一种SDHB突变的BHK21细胞的培养基及其应用的制作方法

本发明涉及生物，更具体的，本技术涉及细胞培养和疫苗领域，本发明涉及制备病毒疫苗的方法、培养用于制备疫苗的bhk21细胞的方法和培养基。

背景技术：

1、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus，prrsv)能引起猪的一种高度接触性传染疾病，又称“猪蓝耳病”。临床症状主要包括以流产、早产、死胎、木乃伊胎为特征的妊娠晚期母猪繁殖障碍，及所有年龄段猪群的急性呼吸困难。prrsv给养猪业造成巨大危害的主要原因是缺少高效的prrsv疫苗，而制备高效疫苗的基本条件是获得高滴度的病毒。

2、bhk21细胞可以用于生产prrsv疫苗，但存在培养病毒滴度较低的缺陷。因此，目前关于采用bhk21细胞扩增prrsv病毒的手段仍有待改进。

技术实现思路

1、本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效地扩增prrsv病毒的手段。

2、在本发明的第一方面，本发明提出了一种用于培养bhk21细胞的培养基。根据本发明的实施例，所述培养基是在mem基础培养基中额外添加下列成分：l-丙氨酸、l-盐酸精氨酸、l-天门冬氨酸、l-门冬酰胺、l-半胱氨酸盐酸盐一水、l-胱氨酸二盐酸盐、l-谷氨酸、l-谷氨酰胺、甘氨酸、l-盐酸组氨酸一水、l-羟脯氨酸、l-异亮氨酸、l-亮氨酸、l-盐酸赖氨酸、l-甲硫氨酸、l-苯丙氨酸、l-脯氨酸、l-丝氨酸、l-苏氨酸、l-色氨酸、l-缬氨酸、丙酮酸钠、f68、hepes、d-无水葡萄糖、四水硝酸钙、无水磷酸氢二钠、还原型谷胱甘肽、七水硫酸亚铁、七水硫酸锌、维生素c、d-泛酸钙、叶酸、肌醇、烟酰胺、维生素b6、维生素b1、维生素b12、大豆水解物、酵母水解物、l-酪氨酸二钠盐无水、五水硫酸铜、六水氯化镁、d-生物素、氯化胆碱、次黄嘌呤、亚油酸、硫辛酸、1，4-丁二胺二盐酸盐、维生素b2、胸苷、对氨基苯甲酸、柠檬酸铁、亚硒酸钠、重组人胰岛素、钼酸铵、二水氯化铜、氯化锂、氯化铝、九水偏硅酸钠、维生素e醋酸酯、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸和吐温80。

3、根据本发明的实施例，上述用于培养bhk21细胞的培养基还可以进一步包括下列附加技术特征中的至少之一：

4、根据本发明的实施例，所述bhk21细胞表达突变后的sdhb蛋白，所述突变后的sdhb蛋白具有seq id no:1所示的氨基酸序列：

5、maaavgvsarrcfpatalgrvgaqacrgaqtaaaaaprikkfaiyawdpdktgdkpamqtyevdlnkcgpmvldalikiknevdstltfrrscregicgscamninggntlactrridtdlnkvskiyplphmyvikdlvpdlsnfyaqyksiepylkkkdesqegkqqylqsiedrekldglyecilcaccstscpsywwngdkylgpavlmqayrwmidsrddfteerlaklqdpfslyrchtimnctrtcpkglnpgkaiaeikkmmatykekrala(seq id no:1)。

