一种沪香F3香菇菌种及其液体菌种栽培方法

本发明涉及香菇菌种检测技术和栽培领域，尤其涉及一种沪香f3香菇菌种的ssr标记指纹图谱及其液体菌种栽培方法。

背景技术：

1、香菇(lentinula edodes)又名香信、花菇，素有“菇中皇后”之称，一直以来深受广大消费者的喜爱。香菇具有很高的营养价值，含有18种氨基酸及丰富的维生素d原，同时也是著名的药用菌，具有提高免疫力、抗肿瘤、抗病毒、降低胆固醇等功效。据统计，2021年香菇总产量为1295.72万吨，占全球香菇总产量的90％以上，总产值超过1000亿元，相关产业的从业人员超过1000万人，是我国生产区域最广、总产量最多、影响最大的食用菌产品。

2、随着香菇产业的快速发展，香菇生产方式也在逐步转型升级，很多香菇产区已从传统家庭小作坊式向集约化甚至工厂化生产的模式转变，因此对香菇品种、生产工艺、产量及品质提出了更高的要求。农户小作坊模式，大多使用808，9015和9608等传统香菇品种，接种后在大棚养菌，出菇需要温差、湿差及机械振动等多方面的刺激才能出菇。有些品种耐高温和抗逆性较差，随着夏季极端天气越来越频发，养菌过程中，污染率和坏棒率愈加严重，损失达到20％～30％，有时甚至高达50％，农户损失严重。而在集约化或工厂化生产中，接种后的菌棒置于环控库房养菌，温、光、水、气全程可控，进而菌棒质量好，产量高。但传统品种对co2的耐受性差，环控养菌co2浓度高，使菌棒缺氧造成菌丝发黄，不起瘤状物或瘤状物过多，出菇产量低，畸形多等问题。因此，选育菌龄短、耐受高co2浓度、抗逆性强的优良品种是促进产业发展的基础。

3、在生产工艺方面，菌种生产作为食用菌产业的首道工序，关系着产业成败，其重要性不言而喻。目前传统菇农和香菇生产企业仍以固体菌种逐级扩繁生产母种、原种和栽培种为主，而以上方法普遍存在制种周期长(90d以上)、用种量大、劳动强度高、工艺繁琐、污染率高、菌龄不一致等弊端。因此，固体菌种逐级扩繁的方式已不能满足规模化和工厂化香菇生产企业的需求。液体菌种具有制种快(20d～25d)、成本低、污染率低、接种效率高、发菌周期短、菌龄整齐一致等优点，特别适合食用菌规模化、工厂化生产，已成为食用菌制种产业的发展趋势。因此，选育高产、抗逆的优良香菇液体菌种，以便实现香菇集约化和工厂化生产是目前需要解决的技术难题。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供了沪香f3香菇菌种及其液体菌种栽培方法。

2、本发明的沪香f3香菇菌种保藏在中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no：m 2020323，lentinus edodes沪香f3，单位地址：中国武汉市武汉大学，保藏日期2020年7月16日。

3、本发明的沪香f3香菇菌种指纹图谱由7对ssr标记的特异等位片段组合而成，该dna扩增条带组合使沪香f3香菇菌种区别于其他香菇菌种。

4、沪香f3香菇菌种ssr标记扩增信息如下：

5、 引物名称 等位片段编号及分子量(bp) 扩增带型 le_fp0001 1：204；2：207；3：216；4：218 1 le_fp0002 1：127；2：132；3：135；4：139；5：141 1 le_fp0007 1：220；2：241；3：244；4：247 2，3 le_fp0008 1：207；2：209；3：219；4：221；5：232 1，2，3，4 le_fp0010 1：226；2：229；3：240；4：244；5：248 1，2 le_fp0011 1：260；2：262；3：271；4：273 1，2，3，4 le_fp0012 1：190；2：193；3：196 1

6、所述7对ssr标记具体为：

7、le_fp0001正向引物：acgcgtatcctcccctaagt；

8、反向引物：aagcgatatggatttgacgc；

9、le_fp0002正向引物：gggcgaaacaatttcaggta；

10、反向引物：atgccatcgtaaggaactcg；

11、le_fp0007正向引物：cattgctcggatccttcatt；

12、反向引物：tacctcgtgcggactttgat；

13、le_fp0008正向引物：ctctttgcaccctcaacctc；

14、反向引物：cagcagtctcctcttggctc；

15、le_fp0010正向引物：cgcattgagctccaaaaact；

16、反向引物：aggaggagaaggaggtcgag；

17、le_fp0011正向引物：ataggatgattgaacgagcag；

18、反向引物：accgtaaggtgggaagaaa；

19、le_fp00012正向引物：atgccgttccaaagatac；

20、反向引物：tctgtaacgcttgtggacta。

21、所述7对ssr标记等位片段的特异编号组合为：11(23)(1234)(12)(1234)1。

22、本发明还提供了所述沪香f3香菇菌种的液体栽培方法，包括以下步骤：

23、(1)母种生产：无菌条件下将沪香f3母种接种至灭菌后的培养基上，23℃～25℃，通风避光培养10d～14d得到母种；

24、(2)摇瓶液体菌种生产：将灭菌后的液体培养基装入摇瓶中，装液量为摇瓶总体积的50％～60％，冷却至25℃以下后，在无菌条件下将母种接种至液体培养基中，经磁力打碎后，在摇床或磁力搅拌器上避光培养得到摇瓶液体菌种。

