一株长双歧杆菌长亚种KS2及其在制备抗衰老食品药品中的应用的制作方法

本发明属于益生菌及其应用，具体涉及一株长双歧杆菌长亚种ks2及其在制备抗衰老食品药品中的应用。

背景技术：

1、长双歧杆菌长亚种(bifidobacterium longum subsp.longum)是长双歧杆菌的亚种，属于革兰氏阳性，厌氧的分支杆状细菌，自然存在于人类的胃肠道中，其中在成年人的肠道中最为丰富。

2、长双歧杆菌长亚种是一种可食用益生菌，具有很高的安全性。长双歧杆菌长亚种广泛地存在于人和动物的肠道并随粪便排出，是人体正常菌群的一部分，其作为肠道正常微生物体系的重要组成并终生伴随宿主，对于维持肠道微生态平衡有重要意义。同时，作为肠道菌群中的益生菌，也是一种可食用型的益生菌，长双歧杆菌长亚种可以增强人体的消化能力，并提高免疫力。近些年来，长双歧杆菌长亚种作为一种具有极大潜力的益生性乳杆菌已成为研究的热点，并且正在不断被用来制作成适用于人和动物的益生菌制剂。。

3、目前，长双歧杆菌长亚种的不同菌株已被报道具有不同的益生功能：(1)改善氧化应激：有研究表明，长双歧杆菌长亚种k5具有较强的抗氧化的能力。(2)降解胆固醇：有研究表明，长双歧杆菌长亚种bcbl-583菌株可以降低86.31±1.85％的胆固醇。(3)通过调控免疫系统改善疾病相关症状。有研究发现，在癌症治疗药物伊立替康诱导的肠粘膜炎小鼠模型中，口服给药1×109cfu/ml的长双歧杆菌长亚种51a能够降低肠道通透性，炎症和氧化损伤，增加粘膜炎小鼠肠液中分泌性免疫球蛋白a(iga)的产生，进而缓解伊立替康引起的肠道损伤；也有研究在2型糖尿病的小鼠模型中发现长双歧杆菌长亚种bl21可以通过调节葡萄糖相关代谢和调节肠道微生物群改善2型糖尿病。(4)有较强的抗过敏能力：有研究表明，口服给药长双歧杆菌长亚种51a可以降低血清中抗卵清蛋白的ige蛋白和肠液中的slga，也可以减少嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的募集，进而改善过敏的症状；此外，长双歧杆菌长亚种ccm7952和长双歧杆菌长亚种bb536也可以改善过敏反应。(5)具有抑制肥胖，改善肥胖造成的代谢疾病的功能：有研究表明，长双歧杆菌长亚种bl21可以显著改善高脂饮食诱导的体重增加，改善高脂饮食导致的肠道菌群紊乱，增加有抑制肥胖作用的阿克曼氏菌的丰度，同时还可以降低血清tc、tg和ldl-c水平，减轻附睾脂肪的积累和肝损伤；长双歧杆菌长亚种bcbl-583可以降低血液中的总胆固醇和ldl-胆固醇，且可以减少肥胖相关乳球菌的丰度，具有降低胆固醇和抗肥胖的作用；此外，长双歧杆菌长亚种olp-01联合运动训练可作为治疗肥胖症的一种策略。

4、长双歧杆菌长亚种的来源多样性导致其具有基因的多样性和功能的多样性。然而，目前针对长双歧杆菌长亚种的分离鉴定、益生特性和代谢机制的研究依然较少，这在一定程度上也影响了对长双歧杆菌长亚种的开发利用。因此，有必要根据长双歧杆菌长亚种的不同来源使其更好地发挥作用，如根据菌株的功能或者益生代谢产物确定其功效，明确其应用前景。综上所述，益生性长双歧杆菌长亚种的研究及应用具有较为广阔的发展空间。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的不足，本发明从一名健康成年人的粪便中分离出一株长双歧杆菌长亚种(bifidobacterium longum subsp.longum)ks2菌株，所述长双歧杆菌长亚种菌株ks2菌株具有的多种益生功效，主要包括产蛋白酶、产透明质酸和抑制α-葡萄糖苷酶活性等，具有重要的潜在应用价值。