6、根据本发明的实施例，所述培养基是在mem基础培养基中额外添加下列成分，并使得额外添加的下列成分在所述培养基中具有以下终浓度：

7、终浓度为68.67mg/l的l-丙氨酸，

8、终浓度为91.91mg/l的l-盐酸精氨酸，

9、终浓度为7.11mg/l的l-天门冬氨酸，

10、终浓度为31.20mg/l的l-门冬酰胺，

11、终浓度为5.38mg/l的l-半胱氨酸盐酸盐一水，

12、终浓度为40.68mg/l的l-胱氨酸二盐酸盐，

13、终浓度为49.60mg/l的l-谷氨酸，

14、终浓度为247.47mg/l的l-谷氨酰胺，

15、终浓度为20.30mg/l的甘氨酸，

16、终浓度为20.22mg/l的l-盐酸组氨酸一水，

17、终浓度为2.98mg/l的l-羟脯氨酸，

18、终浓度为41.78mg/l的l-异亮氨酸，

19、终浓度为29.33mg/l的l-亮氨酸，

20、终浓度为45.11mg/l的l-盐酸赖氨酸，

21、终浓度为16.22mg/l的l-甲硫氨酸，

22、终浓度为18.89mg/l的l-苯丙氨酸，

23、终浓度为24.76mg/l的l-脯氨酸，

24、终浓度为44.98mg/l的l-丝氨酸，

25、终浓度为29.91mg/l的l-苏氨酸，终浓度为11.38mg/l的l-色氨酸，终浓度为28.62mg/l的l-缬氨酸，终浓度为46.58mg/l的丙酮酸钠，终浓度为1000mg/l的f68，

26、终浓度为3000mg/l的hepes，

27、终浓度为3000mg/l的d-无水葡萄糖，终浓度为31.8mg/l的四水硝酸钙，终浓度为300mg/l的无水磷酸氢二钠，终浓度为0.1～0.2mg/l的还原型谷胱甘肽，终浓度为0.1～0.2mg/l的七水硫酸亚铁，终浓度为0.1～0.2mg/l的七水硫酸锌，终浓度为0.844mg/l的维生素c，终浓度为0.711mg/l的d-泛酸钙，终浓度为0.933mg/l的叶酸，

28、终浓度为8.667mg/l的肌醇，

29、终浓度为0.756mg/l的烟酰胺，

30、终浓度为0.733mg/l的维生素b6，终浓度为0.756mg/l的维生素b1，终浓度为1.729mg/l的维生素b12，终浓度为4000mg/l的大豆水解物，终浓度为4000mg/l的酵母水解物，终浓度为23.556mg/l的l-酪氨酸二钠盐无水，终浓度为0.0001～0.002mg/l的五水硫酸铜，终浓度为15.648mg/l的六水氯化镁，终浓度为0.044mg/l的d-生物素，终浓度为10.222mg/l的氯化胆碱，终浓度为0.724mg/l的次黄嘌呤，终浓度为0.01～0.04mg/l的亚油酸，

31、终浓度为0.069mg/l的硫辛酸，

32、终浓度为0.244mg/l的1，4-丁二胺二盐酸盐，

33、终浓度为0.152mg/l的维生素b2，

34、终浓度为0.127mg/l的胸苷，

35、终浓度为0.151mg/l的对氨基苯甲酸，

36、终浓度为6.796mg/l的柠檬酸铁，

37、终浓度为0.002～0.004mg/l的亚硒酸钠，

38、终浓度为0.998mg/l的重组人胰岛素，

39、终浓度为0.0001～0.002mg/l的钼酸铵，

40、终浓度为0.0001～0.002mg/l的二水氯化铜，

41、终浓度为0.001～0.003mg/l的氯化锂，

42、终浓度为0.020mg/l的氯化铝，

43、终浓度为0.073mg/l的九水偏硅酸钠，

44、终浓度为0.001～0.002mg/l的维生素e醋酸酯，

45、终浓度为0.001～0.003mg/l的肉豆蔻酸，

46、终浓度为0.001～0.003mg/l的油酸，

47、终浓度为0.001～0.003mg/l的棕榈酸，

48、终浓度为0.001～0.004mg/l的硬脂酸，和

49、终浓度为0.490mg/l的吐温80。

50、由此，可以有效提高采用优化后的mem培养基培养bhk21细胞的效率，提高猪繁殖与呼吸综合征病毒在bhk21细胞中的复制效率，将有助于提高猪繁殖与呼吸综合征疫苗的产量或质量。

