粉螨科螨类线粒体全基因组扩增通用引物及扩增方法

文档序号:34211452发布日期:2023-05-17 19:46阅读:来源:国知局

技术特征:

1.粉螨科螨类线粒体全基因组扩增通用引物,其特征在于,所述粉螨科螨类线粒体全基因组扩增通用引物包括6对通用引物,分别对应cox1-cox3、cox3-rrnl、rrns-nad4、nad4-nad5、nad5-cytb和cytb-cox2区域,具体为:

2.一种权利要求1所述的粉螨科螨类线粒体全基因组扩增通用引物的扩增方法,其特征在于,采用所述6对通用引物,用50μl pcr体系在pcr扩增条件下进行目标片段扩增。

3.根据权利要求2所述的扩增方法,其特征在于,所述50μlpcr体系具体包括:10μl 5×buffer,4μl dntp mix,4μl上游引物,4μl下游引物,2μl gxl酶,4μl dna模板,22μl双蒸水。

4.根据权利要求2或3所述的扩增方法,其特征在于,所述的pcr扩增条件具体包括:98℃预变性3min;98℃变性10s,48~55℃退火15s,68℃延伸1min 40s,扩增30~35个循环,最后68℃延伸10min。

5.根据权利要求4所述的扩增方法,其特征在于,采用第一对引物扩增区域cox1-cox3,退火温度50℃,产物长度1800-2100bp。

6.根据权利要求4所述的扩增方法,其特征在于,采用第二对引物扩增区域cox3-rrnl,退火温度50℃,产物长度2800-3100bp。

7.根据权利要求4所述的扩增方法,其特征在于,采用第三对引物扩增区域rrns-nad4,退火温度52℃,产物长度3500-3800bp。

8.根据权利要求4所述的扩增方法,其特征在于,采用第四对引物扩增区域nad4-nad5,退火温度50℃,产物长度1200-1500bp。

9.根据权利要求4所述的扩增方法,其特征在于,采用第五对引物扩增区域nad5-cytb,退火温度48℃,产物长度3300-3600bp。

10.根据权利要求4所述的扩增方法,其特征在于,采用第六对引物扩增区域cytb-cox2,退火温度50℃,产物长度2300-2600bp。


技术总结
本发明提供了粉螨科螨类线粒体全基因组扩增通用引物及扩增方法,本发明首次提供了一组用于扩增粉螨科螨类线粒体全基因组的通用引物,通过将线粒体基因组分为6个相互重叠的片段,进行普通PCR扩增、Sanger法测序和序列拼接,便可快速获取粉螨科螨类线粒体基因组全序列信息,对操作仪器和分析设备要求较低,容易实现,且单个个体的总DNA即可获得整个线粒体基因组全序列,避免多个个体基因组DNA的干扰,且在粉螨科6种粉螨线粒体基因组扩增中得到了验证。对获得更多的粉螨科螨类线粒体全序列,进一步推断粉螨科各属间的亲缘关系以及无气门股各科间的系统发育关系有重要意义,也为研究蜱螨亚纲的进化、系统发育关系等提供参考。

技术研发人员:孙恩涛,胡彩笑,叶长江,方瑜,丁岚,潘若兮,吴雪纯
受保护的技术使用者:皖南医学院
技术研发日:
技术公布日:2024/1/12
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