党参多糖酸剪切片段CPP-1-1及其制备方法和应用

本发明涉及党参资源开发，尤其涉及党参多糖酸剪切片段cpp-1-1及其制备方法和应用。

背景技术：

1、党参codonopsispilosula为桔梗科多年生缠绕草本植物党参codonopsispilosula(franch.)nannf.、素花党参codonopsispilosula nannf.var.modesta(nannf.)l.t.shen、川党参codonopsis tangshen oliv.及其同属多种植物干燥的根，是一种药食同源的植物，含有蛋白质、有机脂质、各种维生素和矿物质等丰富的营养物质和多种有效成分。近年来，从党参根茎中分离和鉴定了多种类型的化合物，包括多糖、木脂素、聚炔和聚乙炔苷、生物碱、三萜类、木脂素类、黄酮类和内脂类等。其中，多糖是主要的活性成分，具有较高的药用价值。研究表明，党参多糖具有调节免疫功能、保护胃功能、保护神经系统、增强免疫力、改善学习和记忆障碍、抗氧化、抗病毒、抗癌、抗炎等作用。

2、人的肤色是由黑色素的含量和分布决定的。黑色素由基底层的黑素细胞产生，通过黑素细胞的树突状结构传递给基底细胞，再随细胞上行至表皮层。酪氨酸酶是一种活性中心含有cu2+的多功能氧化酶，同时也是这一过程中限速效应的关键。酪氨酸酶可通过两步催化使l-酪氨酸转化为多巴醌，这是使人皮肤变黑的主要原因。现代药理研究表明，党参总多糖对酪氨酸酶的活性有抑制作用。多糖分子中含有的羟基、羧基等其他极性基团与水分子形成氢键，需要结合空气中大量的水分，同时，多糖分子链之间相互交织，形成网状，加之与水的氢键结合，起到很强的保水作用。多糖还具有良好的成膜性能，可在皮肤表面形成一层薄膜，减少皮肤表面的水分蒸发，使得水分从基底组织弥散到角质层，诱导角质层进一步水化，保存皮肤自身的水分。因此，多糖的高度吸水性和良好的成膜性完美地结合，能为皮肤提供很好的保湿效果。研究表明党参多糖还具有较强清除体外和体内自由基，以及超氧负离子的活性，并且能够有效缓解衰老模型小鼠血清的超氧化物歧化酶(sod)和过氧化氢酶(cat)活性下降情况，党参多糖抗衰老与其清除自由基及抗脂质过氧化相关。但已报道的党参总多糖的分子量大，结构复杂，其美白、保湿、抗衰老功效成分不明确，影响党参植物的进一步开发和利用。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供党参多糖酸剪切片段cpp-1-1及其制备方法和应用，本发明提供的党参多糖酸剪切片段cpp-1-1的分子量低，结构简单，美白保湿抗衰老功效优异。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种党参多糖酸剪切片段cpp-1-1的制备方法，包括以下步骤：

4、将党参粗多糖溶解于水中，将所得党参粗多糖水溶液进行大孔吸附树脂纯化，得到纯化多糖；

5、将所述纯化多糖依次进行酸剪切、中和和水透析，得到党参多糖酸剪切片段混合物；

6、将所述党参多糖酸剪切片段混合物进行deae-52纤维素柱层析，得到党参多糖酸剪切片段cpp-1-1粗品；所述deae-52纤维素柱层析采用的洗脱剂依次为水和nacl溶液，所述nacl溶液的浓度为0.01～0.5mol/l；

7、将所述党参多糖酸剪切片段cpp-1-1粗品进行sephadex-g75柱层析，得到党参多糖酸剪切片段cpp-1-1；所述sephadex-g75柱层析采用的洗脱剂依次为水和nacl溶液，所述nacl溶液的浓度为0.1～0.5mol/l。