2、为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现的：

3、本发明第一方面提供了一株长双歧杆菌长亚种(bifidobacterium longumsubsp.longum)ks2菌株，所述长双歧杆菌长亚种ks2菌株于2022年09月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：cctcc no:m 20221497；所述长双歧杆菌长亚种ks2菌株的16srdna全序列如seq id no：1所示。

4、本发明第二方面提供了第一方面所述的长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongumsubsp.longum)ks2菌株在产蛋白酶中的应用。

5、经研究发现，益生菌长双歧杆菌长亚种ks2菌株可产生蛋白酶，提示长双歧杆菌长亚种ks2菌株有望用于生产蛋白酶，并通过产蛋白酶的这一特性用于促进人体对食物中蛋白质的消化吸收，提高对小肽和氨基酸的吸收，抗过敏等领域。

6、本发明第三方面提供了第一方面所述的长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongum subsp.longum)ks2菌株在产透明质酸中的应用。

7、经研究发现，益生菌长双歧杆菌长亚种ks2菌株可产生透明质酸(ha)，提示长双歧杆菌长亚种ks2菌株有望用于生产ha，并通过产ha的这一特性用于抗炎，抗血管生成，抗衰老，促进伤口消炎及愈合等领域。

8、本发明第四方面提供了第一方面所述的长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongum subsp.longum)ks2菌株在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。

9、经研究发现，益生菌长双歧杆菌长亚种ks2菌株可有效抑制α-葡萄糖苷酶活性，而a-葡萄糖苷酶与2型糖尿病有关，抑制α-葡萄糖苷酶是控制餐后高血糖的方法之一，提示长双歧杆菌长亚种ks2菌株有望用于降血糖和抑制肥胖等领域。

10、本发明第五方面提供了第一方面所述的长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongum subsp.longum)ks2菌株在产γ-氨基丁酸中的应用。

11、经研究发现，益生菌长双歧杆菌长亚种ks2菌株可产生γ-氨基丁酸(gaba)，提示长双歧杆菌长亚种ks2菌株有望用于生产gaba，并通过产gaba的这一特性用于改善机体睡眠质量，抗抑郁，抗焦虑，降血压，改善脂质代谢，增强记忆能力，提高脑活力等领域。

12、本发明第六方面提供了一种用于具有益生功能的菌剂，所述菌剂包括第一方面所述的长双歧杆菌长亚种(bifidobacterium longum subsp.longum)ks2菌株。

13、优选地，所述长双歧杆菌长亚种(bifidobacterium longum subsp.longum)ks2菌株为经发酵后的菌体混合物。发酵所用的培养基为mrs培养基。

14、优选地，在医药应用领域，所述菌剂还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。

15、更优选地，上述赋形剂是指可用于药学领域的稀释剂、黏合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稳定剂等以及一些药用基质。上述载体是药物领域中可得到的功能性药用辅料，包括表面活性剂、助悬剂、乳化剂以及一些新型药用高分子材料，如环糊精、壳聚糖、聚乳酸(pla)、聚乙醇酸聚乳酸共聚物(plga)、透明质酸等。

16、优选地，在医药应用领域，所述菌剂的剂型包括注射剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、缓释剂、口服液制剂。

17、更优选地，上述剂型是指临床上常用的剂型。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可将其制备成肠衣片剂。

18、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

19、本发明从一名健康成年人的粪便中分离出一株长双歧杆菌长亚种(bifidobacterium longum subsp.longum)ks2菌株，所述长双歧杆菌长亚种菌株ks2菌株具有的多种益生功效，包括具有优越的蛋白酶活性，产生和分泌γ-氨基丁酸，产生和分泌透明质酸，抑制α-葡萄糖苷酶活性。因此，长双歧杆菌长亚种菌株ks2菌株具有促进对蛋白食物的消化吸收，改善蛋白过敏；抗抑郁和解酒；抗炎、抗衰和抗皱；降糖等多种功能。可见，本发明新分离得到的长双歧杆菌长亚种菌株ks2菌株具有多种益生功效，可用于抗衰老、助美白等领域，例如，制作成抗衰老食品药品，具有重要的应用价值和经济价值。