Tau重组抗原、靶向Tau蛋白重组抗体与检测Tau蛋白的试剂盒的制作方法

本技术属于免疫分析，涉及一种靶向tau蛋白的重组抗体、编码所述重组抗体的核酸分子、tau蛋白重组抗原、编码重组抗原的核酸分子、检测tau蛋白的试剂盒及其用途。

背景技术：

1、阿尔兹海默病(alzheimer’s disease，ad)是一种与年龄相关的最常见神经系统退行性疾病。

2、阿尔茨海默病(ad)以神经元死亡为特征，通常与淀粉样斑块和神经原纤维缠结(nft)的出现有关，而后者是超磷酸化微管相关蛋白tau的丝状缠结。在正常生理条件下tau蛋白促进微管组装和稳定性，也作为轴突微管和神经质膜成分的连接蛋白发挥作用。tau缺陷修饰特别是磷酸化修饰，被认为会导致tau失去微管结合功能，诱导其聚集而形成tau的丝状缠结，并可能最终导致ad的产生。

3、目前研究结果证实使用脑脊液总tau作为ad生物标志物时能够有效提高正确诊断患者的百分比。相比较pet-ct等影像学手段，该生物标志物组合的检测将有助于ad的早期发现以及治疗效果的动态追踪。

4、然而，目前现有的tau抗体制备技术的缺点主要有以下两点：

5、(1)抗体灵敏度不足

6、现有技术中，肖健等的tau鼠源单克隆抗体的亲和力仅为280nm(western blot测定)，m·诺瓦克等发明的tau人源化抗体亲和力仅为10nm(biacore测定)，保罗·h·魏因雷布等发明的tau重组抗体亲和力为2.4～6.6nm(elisa测定)。其他相似发明的数据显示其tau抗体灵敏度均为0.1～1000nm级。抗体灵敏度不足将直接影响检测试剂的灵敏度，同时降低检测的特异性和抗干扰性，并最终影响检测结果的可靠性。

7、(2)传统单克隆制备工艺先天不足

8、体外诊断试剂在研发及生产过程中，需保证产品的批间重复性可控。作为核心原料之一的抗体，其批间性能差异将会直接体现在试剂盒的批间重复性上。鼠单抗制备过程中，抗体效价易受到动物个体化差异影响。同时小鼠腹水的体积普遍少于5ml。虽然采用这种方式获得的单克隆抗体可能有着更强的亲和力，但是想通过传统单克隆抗体制备工艺制备大批量批间性能稳定的抗体是有一定困难的。

技术实现思路

1、基于上述描述，当前总tau检测系统还有很多不足。因此ad的早期发现以及治疗效果的动态追踪受到了限制。为了克服现有技术中存在的不足，本技术提供一种靶向tau蛋白的重组抗体，用于获得该重组抗体的重组抗原，以及编码所述重组抗原的核酸分子，本技术的重组抗体灵敏度更高、生产周期明显缩短，并且本技术的编码所述重组抗原的核酸分子能够显著提高本技术重组抗体的表达量。

2、本技术的具体技术方案如下：

3、1.一种靶向tau蛋白的重组抗体，其中，所述重组抗体包含三个重链互补决定区(cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3)和三个轻链互补决定区(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3)，其中：

4、cdr-h1的氨基酸序列如seq id no:1或seq id no:2所示；

5、cdr-h2的氨基酸序列如seq id no:3或seq id no:4所示；

6、cdr-h3的氨基酸序列如seq id no:5或seq id no:6所示；

7、cdr-l1的氨基酸序列如seq id no:7或seq id no:8所示；

8、cdr-l2的氨基酸序列如seq id no:9或seq id no:10所示；

9、cdr-l3的氨基酸序列如seq id no:11或seq id no:12所示。

10、2.根据项1所述的重组抗体，其中，

11、所述cdr-h1的氨基酸序列如seq id no:1所示；

12、所述cdr-h2的氨基酸序列如seq id no:3所示；

13、所述cdr-h3的氨基酸序列如seq id no:5所示；

14、所述cdr-l1的氨基酸序列如seq id no:7所示，

15、所述cdr-l2的氨基酸序列如seq id no:9所示；

16、所述cdr-l3的氨基酸序列如seq id no:11所示。

17、3.根据项1所述的重组抗体，其中，

18、所述cdr-h1的氨基酸序列如seq id no:2所示；

19、所述cdr-h2的氨基酸序列如seq id no:4所示；

20、所述cdr-h3的氨基酸序列如seq id no:6所示；

21、所述cdr-l1的氨基酸序列如seq id no:8所示；

22、所述cdr-l2的氨基酸序列如seq id no:10所示；

23、所述cdr-l3的氨基酸序列如seq id no:12所示。

24、4.根据项1～3中任一项所述的重组抗体，其中，所述重组抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：

25、所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:13或seq id no:14所示，或为与seqid no:13或seq id no:14具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

26、所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:15或seq id no:16所示，或为与seqid no:15或seq id no:16具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列。

27、5.根据项4所述的重组抗体，其中，

28、所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:13所示，或为与seq id no:13具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

29、所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:15所示，或为与seq id no:15具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列。

30、6.根据项4所述的重组抗体，其中，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:14所示，或为与seq id no:14具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

31、所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:16所示，或为与seq id no:16具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列。

32、7.一种编码如项1～6中任一项所述的重组抗体的核酸分子。

33、8.一种tau蛋白重组抗原，其中，所述重组抗原的氨基酸序列如seq id no:17所示。

34、9.一种编码如项8所述的tau蛋白重组抗原的核酸分子，其中，所述核酸分子的核苷酸序列如seq id no:18所示。

35、10.如项8所述的tau蛋白重组抗原或者如项9所述的核酸分子在获得如项1～6中任一项所述的重组抗体中的用途。

36、11.一种检测tau蛋白的试剂盒，其中，所述试剂盒包括：

37、靶向tau蛋白的第一抗体包被的磁珠；和

38、经化学发光剂标记的靶向tau蛋白的第二抗体；

39、其中，靶向tau蛋白的第一抗体和第二抗体为项1～6中任一项所述的重组抗体。

40、12.根据项11所述的试剂盒，其中，其用于诊断阿尔兹海默症。

41、13.如项1～6中任一项所述的重组抗体，或者项7所述的核酸分子在制备用于诊断阿尔兹海默症的试剂盒中的用途。

42、发明的效果

43、本技术提供了一种新的靶向tau蛋白的重组抗体、编码用于获得所述抗体的重组抗原的核酸分子以及包含所述重组抗体的试剂盒，本技术的编码所述重组抗原的核酸分子能够显著提高本技术重组抗体的表达量，使用本技术的重组抗原作为免疫原获得的本技术的总tau重组抗体性能优异且稳定、亲和力高、灵敏度高，同时，本技术总tau重组抗体生产周期明显缩短，更适合作为核心原料应用于体外诊断试剂领域，可带来显著的社会效益与经济效益。