蛋白降解靶向嵌合体类化合物及制备方法和应用

本发明属于医药，具体涉及一种蛋白降解靶向嵌合体类化合物及制备方法和应用。

背景技术：

1、neks(nima相关激酶)激酶是一种丝/苏氨酸蛋白激酶。neks家族从nek1到nek11共11种蛋白激酶，其中，nek2与nima具有最高的同源性。nek2在调节细胞周期g2/m期中起着核心作用。nek2过表达导致癌细胞染色体不稳定和非整倍性。nek2作为细胞蛋白激酶在有丝分裂调节中起重要作用，与肿瘤的发生、进展和转移密切相关。nek2在正常细胞中的过表达会产生致瘤细胞环境。

2、现有技术中，wo2021155185a1、cn106496222a、wo2018081719a1等专利公开了nek2小分子抑制剂。同时还有一些文献报道了nek2抑制剂，如j med chem.2010nov 11；53(21):7682-98；j med chem.2011mar 24；54(6):1626-39；j med chem.2012apr 12；55(7):3228-41；j med chem.2011jun23；54(12):4133-46；rsc med chem.2020may 22；11(6):707-731。相较于此类nek2小分子抑制剂，nek2蛋白降解靶向嵌合体可以更有效地降解nek2并抑制nek2信号通路，这可能成为用于nek2相关肿瘤的治疗方法。

3、蛋白降解靶向嵌合技术(protac技术)，其结构包含两种不同的配体：一种是泛素连接酶e3配体，另一种是靶蛋白结合配体，两个配体通过linker连接。protac将靶蛋白和细胞内泛素连接酶e3拉近，形成靶蛋白-protac-e3三元复合物，然后e3泛素连接酶用泛素化的蛋白标签标记靶蛋白，随后启动细胞内强大的泛素化-蛋白酶体系统可以特异性降解靶蛋白，从而抑制相应的蛋白质信号通路。与传统的小分子抑制剂相比，protac表现出独特的优势：1)protac不需要长时间高强度地与目标蛋白结合，降解目标蛋白的过程类似于催化反应，可以循环结合和降解靶蛋白，进而减少药物的全身暴露并减少毒性和副作用的发生；2)目标蛋白降解后，需要重新合成以恢复其功能。因此，降解靶蛋白比抑制其活性表现出更有效和持久的抗肿瘤作用，并且不会因靶蛋白突变而发生耐药性。

4、现目前有关蛋白降解靶向嵌合技术的研究相对较少，现有技术中，wo2022006292a专利公开了一系列nek2 protac，但却仅公开了该代表性nek2 protac对弥散性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)细胞株中nek2蛋白的降解作用。本领域公知，dlbcl作为一种血液肿瘤，其与肺癌等实体肿瘤即使对同一种化合物的敏感性也不尽相同。

5、经试验发现，wo2022006292a中的代表性nek2 protac对肺癌等实体肿瘤细胞株增殖的抑制作用有待进一步提高。然而现有技术中暂无对该类化合物进行结构改良从而获得对肺癌等实体肿瘤细胞具有良好抗增殖作用的nek2 protac的进一步研究。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种蛋白降解靶向嵌合体类化合物，该化合物对nek2有良好的抑制作用，对a549细胞增殖也有良好的抑制作用，为nek2蛋白介导的疾病的治疗提供了技术支持。

2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、蛋白降解靶向嵌合体类化合物，所述蛋白降解靶向嵌合体类化合物为如式i所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；

4、

5、其中：

6、l为-(ch2)mo-(ch2ch2o)n-(ch2)w-；m为1或2；n为0、1、2、3；w为1或2。

7、作为优选，所述蛋白降解靶向嵌合体类化合物为化合物1～化合物6中任一种或多种；

8、

9、

10、本发明的目的之二在于提供一种目的一所述的蛋白降解靶向嵌合体类化合物的制备方法。

11、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

12、蛋白降解靶向嵌合体类化合物的制备方法，包括以下步骤：

13、步骤1：按反应式1进行，将sm-1和sm-2溶于二氯甲烷中，加入三苯基膦和偶氮二甲酸二乙酯，反应制得中间体1.1；

14、反应式1：

15、步骤2：按反应式2进行，将步骤1所得中间体1.1溶于四氢呋喃中，加入硼酸三甲酯和二异丙基氨基锂，生成硼酸化物；将sm-3溶于四氢呋喃与水的混合溶液中，加入1,1’-双(二苯膦基)二茂铁合氯化钯、碳酸钠，在滴加所述硼酸化物，反应制得中间体1.2；

16、反应式2：

17、步骤3：按反应式3进行，步骤2所得中间体1.2依次加入1，4-二氧六环、双(频哪醇合)二硼、乙酸钾、三(二亚苄基丙酮)二钯和三环己基膦，反应制得中间体1.3；

18、反应式3：

19、步骤4按反应式4进行，步骤3所得中间体1.3与sm-4混合，依次加入dmf、水、碳酸钠、三(二亚苄基丙酮)二钯和三环己基膦，反应制得中间体1；

20、反应式4：

21、步骤5：按反应式5进行，将sm-5、nh2(ch2)m(ch2ch2o)n(ch2)wcl、n，n-二异丙基乙胺加入dmf溶液中，加热搅拌，反应制得化合物a；