51、根据本发明的实施例，所述培养基是在mem基础培养基中额外添加下列成分，并使得额外添加的下列成分在所述培养基中具有以下终浓度：

52、终浓度为68.67mg/l的l-丙氨酸，

53、终浓度为91.91mg/l的l-盐酸精氨酸，

54、终浓度为7.11mg/l的l-天门冬氨酸，

55、终浓度为31.20mg/l的l-门冬酰胺，

56、终浓度为5.38mg/l的l-半胱氨酸盐酸盐一水，

57、终浓度为40.68mg/l的l-胱氨酸二盐酸盐，终浓度为49.60mg/l的l-谷氨酸，终浓度为247.47mg/l的l-谷氨酰胺，终浓度为20.30mg/l的甘氨酸，终浓度为20.22mg/l的l-盐酸组氨酸一水，终浓度为2.98mg/l的l-羟脯氨酸，终浓度为41.78mg/l的l-异亮氨酸，终浓度为29.33mg/l的l-亮氨酸，终浓度为45.11mg/l的l-盐酸赖氨酸，终浓度为16.22mg/l的l-甲硫氨酸，终浓度为18.89mg/l的l-苯丙氨酸，终浓度为24.76mg/l的l-脯氨酸，终浓度为44.98mg/l的l-丝氨酸，终浓度为29.91mg/l的l-苏氨酸，终浓度为11.38mg/l的l-色氨酸，终浓度为28.62mg/l的l-缬氨酸，终浓度为46.58mg/l的丙酮酸钠，终浓度为1000mg/l的f68，

58、终浓度为3000mg/l的hepes，终浓度为3000mg/l的d-无水葡萄糖，终浓度为31.8mg/l的四水硝酸钙，终浓度为300mg/l的无水磷酸氢二钠，终浓度为0.142mg/l的还原型谷胱甘肽，终浓度为0.124mg/l的七水硫酸亚铁，终浓度为0.129mg/l的七水硫酸锌，终浓度为0.844mg/l的维生素c，终浓度为0.711mg/l的d-泛酸钙，终浓度为0.933mg/l的叶酸，终浓度为8.667mg/l的肌醇，终浓度为0.756mg/l的烟酰胺，终浓度为0.733mg/l的维生素b6，终浓度为0.756mg/l的维生素b1，终浓度为1.729mg/l的维生素b12，终浓度为4000mg/l的大豆水解物，终浓度为4000mg/l的酵母水解物，终浓度为23.556mg/l的l-酪氨酸二钠盐无水，终浓度为0.001mg/l的五水硫酸铜，终浓度为15.648mg/l的六水氯化镁，终浓度为0.044mg/l的d-生物素，终浓度为10.222mg/l的氯化胆碱，终浓度为0.724mg/l的次黄嘌呤，终浓度为0.027mg/l的亚油酸，

59、终浓度为0.069mg/l的硫辛酸，

60、终浓度为0.244mg/l的1，4-丁二胺二盐酸盐，终浓度为0.152mg/l的维生素b2，终浓度为0.127mg/l的胸苷，

61、终浓度为0.151mg/l的对氨基苯甲酸，终浓度为6.796mg/l的柠檬酸铁，终浓度为0.003mg/l的亚硒酸钠，终浓度为0.998mg/l的重组人胰岛素，终浓度为0.001mg/l的钼酸铵，

62、终浓度为0.001mg/l的二水氯化铜，终浓度为0.002mg/l的氯化锂，

63、终浓度为0.020mg/l的氯化铝，

64、终浓度为0.073mg/l的九水偏硅酸钠，终浓度为0.016mg/l的维生素e醋酸酯，终浓度为0.002mg/l的肉豆蔻酸，终浓度为0.002mg/l的油酸，

65、终浓度为0.002mg/l的棕榈酸，

66、终浓度为0.002mg/l的硬脂酸，和

67、终浓度为0.490mg/l的吐温80。

68、由此，可以进一步提高采用优化后的mem培养基培养bhk21细胞的效率，提高猪繁殖与呼吸综合征病毒在bhk21细胞中的复制效率，将有助于提高猪繁殖与呼吸综合征疫苗的产量或质量。

