1.一种根癌农杆菌介导的老芒麦遗传转化方法,其特征在于,所述方法具体包括获得老芒麦组培无菌愈伤组织、转化农杆菌感受态、活化根癌农杆菌、侵染老芒麦愈伤组织及共培养、植物转化材料的愈伤组织筛选培养、分化筛选培养和生根培养;
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述获得老芒麦组培无菌愈伤组织:以老芒麦的幼穗为外植体,在诱导培养基上进行愈伤组织的诱导,外植体长出愈伤组织后,将愈伤组织在无菌的环境中转移到含相应植物激素组合的新鲜的继代培养基上,继代一次,将愈伤组织继代到分化培养基上。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述继代培养的环境条件:温度为27℃,光周期为24h黑暗。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的诱导培养基是在ms基础培养基中添加5mg·l-12,4-d、30g·l-1蔗糖和7.8g·l-1琼脂,调节ph5.8。
5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的继代培养基是在ms基础培养基中添加1.5mg·l-12,4-d、30g·l-1蔗糖和7.8g·l-1琼脂,调节ph5.8。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的分化培养基是在ms基础培养基中添加60g·l-1蔗糖、7.8g·l-1琼脂、3mg·l-16-ba和潮霉素5mg·l-1,调节ph5.8。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的转化根癌农杆菌感受态:冰上融化根癌农杆菌eha105感受态细胞,冰上融化后,加入3ul的潮霉素质粒dna,冰上静置30分钟,液氮中冷冻1分钟;然后37℃水浴3min加入950μl无抗生素的yep培养基,28℃,200rpm,振荡培养3小时;离心浓缩菌液,用100μlyep培养基回溶菌体,后将回溶后的菌体涂于加50mg·l-1卡那霉素的固体yep培养基上,28℃下培养,长出单克隆后,用pcr鉴定潮霉素b抗性基因,保存阳性根癌农杆菌落。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的活化根癌农杆菌:将阳性根癌农杆在培养基中培养至od600值等于0.3-0.4,作为转化老芒麦愈伤组织的侵染液。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述侵染老芒麦愈伤组织并共培养:选择继代培养基上生长状况良好、致密有颗粒感的愈伤组织,作为根癌农杆菌侵染的外植体;把愈伤组织放到根癌农杆菌侵染液中,抽真空10min,超声5min,抽真空10min;倒去上层菌液,将侵染后的愈伤组织捞出放滤纸上吹干以除去过多的附着根癌农杆菌,期间需不断翻愈伤组织至干燥;然后将侵染后的愈伤组织在滤纸上共培养4天。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的植物转化材料的愈伤组织筛选培养:经侵染的植物组织材料与根癌农杆菌共培养4天之后,取出愈伤组织在无菌条件下转到筛选培养基上,暗培养筛选3-6周,每14-21天继代一次以保持抗生素筛选压力的稳定;