多肽KWQRKSIRH、制备方法及其在增敏致DNA损伤类肿瘤疗法中的应用

本发明属于医药，尤其是涉及一种多肽kwqrksirh，制备方法及其在增敏致dna损伤类肿瘤疗法中的应用。

背景技术：

1、肿瘤是全世界面临的一个严重的重大公共卫生问题。放化疗是指化疗和放疗相结合的一种抗癌治疗方法，可以改善局部肿瘤控制和患者生存，同时不需要手术器官切除，目前已成为许多局部晚期实体肿瘤的标准治疗方法。虽然化疗初期有效，但往往伴随高频率的化疗耐药问题，导致肿瘤患者临床治疗的失败和预后不良现象的存在。放射治疗是人类癌症的主要治疗手段，主要机制是引起dna损伤，但是放疗抗性也是众所周知的治疗难题之一。因此，寻找和研发能够提高肿瘤化放疗敏感性，降低肿瘤抗性的候选药物迫在眉睫。

2、近年来，来源于蛋白的多肽已经成为一种创新的方法来开发更有选择性的候选药物，因为这些多肽固有的构象刚性和灵活性适合结合蛋白-蛋白相互作用涉及的界面，使它们具有令人满意的亲和力和特异性，从而破坏或调节细胞内的蛋白与蛋白之间的相互作用，而不产生细胞毒性和副作用。来自蛋白的多肽药物通常以α-螺旋最为广泛。但是目前尚未报道水溶性好，生物相容性好，同时能够增敏肿瘤对放化疗诱导的dna损伤敏感性的多肽类药物报道。

技术实现思路

1、有鉴于此，为解决上述问题，本发明提出了一种能够增敏肿瘤化放疗诱导的dna损伤敏感性，提高肿瘤化放疗效果的多肽kwqrksirh，并提供了其制备方法，及其在增敏致dna损伤类肿瘤疗法中的应用；所述多肽kwqrksirh水溶性好，容易进入细胞内部，不产生细胞毒性，能够抑制肿瘤细胞dna损伤修复响应，增强和改善化放疗对肿瘤的治疗效果。

2、为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

3、本发明一方面提供了一种多肽kwqrksirh，其具有良好的水溶性，其结构式为：

4、

5、本发明再一方面提供了一种多肽kwqrksirh的制备方法，包括如下步骤：

6、s1、在固相合成器中将fmoc-h(trt)-oh连接在2-氯三苯甲基氯树脂上，用二氯甲烷作为溶剂进行固相合成反应，后抽干二氯甲烷；

7、s2、用dmf洗涤多次，用20％哌啶脱fmoc，颜色为蓝色则脱好，用dmf洗涤多次，接着投放fmoc-r(pbf)-oh、多肽缩合剂hbtu、hobt、n-甲基吗啡啉、dmf于固相合成器中固相合成反应；

8、s3、后采用dmf洗涤多次，用20％哌啶脱fmoc，颜色为蓝色则脱好，用dmf洗涤多次，后依次与fmoc-i-oh，fmoc-s(tbu)-oh，fmoc-k(boc)-oh，fmoc-r(pbf)-oh，fmoc-q(trt)-oh，fmoc-w(boc)-oh，fmoc-k(boc)-oh进行固相缩合，直到与最后一个k反应结束，脱fmoc后，用95％的三氟乙酸切割液把制备的多肽从树脂上分离切割2-3小时，并将所得粗品用高效液相色谱仪进行分离纯化，冻干即得到多肽kwqrksirh。

9、本发明再一方面提供了所述的多肽kwqrksirh和所述的制备方法制备的多肽kwqrksir如下任一种应用：

10、(a)在制备dna损伤增敏剂中的应用；

11、(b)在制备肿瘤放化疗增敏药物中的应用；

12、(c)作为dna损伤增敏剂在制备肿瘤放化疗药物中的应用。

13、在本发明的一些优选的应用的实施方式中，所述的多肽kwqrksirh或所述的制备方法制备的多肽kwqrksir增敏紫外诱导的肿瘤细胞的dna损伤，抑制体外肿瘤细胞生长。

14、在本发明的一些更优选的应用的实施方式中，多肽kwqrksirh在肿瘤细胞里的使用浓度为10～500nm。

15、在本发明的一些优选的应用的实施方式中，所述的多肽kwqrksirh或所述的制备方法制备的多肽kwqrksir抑制ku80依赖性的dna损伤修复因子的响应。

16、在本发明的一些优选的应用的实施方式中，所述的多肽kwqrksirh或所述的制备方法制备的多肽kwqrksir与阿霉素、电离辐射、曲妥珠单抗或他莫昔芬联用，增敏阿霉素、电离辐射、曲妥珠单抗或他莫昔芬对肿瘤的治疗效果，抑制肿瘤生长。

