缺失Furin酶切位点的新冠病毒株及其应用

本发明涉及医药，具体涉及缺失furin酶切位点的新冠病毒株及其应用。

背景技术：

1、新型冠状病毒(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2，sars-cov-2)是一种具有包膜的单股正链rna病毒，属于β冠状病毒属。sars-cov-2具有高致病性和高传染性的特征。疫苗一直是控制传染病流行的最经济、最有效的手段，引起大众的广泛关注。

2、目前在研究的新冠病毒疫苗可以分为全病毒灭活苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗(含病毒样颗粒疫苗)、核酸疫苗(dna疫苗和rna疫苗)和病毒载体疫苗(非复制型病毒载体疫苗和复制型病毒载体疫苗)等几类。灭活疫苗一般能够诱导较高的抗体，可以快速研发成功，有效应对疫情。如今灭活疫苗已广泛应用，能够诱导较高抗体，且能够有效中和sars-cov-2病毒。灭活疫苗存在一个棘手问题就是生产安全管理问题，大规模培养sars-cov-2病毒给企业管理和安全生产带来重大挑战。因此，减毒灭活疫苗研发制备势在必行。

3、刺突蛋白(s)是sars-cov-2病毒颗粒表面的主要蛋白，以三聚体形式分散于病毒表面，形成皇冠状突起，由s1和s2亚基组成。在s1和s2亚基交界处(s1/s2)存在弗林蛋白酶(furin)酶切位点识别基序(prra)。s蛋白成熟前被furin样蛋白酶于furin酶切位点处识别并切割成s1和s2亚基，s1亚基灵活改变构象，高效地结合宿主受体。furin酶切位点在sars-cov-2生命周期具有重要的生物学作用。研究显示，furin酶切位点缺失可提高sars-cov-2在vero细胞病毒滴度，johnsonba等表明furin酶切位点的缺失加速sars-cov-2在vero细胞中复制。更重要的是，furin酶切位点缺失可降低sars-cov-2致病力。bryana等利用反向遗传系统构建furin位点缺失毒株δprra，感染黄金仓鼠和k18-hace2转基因小鼠，肺脏等呼吸系统组织病毒载量降低，病症减轻。thomasp.peacock等研究表明furin酶切位点缺失毒株δcs感染雪貂，感染雪貂呼吸系统排毒量较野生毒株感染动物明显减少。

4、新冠病毒的研究在不断的深入，目前公认的新冠病毒的保护性抗原是新冠病毒的s蛋白，为了进一步提升疫苗的保护能力，有针对s蛋白的免疫原性进行改造，如信号肽的替换、稳定s蛋白的构象、部分表达免疫原性强的功能结构域等，这些研究主要集中在以s蛋白为目标的重组蛋白疫苗的免疫性的研究。

5、灭活疫苗是以整个灭活的病毒株为抗原，对灭活病毒株的免疫原性鲜有人进行比较筛选。本发明以灭活新冠病毒株为研究对象，筛选s蛋白furin酶切位点缺失突变毒株，意外发现对灭活的新冠病毒株因furin缺失不仅能提高其产量、减弱传播能力、降低对环境的稳定性，而且其免疫原性也显著提高，这一结果对于新冠灭活疫苗的改进具有重要意义。

6、在这一发现的基础上完成了本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种滴度高，安全性好，免疫原性佳的furin酶切位点缺失的新冠病毒株。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

3、第一方面，本发明提供一种新冠病毒的突变毒株，所述的新冠病毒突变毒株为缺失furin酶切位点的突变毒株。

4、进一步的，所述新冠病毒的突变毒株是通过缺失新冠病毒中s蛋白弗林蛋白酶(furin)酶切位点的识别基序(prra)获得的突变株。

5、进一步的，所述新冠病毒包括但不限于sars-cov原始毒株、阿尔法(alpha)变异株、贝塔(beta)变异株、德尔塔(delta)变异株、奥密克戎(omicron)变异株等。

6、进一步的，所述新冠病毒优选sars-cov-2。

7、进一步的，所述突变株毒株包括灭活毒株、减毒毒株和/或亚单位毒株。

8、进一步的，所述新冠病毒优选sars-cov-2，其缺失furin酶切位点的突变毒株为新型冠状病毒减毒疫苗株sars-cov-2-s△fcs，保藏日期：2022.3.22，保藏编号：cctccno:v202220，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心。

