一株蜡样芽胞杆菌BCE01及其在防治生鱼诺卡氏菌病和促生长中的应用的制作方法

本发明涉及微生物，特别涉及一株蜡样芽胞杆菌bce01及其在防治生鱼诺卡氏菌病和促生长中的应用。

背景技术：

1、生鱼，是辐鳍鱼纲、鲈形目、鳢科、鳢属鱼的统称，一般为乌鳢(channa argus)与斑鳢(channa maculata)人工杂交而成的杂交鳢，因具有生长快和抗病力强双重优势，已成为生鱼高密度养殖放养比例最高的品种之一。生鱼是鳢科鱼类中个体大、生长快、产量和经济价值较高的名贵经济鱼类，其营养丰富、肉质细嫩，有"鱼中珍品"之称，广东省是其主产区。然而，制约生鱼高密度养殖盈利的关键因素中，病害及其造成的损失排在第1位。其中危害最为严重的是以内脏"白点"为临床症状的诺卡氏菌病。

2、诺卡菌属(nocardia spp.)是一种丝状的革兰氏阳性细菌，在自然界中发现作为土壤腐生菌，然而它们也是条件致病菌，诺卡菌属细菌中的某些种类对鱼类具有致病性。在自然感染的情况下诺卡氏菌可从鱼消化道、损伤部位或鳃部位进入其体内，而人工感染如腹腔注射、口灌和浸泡诺卡氏菌同样能使健康鱼致病。近年来，诺卡氏菌病对我国各省市水产养殖业影响很大，先后在大口鲈、七星鲈、斑鳢、大黄鱼、生鱼等养殖鱼类中暴发该病，造成了巨大的经济损失。

3、目前，鱼类诺卡氏菌病防治研究的主要方向有抗生素、疫苗和中草药等。抗生素滥用所导致的种种弊端已逐步显现，其所引起的内源性感染、环境污染、药物残留、抗药性及扩散等一系列负面效应给动物和人类健康带来巨大的威胁。疫苗防治鱼类诺卡氏菌病有广阔前景，尽管有一些灭活疫苗或弱毒疫苗已问世，但仍然处于实验室阶段，尚无针对鱼类诺卡氏菌病的商业疫苗，疗效还需时间检验，且其研究周期往往也相对较长。中草药对于治疗鱼类诺卡氏菌病有着巨大优势，但目前关于中草药防治鱼类诺卡氏菌病的研究较少，需要进一步研究。近年来，鱼类病害的防治已由化学防治逐渐向生物防治转变，其中以拮抗微生物或其代谢产物为核心的生物防治技术因其靶向性强、可选择范围广、对人畜安全无害、对环境无污染、不耐药等特点而备受学者们关注。生防微生物的应用成为防治动物的重要手段之一，利用拮抗菌防治鱼类病害已有相关报道，但目前关于生鱼诺卡氏菌病生防细菌相关研究几乎空白。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本发明提供了一株蜡样芽胞杆菌bce01及其在防治生鱼诺卡氏菌病和促生长中的应用。本发明中成功筛选分离得到了一株对生鱼诺卡氏菌病原具有明显拮抗效果的蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)bce01，并发现该蜡样芽孢杆菌还具有促进生鱼生长发育的效果，可以有效用于生鱼诺卡氏菌的感染防控，从而降低诺卡氏菌感染带来的损失，提高渔业养殖业的稳定性和市场可发展性。

2、本发明的第一个方面，提供蜡样芽胞杆菌，所述蜡样芽胞杆菌为蜡样芽胞杆菌bce01，分类学命名为bacillus cereus，于2023年3月3日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：gdmcc no.63217。