17、在本发明的一些更优选的应用的实施方式中，对乳腺癌小鼠，多肽kwqrksir的瘤旁有效给药浓度为10mg/kg，阿霉素腹腔有效给药浓度为3mg/kg，电离辐射有效剂量为5gy，曲妥珠单抗腹腔有效给药浓度为4mg/kg，他莫昔芬腹腔有效给药浓度为25mg/kg。

18、在本发明的一些优选的应用的实施方式中，所述的多肽kwqrksirh或所述的制备方法制备的多肽kwqrksir对来源于不同物种的rhbdf1蛋白具有高度特异性和专一性。

19、在本发明的一些优选的应用的实施方式中，所述的多肽kwqrksirh或所述的制备方法制备的多肽kwqrksir具有pkc激酶的磷酸化底物识别位点。

20、在本发明的一些优选的应用的实施方式中，所述肿瘤为乳腺癌。

21、在本发明的一些更优选的应用的实施方式中，多肽kwqrksirh能够抑制小鼠乳腺癌生长，多肽kwqrksir的瘤旁有效给药浓度为10mg/kg。

22、本发明再一方面提供了一种药物组合物，包括具有增敏肿瘤对放化疗诱导的dna损伤敏感性作用的多肽kwqrksirh。

23、发明再一方面提供了荧光探针fitc修饰的多肽kwqrksirh，其具有良好的水溶性，1～6小时内能够进入肿瘤细胞内部，其结构式为：

24、

25、发明再一方面提供了荧光探针fitc修饰的多肽kwqrksirh的制备方法，包括如下步骤：

26、s1、在固相合成器中将fmoc-h(trt)-oh连接在2-氯三苯甲基氯树脂上，用二氯甲烷作为溶剂进行固相合成反应，后抽干二氯甲烷；

27、s2、用dmf洗涤多次，然后用20％哌啶脱fmoc，颜色为蓝色则脱好，用dmf洗涤多次，接着投放fmoc-r(pbf)-oh，多肽缩合剂hbtu，hobt，n-甲基吗啡啉，dmf于固相合成器中固相合成反应；

28、s3、后采用dmf洗涤多次，然后用20％哌啶脱fmoc，颜色为蓝色则脱好，用dmf洗涤多次，后依次与fmoc-i-oh，fmoc-s(tbu)-oh，fmoc-k(boc)-oh，fmoc-r(pbf)-oh，fmoc-q(trt)-oh，fmoc-w(boc)-oh，fmoc-k(boc)-oh，acp进行固相缩合，直到最后在避光条件下与fitc缩合结束，脱fmoc，用95％的三氟乙酸切割液把制备的多肽从树脂上分离切割2-3小时，并将所得粗品用高效液相色谱仪进行分离纯化，冻干即得到荧光多肽fitc-kwqrksirh。

29、发明再一方面提供了荧光探针fitc修饰的多肽kwqrksirh在肿瘤活细胞中示踪剂中的应用。

30、在本发明的一些优选的应用的实施方式中，所述荧光探针fitc修饰的多肽kwqrksirh在活细胞内的使用浓度为1～10nm。

31、需要说明的是，本发明用到的氨基酸均为l构型的天然氨基酸。

32、相对于现有技术，本发明所述的多肽kwqrksirh，制备方法及其在增敏致dna损伤类肿瘤疗法中的应用具有以下优势：

33、(1)本发明制备得到的多肽kwqrksirh和荧光多肽fitc-kwqrksirh具有良好的水溶性，模拟为α-螺旋结构，在加入肿瘤细胞后的1～6小时内就能够进入肿瘤细胞内部；不产生细胞毒性，对细胞生长没有明显的抑制；

34、(2)本发明所述的多肽kwqrksirh能够增敏肿瘤化放疗诱导的dna损伤敏感性，提高肿瘤化放疗效果；

35、(3)本发明所述的多肽kwqrksirh能够体外抑制紫外刺激后的肿瘤细胞生长，增敏紫外对肿瘤细胞的dna损伤，抑制ku80依赖性的dna损伤修复因子的响应；

36、(4)本发明所述的多肽kwqrksirh能够抑制肿瘤的生长，能与阿霉素，电离辐射，曲妥珠单抗，他莫昔芬联合使用，增敏阿霉素，电离辐射，曲妥珠单抗，他莫昔芬对肿瘤的治疗效果。