过氧化氢抑菌作用效果的影响。

18、所述抑菌包括：抑制革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌；

19、所述革兰氏阳性菌包括金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌和藤黄微球菌中的一种或多种；

20、所述革兰氏阴性菌包括铜绿假单胞菌、大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌和变形杆菌中的一种或多种。

21、在本发明的一些具体实施方案中，所述耐酸的ph值包括2.5。

22、在本发明的一些具体实施方案中，所述耐胆盐包括耐0.3％牛胆盐。

23、在本发明的一些具体实施方案中，菌株aup2203能显著降低发酵液中亚硝酸钠的浓度，降解率为83.9％；在ph 2.5的酸性mrs培养基中，培养2h，存活率为57.96％，具有较好的耐酸能力；aup2203在含0.3％牛胆盐的生理盐水中培养2h后，存活率达到133.68％，具有较好的耐受胆盐的能力。

24、在本发明的一些具体实施方案中，所述抗氧化包括清除dpph自由基。

25、在本发明的一些具体实施方案中，所述抗炎包括抑制炎症因子的释放。

26、在本发明的一些具体实施方案中，所述抗炎包括细胞水平和动物水平上具有抗炎效果；所述细胞包括raw264.7细胞；所述动物包括果蝇。在raw264.7细胞中，可通过nf-κb信号通道抑制炎症因子的释放，降低nf-κb和/或iκb-α蛋白质磷酸化水平。

27、所述炎症因子包括il-6、il-1β或tnf-α中的一种或多种。

28、本发明还提供了一种发酵制品，经所述植物乳植杆菌(lactiplantibacillusplantarum)aup2203或所述组合物发酵制得。

29、本发明还提供了一种产品，其包括如下任意项，以及可接受的辅料：

30、(i)、所述植物乳植杆菌(lactiplantibacillusplantarum)aup2203；和/或

31、(ii)、所述组合物；和/或

32、(iii)、所述发酵制品；

33、所述产品包括药品，食品，化妆品或食品添加剂中的一种或多种。

34、实验证明，(1)aup2203细菌素具有广谱的抑菌活性；

35、(2)菌株aup2203能显著降低发酵液中亚硝酸钠的浓度，降解率为83.9％；

36、(3)aup2203具有较好的耐酸能力；

37、(4)aup2203具有较好的耐受胆盐的能力；

38、(5)aup2203具有dpph自由基清除能力，dpph自由基清除能力达到45.28±1.99％；

39、(6)aup2203能显著抑制il-6、il-1β和tnf-α炎症因子的释放。加菌实验组与模型组相比炎症因子含量均有所下降，且菌浓度在108cfu/ml以上抑制炎症因子分泌效果较好。表明aup2203具有抗炎能力；

40、(7)aup2203对大部分青霉素类和头孢类药物敏感，但对氨基糖苷类、大环内酯类和四环素类药物都耐受或者中介，表现出一定的耐药性；

41、(8)aup2203无溶血性，符合食品安全的要求；

42、(9)aup2203的氨基酸脱羧酶呈阴性，不携带氨基酸脱羧酶基因。

43、本发明提供的有益效果包括但不限于：

44、本研究采用双层琼脂扩散法从实验室植物源菌种库1000株乳酸菌中筛选产细菌素乳酸菌，1000株乳酸菌的原始发酵上清液都能抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长；排除有机酸的抑菌作用后筛选出25株具有抑菌活性的菌株，同时排除有机酸和过氧化氢的抑菌作用后，aup2203的发酵液对指示菌仍然有抑菌作用。通过形态学观察和16s rdna基因序列分析，菌株aup2203鉴定为植物乳植杆菌。

45、所述aup2203具有抑菌、产细菌素、将亚硝酸盐、耐酸、耐胆盐、抗炎和抗氧化的功能。

46、生物保藏说明

47、生物材料：aup2203，分类命名：植物乳植杆菌(lactiplantibacillusplantarum)，于2022年10月14日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmccno.25920。