69、根据本发明的实施例，所述mem基础培养基中含有以下终浓度的下列成分：

70、终浓度为8.9mg/l的l-丙氨酸，

71、终浓度为126mg/l的l-盐酸精氨酸，

72、终浓度为13.2mg/l的l-门冬酰胺，

73、终浓度为13.2mg/l的l-天门冬氨酸，

74、终浓度为31mg/l的l-胱氨酸二盐酸盐，

75、终浓度为14.7mg/l的l-谷氨酸，

76、终浓度为292mg/l的l-谷氨酰胺，

77、终浓度为7.5mg/l的甘氨酸，

78、终浓度为42mg/l的l-盐酸组氨酸一水，

79、终浓度为52mg/l的l-异亮氨酸，

80、终浓度为52mg/l的l-亮氨酸，

81、终浓度为73mg/l的l-盐酸赖氨酸，

82、终浓度为15mg/l的l-甲硫氨酸，

83、终浓度为32mg/l的l-苯丙氨酸，

84、终浓度为11.5mg/l的l-脯氨酸，

85、终浓度为10.5mg/l的l-丝氨酸，

86、终浓度为48mg/l的l-苏氨酸，

87、终浓度为10mg/l的l-色氨酸，

88、终浓度为52mg/l的l-酪氨酸二钠盐无水，

89、终浓度为46mg/l的l-缬氨酸，

90、终浓度为10mg/l的苯酚红，

91、终浓度为265mg/l的二水氯化钙，

92、终浓度为400mg/l的氯化钾，

93、终浓度为98mg/l的无水硫酸镁，

94、终浓度为6800mg/l的氯化钠，

95、终浓度为140mg/l的一水磷酸二氢钠，

96、终浓度为1000mg/l的d-无水葡萄糖，

97、终浓度为1mg/l的d-泛酸钙，

98、终浓度为1mg/l的叶酸，

99、终浓度为1mg/l的氯化胆碱，

100、终浓度为2mg/l的肌醇，

101、终浓度为1mg/l的烟酰胺，

102、终浓度为1mg/l的盐酸吡哆醛，

103、终浓度为0.1mg/l的维生素b2，和

104、终浓度为1mg/l的维生素b1。

105、根据本发明的实施例的培养基，能够有效地用于培养经过sdhb基因改造的bhk21细胞，与其他培养基相比，提高了扩增病毒的效率，不存在污染外源病毒和致病因子的风险，避免了接种者的过敏反应，并且不同批次培养过程中的生物活性和因子的一致性高。

106、在本发明的第二方面，本发明提出了一种培养bhk21细胞的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：(a)对bhk21细胞进行基因改造，以便得到表达突变后的sdhb蛋白的bhk21细胞，(b)将表达突变后的sdhb蛋白的bhk21细胞在前面所述的用于培养bhk21细胞的培养基中进行无血清培养，以便获得所述bhk21细胞，其中，所述突变后的sdhb蛋白具有seqid no:1所示的氨基酸序列：

107、maaavgvsarrcfpatalgrvgaqacrgaqtaaaaaprikkfaiyawdpdktgdkpramqtyevdlnkcgpmvldalikiknevdstltfrrscregicgscamninggntlactrridtdlnkvskiyplphmyvikdlvpdlsnfyaqyksiepylkkkdesqegkqqylqsiedrekldglyecilcaccstscpsywwngdkylgpavlmqayrwmidsrddfteerlaklqdpfslyrchtimnctrtcpkglnpgkaiaeikkmmatykekrala(seq id no:1)。

108、上述seq id no:1所示的氨基酸序列中“加粗和下划线”标记的氨基酸为相较于野生型sdhb经过改造(突变)的氨基酸位点，其中，相较于野生型sdhb蛋白，发生的氨基酸突变为l9a、l18a、r46a、r57a。

109、需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

110、本技术的发明人在使用bhk21细胞生产prrsv相关疫苗的研究过程中发现可以通过对bhk21细胞的某些基因进行改造来提高prrsv病毒感染bhk21细胞的效率，从而可以提高bhk21细胞生产prrsv疫苗的效率。由此，本技术的发明人对多种候选基因进行实验后，意外地发现了通过使sdhb基因的功能下调，能够提高prrsv对bhk21细胞的感染效率。由此，发明人进一步对sdhb基因的改造方式进行研究，发现如果将sdhb全部敲除或者功能完全丧失，则bhk21细胞的生长行为会受到严重影响，不利于在bhk21细胞上对prrsv进行扩增，发明人进行深入研究后提出了采用特定突变类型的sdhb可以在不影响bhk21细胞生长行为的情况下提高prrsv对bhk21细胞的感染效率。在获得prrsv感染率高的bhk21细胞后，发明人遇到了新的技术问题，即sdhb基因改造后，bhk21细胞在常规培养基例如mem培养基的生长速率有所降低，为此，发明人进一步研究了多种现有的培养基，最后确定了对mem培养基进行优化的研究路线，经过对mem的培养基添加一系列添加物，经过大量实验筛选和优化提出了一种新型的培养基，可以对经过改造后的bhk21细胞进行高效率无血清培养，由此，完成了本发明。