3、在本发明的一些实施方式中，所述蜡样芽胞杆菌的16s rrna如seq id no：3所示。

4、在本发明的一些实施方式中，所述蜡样芽胞杆菌分离自鱼肠道。

5、在本发明的一些实施方式中，所述蜡样芽胞杆菌在营养琼脂上的生长特征为白色、湿润、不透明、不规则菌落。

6、本发明的第二个方面，提供一种培养物，所述培养物由本发明第一个方面所述的蜡样芽胞杆菌在发酵底物中发酵得到。

7、在本发明的一些实施方式中，所述发酵底物为发酵培养基。

8、在本发明的一些实施方式中，所述发酵培养基为：按照每l发酵培养基计，含有胰蛋白胨17.0g、大豆蛋白胨3.0g、氯化钠5.0g、磷酸氢二钾2.5g、葡萄糖2.5g(ph值7.3±0.2)。

9、在本发明中，术语“培养物”是指在一定时间一定空间内微生物的细胞群或生长物。如微生物的斜面培养物、摇瓶培养物等。在本发明中，所述培养物包括但不限于：蜡样芽胞杆菌bce01接种或移植于任意形态(液体或固体)的培养物培养物中所得到的含菌溶液或培养物。

10、本发明的第三个方面，提供一种菌剂，所述菌剂中含有本发明第一个方面所述的蜡样芽胞杆菌和/或其培养物。

11、在本发明的一些实施方式中，所述菌剂中还含有辅料。

12、在本发明的一些实施方式中，所述辅料包括但不限于保护剂、抗氧化剂、微量元素、氮源物质、碳源物质、载体、溶剂、表面活性剂。

13、本发明的第四个方面，提供本发明第一个方面所述的蜡样芽胞杆菌在制备饲料添加剂中的应用。

14、在本发明的一些实施方式中，所述蜡样芽胞杆菌的添加量为饲料总重的0.01％～0.05％。

15、在本发明的一些实施方式中，所述蜡样芽胞杆菌的添加量为饲料总重的0.02％。

16、本发明的第五个方面，提供本发明第一个方面所述的蜡样芽胞杆菌在促进水产生长发育中的应用。

17、在本发明的一些实施方式中，所述水产为鱼。

18、在本发明的一些实施方式中，所述鱼包括生鱼。

19、在本发明中，通过体内试验验证发现本发明中分离得到的蜡样芽胞杆菌bce01能够显著促进生鱼的生长性能及肠道消化酶活性，从而促进生鱼的生长发育。

20、在本发明的一些实施方式中，所述蜡样芽胞杆菌和饲料混合后使用。

21、在本发明的一些实施方式中，所述蜡样芽胞杆菌的添加量为饲料总重的0.01％～0.05％。

22、在本发明的一些实施方式中，所述蜡样芽胞杆菌的添加量为饲料总重的0.02％。

23、本发明的第五个方面，提供本发明第一个方面所述的蜡样芽胞杆菌在制备预防和/或治疗水产诺卡氏菌感染的药物中的应用。

24、在本发明的一些实施方式中，所述水产为鱼。

25、在本发明的一些实施方式中，所述鱼包括生鱼。

26、在本发明中，通过体内试验验证发现本发明中分离得到的蜡样芽胞杆菌bce01能够延缓诺卡氏菌感染导致的鱼体死亡，为进一步控制诺卡氏菌感染的扩散以及诺卡氏菌病的治疗争取到了更多的宝贵时间。此外，其还极大的降低了诺卡氏菌感染导致的死亡率，产生了显著的治疗效果。

27、在本发明的一些实施方式中，所述药物的剂型包括但不限于粉型、水剂、颗粒剂、片剂、微囊剂、注射剂。当然，本领域技术人员也可以现有工艺制备其他剂型的产品，以便于其在特定环境下的使用，维持其治疗和预防效果。

28、在本发明的一些实施方式中，所述药物中的蜡样芽胞杆菌bce01有效含量为108～109cfu/ml。

29、本发明的有益效果是：

30、1.本发明成功筛选分离得到了一株蜡样芽孢杆菌，该蜡样芽孢杆菌具有对诺卡氏菌显著的拮抗效果，可用于抑制诺卡氏菌的生长，具有极为广泛的应用性。

31、2.本发明中的蜡样芽孢杆菌bce01在兼具抑制诺卡氏菌、预防或治疗鱼类诺卡氏菌感染的效果的同时，还能够有效促进鱼类的生长发育，对于渔业养殖具有极为重要的意义。