25、(3)发酵罐液体菌种生产：将液体培养基过筛后加入发酵罐，装液量为发酵罐容积的70％～80％，加入液体培养基总体积0.03％～0.05％的消泡剂后灭菌，灭菌结束后将培养液温度降至23℃～26℃，在无菌条件下将摇瓶液体菌种接入发酵罐进行培养，得到液体菌种；

26、(4)菌棒生产：将各原料倒入搅拌机，加水至混合物含水量为50wt％～60wt％，充分搅拌后装袋灭菌，冷却至26℃以下待用；

27、(5)接种、培养与出菇：采用接种机进行接种，接种前先对菌棒进行打孔，打孔完成后接种步骤(3)得到的液体菌种，接种后套上外套袋，封口后移至培养库房进行菌棒培养，待菌丝长满后刺孔，培养80d～90d后对达到生理成熟的菌棒及时进行出菇管理；

28、在菌棒的培养过程中，菌丝长满前需避光培养，刺孔后进行光照培养，促进菌棒转色，出菇阶段加大通风和光照可提高香菇品质。

29、进一步的，所述母种培养基为pda培养基或cpda培养基。

30、进一步的，所述液体培养基由以下原料构成：糖蜜15g～20g，麦麸10g～20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁1g，水1000ml，所述液体培养基灭菌后的ph值为5.0～5.5。

31、进一步的，所述步骤(2)中的培养温度为23℃～26℃，培养时间为5d～7d，摇床转速为110r/min～170r/min，磁力搅拌器转速为400r/min～800r/min。

32、进一步的，所述步骤(3)中的培养温度为23℃～26℃，培养时间为6d～8d，培养过程中发酵罐罐压为0.03mpa～0.05mpa，通气比为0.2vvm～0.3vvm。

33、进一步的，所述步骤(3)中的接种量为液体培养基总体积的0.05％～0.5％。

34、进一步的，所述菌棒由以下重量百分数的原料构成：阔叶硬木屑79％，麦麸20％，石膏1％。

35、进一步的，所述菌棒的含水量为50wt％～60wt％，灭菌后ph值为5.5～5.8。

36、进一步的，所述步骤(4)中打孔数量为4～6个，孔径为1cm～2cm，打孔深度为5cm～9cm，每孔液体菌种的接种量为5ml～10ml。

37、进一步的，所述菌棒培养温度为21℃～23℃，co2浓度为0.3％～0.5％，菌棒中心温度≤26℃。

38、进一步的，所述步骤(5)中，每袋刺孔60～100个，孔深3.0cm～5.0cm。

39、进一步的，所述出菇管理过程中，需根据菌棒状态，通过喷水、注水或浸水等方式进行补水，补水量为菌棒补水前重量的30％～50％，保持菇房温度为16℃～20℃，散射光下4d～5d即可现蕾，菇蕾生长至1cm左右时，根据菇蕾形成情况和要求蕾数，进行疏蕾，疏蕾后，降温至10℃～14℃，蹲蕾2d～3d，蹲蕾结束后控制温度为14℃～18℃，加大通风和光照，在菌膜未开时及时采收，采收结束，进行养菌管理。

40、进一步的，所述养菌管理温度为20℃～25℃，养菌管理时间为2～3周，然后补水进行下一潮出菇管理，催蕾、疏蕾、蹲蕾、生长和采收管理均同上，最终可出4潮至6潮菇。

41、与现有技术相比，本发明的有益技术效果：

42、与普通香菇品种相比，本发明的沪香f3适合集约化和工厂化生产，在环控库房条件下养菌，耐高co2浓度，抗逆性强，转色均匀，小温差即可正常出菇；

43、本发明沪香f3菇蕾数量适中，菇形圆整，菇柄中短，菌肉紧实，色泽浅，产量高，出菇整齐、转潮快；

44、与传统固体菌种生产方式相比，本发明提供的沪香f3液体菌种生产方式的制种周期缩短70％以上，制种成本下降50％以上，菌棒培养时间缩短8％～10％且出菇时断棒少，烂棒少，菇蕾分布均匀，疏蕾费用节省70％，产量提高12％，“省工、省时、省钱”效果显著，适合进行集约化和工厂化生产。