111、根据本技术的实施例，发明人提出病毒在侵染及增殖过程中会与宿主发生互作，互作的核心在于竞争有限的代谢中间体与能量，细胞通过代谢重排维系二者代谢关系。琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase，sdh)作为tca循环与电子传递的关键酶，在天然免疫反应和细胞的代谢重排中发挥重要作用。发明人发现不同病毒感染对sdh活性的影响截然不同，例如，新城疫病毒在细胞中的增殖抑制了sdh活性，而牛疱疹病毒1型感染细胞会增强细胞内sdh的表达。本技术的发明人发现抑制sdh活性会提高prrsv在细胞中的增殖效率，因此本发明利用基因编辑技术对bhk21细胞系中的多种sdh活性位点进行改造和筛选比较，获得能够提高prrsv复制效率的细胞系。sdh包括a、b、c、d这4个编码基因，本发明的发明人经过大量筛选工作，最终确定编码sdh琥珀酸脱氢酶中b亚基的sdhb基因作为改造的对象。通过采用根据本技术实施例的技术方案，能够有效地对经过sdhb基因改造的bhk21细胞进行培养，从而进一步可以用于扩增prrsv病毒和制备疫苗，并且采用该培养基得到的疫苗不存在污染外源病毒和致病因子的风险，避免了接种者的过敏反应，并且不同批次培养过程中的生物活性和因子的一致性高。

112、根据本技术的实施例，上述培养bhk21细胞的方法还可以具有下列附加技术特征中的至少之一：

113、根据本技术的实施例，编码所述突变后的sdhb蛋白的核酸具有seq id no:2所示的核苷酸序列：

114、ggacctccgcgtgagcggcgggcttccaccgcggtgttcgacgggatgccgggggctaaggggtggggctgacgctaggcgctaagatggcggcggcggtcggggtctccgcgaggcgctgcttcccggctaccgctgcgggcagagtcggcctgcaggcctgccgaggggcacagacagctgctgctgcagctccccgcatcaaaaaatttgccatttacgcctgggacccggacaagactggagataaacccgccatgcagacttacgaagttgatctgaataagtgtggacctatggtgttggatgctctaatcaagattaagaatgaagtggattccactttgacctttcggagatcatgtagagaaggaatctgtggctcttgtgccatgaacatcaatggaggcaacactctggcgtgcactcgtaggatcgacacagacctcaacaaagtctcaaagatttaccctcttccacatatgtatgtgatcaaggatcttgtccctgatctgagtaacttctacgcacagtacaaatccattgagccctatctgaagaagaaggatgagtcccaagagggcaagcagcagtacttgcagtccatcgaggaccgggagaagctggatggattgtatgaatgcatcctgtgtgcctgctgcagcaccagctgccccagctactggtggaacggagacaagtacctgggtcctgcagttctcatgcaggcctaccgctggatgatcgactccagagatgacttcaccgaggagcgccttgcgaagctgcaggaccccttctctctctaccgctgtcacaccatcatgaactgtacacggacctgccccaagggtctgaatccagggaaagccattgctgaaatcaagaagatgatggcaacctacaaggaaaagagggcactggcgtaaccctctctgtgctgaatctcttcagacacctggattctccaggaacacagcatgtataataaacatcttaagaaataa(seq id no:2)。其中，小写加粗字体标记的碱基为经过基因编辑改造的碱基位点。

115、由此，可以提高经过改造的sdhb基因在bhk21细胞中的表达效率。

116、根据本技术的实施例，所述基因改造是采用crispr系统进行的。

117、根据本技术的实施例，所述crispr系统包括crispr cas9。

118、根据本技术的实施例，所述基因改造中，针对seq id no:1氨基酸序列所示的sdhb蛋白的第9位氨基酸突变使用的引物序列包括：

119、sdhb-sgrna1-exon1-f：caccgcaggccgactctgcccagag(seq id no:3)，

120、sdhb-sgrna1-exon1-r：aaacctctgggcagagtcggcctgc(seq id no:4)，

121、ssdna序列为：

122、ggggctaaggggtggggctgacgctaggcgctaagatggcggcggcggtcggggtctccgcga ggcgctgcttcccggctaccgctctgggcagagtcggcctgcaggtgagcggcggggccgtggttcagggagggagccgtgcccgtc(seq id no:5)。