9、第二方面，本发明提供如第一方面所述的新冠病毒的突变毒株的用途。

10、进一步的，所述用途优选furin酶切位点缺失的新冠病毒株的突变株在制备药物制剂中的用途。

11、进一步的，所述新冠病毒的突变株是通过缺失新冠病毒中s蛋白弗林蛋白酶(furin)酶切位点的识别基序(prra)获得的突变株。

12、进一步的，所述新冠病毒包括但不限于sars-cov原始毒株、阿尔法(alpha)变异株、贝塔(beta)变异株、德尔塔(delta)变异株、奥密克戎(omicron)变异株等。

13、进一步的，所述药物制剂优选疫苗。

14、进一步的，所述疫苗可选自灭活毒株、减毒毒株和/或亚单位毒株疫苗。

15、进一步的，所述药物制剂包括药途径选自：经口给药、舌下给药、胃或肠给药、局部给药、注射给药、静脉注射、皮下注射、肌肉注射、经皮给药、和/或吸入给药等。

16、进一步的，所述药物制剂可用于新冠病毒的感染者，包括人和动物；

17、进一步的，所述动物选自蝙蝠、鼬科、犬科、猫科、鹿科动物及家禽家畜、鼠类等。

18、第三方面，本发明提供第一方面所述的新冠病毒的突变毒株在制备新冠病毒灭活疫苗中的用途。

19、进一步的，所述新冠病毒的突变毒株是通过缺失新冠病毒中s蛋白弗林蛋白酶(furin)酶切位点的识别基序(prra)获得的突变株。

20、进一步的，所述新冠病毒包括但不限于sars-cov原始毒株、阿尔法(alpha)变异株、贝塔(beta)变异株、德尔塔(delta)变异株、奥密克戎(omicron)变异株等。

21、进一步的，所述新冠病毒优选sars-cov-2。

22、进一步的，所述突变株毒株优选新型冠状病毒减毒株sars-cov-2-s△fcs，保藏日期：2022.3.22，保藏编号：cctccno:v202220，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心。

23、第四方面，提供一种含有如第一方面所述的新冠病毒的突变毒株的新冠病毒灭活疫苗。

24、进一步的，所述新冠病毒灭活疫苗含有新型冠状病毒减毒株sars-cov-2-s△fcs的核酸或蛋白质的疫苗；

25、进一步的，所述的疫苗用于病毒的感染者，包括人和动物；

26、所述动物是指蝙蝠、鼬科、犬科、猫科、鹿科动物及家禽家畜、鼠类等。

27、第五方面，本发明还提供一种含有如第一方面所述的新冠病毒的突变毒株的组合物。

28、进一步的，所述新冠病毒包括但不限于sars-cov原始毒株、阿尔法(alpha)变异株、贝塔(beta)变异株、德尔塔(delta)变异株、奥密克戎(omicron)变异株等。

29、进一步的，所述组合物是含有缺失furin酶切位点的新冠病毒株或突变毒株sars-cov-2-sδfcs的组合物。

30、进一步的，所述的组合物还包括药学上可接受的载体。

31、第六方面，本发明还提供第五方面所述的组合物在在制备药物制剂中的用途。

32、进一步的，所述新冠病毒包括但不限于sars-cov原始毒株、阿尔法(alpha)变异株、贝塔(beta)变异株、德尔塔(delta)变异株、奥密克戎(omicron)变异株等。

33、进一步的，所述药物制剂优选疫苗。

34、进一步的，所述药物制剂包括药途径选自：经口给药、舌下给药、胃或肠给药、局部给药、注射给药、静脉注射、皮下注射、肌肉注射、经皮给药、和/或吸入给药等。

35、进一步的，所述药物制剂可用于新冠病毒的感染者，包括人和动物；

36、进一步的，所述动物选自蝙蝠、鼬科、犬科、猫科、鹿科动物及家禽家畜、鼠类等。

37、有益效果

38、本发明提供的缺失furin酶切位点的灭活毒株，其免疫原性高于未缺失的灭活毒株；突变株sars-cov-2-sδfcs在vero细胞生长滴度高，rna病毒载量降低；免疫原性稳定，效果佳，是更为理想的减毒灭活疫苗候选毒株。因此，筛选s蛋白furin酶切位点缺失突变毒株，不仅能提高其产量，能满足大规模生产需求；致病性降低，安全性好，方便安全生产管理；减弱传播能力、降低对环境的稳定性，而且其免疫原性也显著提高，这一结果对于新冠灭活疫苗的改进具有重要意义。