8、优选的，所述大孔吸附树脂包括大孔吸附树脂s-8、大孔吸附树脂ads-f8、大孔吸附树脂lsa-21、大孔吸附树脂lsa-10、大孔吸附树脂hp-20、大孔吸附树脂ads-17、大孔吸附树脂nka-9、大孔吸附树脂dm130、大孔吸附树脂ab-8、大孔吸附树脂x-5、大孔吸附树脂h103、大孔吸附树脂d101、大孔吸附树脂xad-8和大孔吸附树脂da201中的一种或几种。

9、优选的，所述大孔吸附树脂纯化的条件包括：党参粗多糖水溶液的上样浓度为0.5～2mg/ml，洗脱剂为水，所述洗脱剂的用量为1～3bv，所述洗脱剂的流速为0.5～2bv/h。

10、优选的，所述酸剪切用酸溶液的浓度为0.04～0.3mol/l。

11、优选的，所述酸剪切的温度为70～90℃，时间为1～3h，所述酸剪切在惰性气氛下进行。

12、优选的，所述透析后还包括将所得党参多糖酸剪切片段混合物溶液依次进行浓缩、醇沉和固液分离，将所得固体产物进行干燥，得到党参多糖酸剪切片段混合物。

13、优选的，所述党参粗多糖的制备方法包括以下步骤：将党参进行脱脂、水提取和低级醇醇沉，得到党参粗多糖。

14、优选的，所述低级醇醇沉时体系中低级醇的体积分数为55～85％；所述低级醇包括甲醇、乙醇和丙醇中的一种或几种。

15、本发明提供了上述技术方案所述制备方法制备得到党参多糖酸剪切片段cpp-1-1，组成包括半乳糖醛酸、葡萄糖和半乳糖，所述半乳糖醛酸、葡萄糖和半乳糖的摩尔比为45:0.65：0.26；所述党参多糖酸剪切片段cpp-1-1的峰值分子量mp为2000～5000da。

16、本发明提供了上述技术方案所述的党参多糖酸剪切片段cpp-1-1在化妆品或功能食品中的应用。

17、本发明提供了一种党参多糖酸剪切片段cpp-1-1的制备方法，包括以下步骤：将党参粗多糖溶解于水中，将所得党参粗多糖水溶液进行大孔吸附树脂纯化，得到纯化多糖；将所述纯化多糖依次进行酸剪切、中和和水透析，得到党参多糖酸剪切片段混合物；将所述党参多糖酸剪切片段混合物进行deae-52纤维素柱层析，得到党参多糖酸剪切片段cpp-1-1粗品；所述deae-52纤维素柱层析采用的洗脱剂依次为水和nacl溶液，所述nacl溶液的浓度为0.01～0.5mol/l；将所述党参多糖酸剪切片段cpp-1-1粗品进行sephadex-g75柱层析，得到党参多糖酸剪切片段cpp-1-1；所述sephadex-g75柱层析采用的洗脱剂依次为水和nacl溶液，所述nacl溶液的浓度为0.1～0.5mol/l。本发明通过对党参脱脂、水提取、低级醇醇沉和大孔吸附树脂纯化，将脂类、蛋白质类、色素等杂质，提高了多糖的纯度；通过对纯化多糖进行降解和分级纯化，制备得到的党参多糖酸剪切片段cpp-1-1结构相对简单、分子量小、水溶性好，对酪氨酸单酚酶和双酚酶具有较好的抑制作用，同时具有优异的保湿功效和抗氧化功效，能够有效地抑制黑色素的产生，避免皮肤缺水、暗沉、色斑等问题的产生，作为美白剂、保湿剂和抗氧化剂在化妆品和功能食品中具有很好的应用前景，解决了党参总多糖分子量大、结构复杂，美白保湿功效成分不明确，实际应用难等问题，为党参多糖的药理作用的研究作出了贡献。如实施例测试结果所示，本发明提供的党参多糖酸剪切片段cpp-1-1对酪氨酸酶抑制率呈剂量依赖性，对酪氨酸酶单酚酶和双酚酶的抑制率均大于党参粗多糖；党参多糖酸剪切片段cpp-1-1在空气湿度为43％的情况下，作用24h后的保湿百分比仍然在99.6％以上，保湿效果优于甘油，具有优异的保湿作用。