123、根据本技术的实施例，所述基因改造中，针对seq id no:1氨基酸序列所示的sdhb蛋白的第18位氨基酸突变使用的引物序列包括：

124、sdhb-sgrna2-exon1-f：caccgctaccgctctgggcagagt(seq id no:6)，

125、sdhb-sgrna2-exon1-r：aaacactctgcccagagcggtagc(seq id no:7)，

126、ssdna序列为：

127、aagatggcggcggcggtcggggtctccttgaggcgctgcttcccggctaccgctgcgggcaga gtcggcctgcaggtgagcggcggggccgtggttcagggagggagccgtgcccgtccccgaggctgcctggagcggagaggccgcgga(seq id no:8)。

128、根据本技术的实施例，所述基因改造中，针对seq id no:1氨基酸序列所示的sdhb蛋白的第46位氨基酸突变使用的引物序列为：

129、sdhb-sgrna1-exon2-f：caccgatggcaaattttttgatgcg(seq id no:9)，

130、sdhb-sgrna1-exon2-r：aaaccgcatcaaaaaatttgccatc(seq id no:10)，

131、ssdna序列包括：

132、ctttctcacatttcaggcctgccgaggggcacagacagctgctgctgcagctccccgcatcaaaaaatttg ccatttacgcctgggacccggacaagactggagataaaccccgaatgcagacttacgaagttgat(seq idno:11)。

133、根据本技术的实施例，所述基因改造中，针对seq id no:1氨基酸序列所示的sdhb蛋白的第57位氨基酸突变使用的引物序列包括：

134、sdhb-sgrna2-exon2-f：caccgacttcgtaagtctgcattcg(seq id no:12)，

135、sdhb-sgrna2-exon2-r：aaaccgaatgcagacttacgaagtc(seq id no:13)，

136、ssdna序列为：

137、ttaccgatgggacccggacaagactggagataaacccgccatgcagacttacgaagttgatctg aataagtaagtgtctgtgccagctaggtgcttggtaaggagagggctgcgagggtgtgctt(seq id no:14)。

138、由此，可以通过采用crispr/cas9技术提高构建突变sdhb基因的效率。

139、在本发明的第三方面，本发明提出了一种bhk21细胞系，所述bhk21细胞系用于制备疫苗。根据本发明的实施例，所述bhk21细胞系是采用第二方面所述的方法制备的。如前所述，将bhk21细胞中的sdhb基因进行定点突变后，使得sdhb基因的功能下调且不显著影响bhk21细胞的生长行为，能够提高prrsv对bhk21细胞的感染效率，进一步地，采用本技术经优化后的新型培养基对基因改造后的bhk21细胞进行高效率的无血清培养，即采用前面所述的培养用于制备疫苗的bhk21细胞的方法能够高效获得的bhk21细胞系能够用于生产高滴度病毒。

140、在本发明的第四方面，本技术还提出了一种制备病毒疫苗的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：根据前面所述培养用于制备疫苗的bhk21细胞的方法培养所述bhk21细胞；和在所述培养过程中接种病毒，以利用所述bhk21细胞对所述病毒进行扩增；和收集所述扩增的病毒并进行对所述病毒进行减毒或者灭活处理，以便获得所述病毒疫苗。利用该手段对bhk21细胞中调控猪繁殖与呼吸综合征病毒感染与免疫相关的关键酶基因进行改造，可以提高猪繁殖与呼吸综合征病毒在bhk21细胞中的复制效率，将有助于提高猪流行性疫苗的产量或质量，另外，采用本技术提出的经过优化的mem培养基，提高了扩增病毒的效率，不存在污染外源病毒和致病因子的风险，避免了接种者的过敏反应，并且不同批次培养过程中的生物活性和因子的一致性高。

141、根据本技术的实施例，所述病毒包括猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、新城疫病毒和狂犬病病毒中的至少之一。

142、在本发明的第五方面，本发明提出了一种病毒疫苗。根据本发明的实施例，所述病毒疫苗是采用前面所述制备病毒疫苗的方法制备的。如前所述，利用上述方法制备的病毒疫苗不存在污染外源病毒和致病因子的风险，避免了接种者的过敏反应，并且不同批次培养过程中的生物活性和因子的一致性高。

143、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。