22、反应式5：

23、步骤6：按反应式6进行，将步骤4所得中间体1、步骤5所得化合物a、乙基二异丙胺与碘化钾的二亚甲基砜混合后进行反应，反应制得式i化合物。

24、反应式6：

25、

26、其中，m、n、w的定义与权利要求1的式ⅰ相同；

27、所述步骤4反应在微波照射条件下进行；

28、所述nh2(ch2)m(ch2ch2o)n(ch2)wcl为如下所示的sm-6、sm-7、sm-8、sm-9、sm-10和sm-11中的任一种或多种；

29、

30、进一步，步骤1为mitsunobu条件下的脱水反应；步骤2中，步骤1所得中间体1.1先经miyaura borylation反应得硼酸中间体，再与sm-3发生suzuki反应生成中间体1.2；进一步，步骤3中，所述中间体1.2经miyaura borylation反应得中间体1.3；步骤4中，所述中间体1.3与sm-4发生suzuki偶联反应生成中间体1；步骤5中，sm-5与nh2(ch2)m(ch2ch2o)n(ch2)wcl发生氨基亲核取代反应制得化合物a；步骤6中，步骤4所得中间体1与步骤5所得化合物a发生氨基亲核取代反应与酯的氨解反应得式i化合物。

31、进一步，所述步骤1反应所用的试剂包括三苯基膦、偶氮二甲酸二乙酯和二氯甲烷；步骤2反应所用的试剂包括四氢呋喃、硼酸三甲酯和1,1’-双(二苯膦基)二茂铁合氯化钯；步骤3反应所用的试剂包括1，4-二氧六环、双(频哪醇合)二硼、乙酸钾、三(二亚苄基丙酮)二钯和三环己基膦；所述步骤4反应所用的试剂包括碳酸钠、三(二亚苄基丙酮)二钯和三环己基膦；所述步骤5反应所用的试剂包括n，n-二异丙基乙胺和n,n-二甲基甲酰胺；所述步骤6反应所用试剂包括乙基二异丙胺、碘化钾、二亚甲基砜和氨甲醇。

32、进一步，所述蛋白降解靶向嵌合体类化合物的制备方法具体如下：

33、步骤1：sm-1和sm-2溶解在二氯甲烷中，放入-10℃冰浴中，加入三苯基膦，滴加偶氮二甲酸二乙酯；将反应物从冰浴中取出并在室温下搅拌15小时，得粗反应物；将粗反应物通过二氧化硅吸附，并使用己烷/etoac色谱纯化，得到中间体1.1。

34、步骤2：步骤1制得的中间体1.1溶解在四氢呋喃中，冷却至-20℃；加入硼酸三甲酯，在8分钟内滴加二异丙基氨基锂到反应中；约30分钟后，生成硼酸化物；取用单独的反应容器，将sm-3溶解在7：3的四氢呋喃/水中并通氩气；加入1,1’-双(二苯膦基)二茂铁合氯化钯、碳酸钠，加热反应至65℃；在10分钟内滴加上述得到的硼酸化物，并将反应加热回流2小时；二氧化硅吸附，并通过二氯甲烷/meoh梯度色谱纯化；分离并干燥，得到中间体1.2。

35、步骤3：将步骤2制得的中间体1.2溶液通氮气下，加入1，4-二氧六环，加入双(频哪醇合)二硼，乙酸钾，三(二亚苄基丙酮)二钯，三环己基膦；将混合物在100℃下加热2.5小时；硅藻土过滤，真空下浓缩，得到中间体1.3粗产物。

36、步骤4：将步骤3制得的中间体1.3和sm-4混合，加入dmf和水，加入碳酸钠、三(二亚苄基丙酮)二钯，三环己基膦；微波照射下，反应混合物120℃下搅拌30分钟；硅藻土过滤，真空下浓缩；用柱色谱meoh/二氯甲烷纯化，得到中间体1。

37、步骤5：将sm-5、nh2(ch2)m(ch2ch2o)n(ch2)wcl、n，n-二异丙基乙胺在dmf溶液中加热至85℃，搅拌18小时；将水加入到反应混合物中并用etoac萃取；有机相用水洗涤一次，盐水洗涤一次，用na2so4干燥，真空浓缩；所得混合物通过己烷/etoac柱色谱法纯化，得到化合物a。

38、步骤6：将步骤5制得的化合物a、步骤4制得的中间体1、乙基二异丙胺和碘化钾的二亚甲基砜中的混合物在80℃下加热18小时；冷却后加入氨甲醇，用二氯甲烷萃取；将有机相真空浓缩，残余物用制备型hplc纯化，得到所述蛋白降解靶向嵌合体类化合物。

39、作为优选，所述化合物a为如下所示的化合物1a、化合物2a、化合物3a、化合物4a、化合物5a和化合物6a中的任一种或多种；

40、

41、

42、作为优选，步骤1中，所述sm-1和sm-2的摩尔比为1:1；步骤2中，所述中间体1.1与sm-3的摩尔比为6.3:10；步骤3中，中间体1.2与1，4-二氧六环的摩尔比为1.7:10；步骤5中，所述sm-5与nh2(ch2)m(ch2ch2o)n(ch2)wcl的摩尔比为0.5:2；步骤6中，化合物a、中间体1、乙基二异丙胺和碘化钾的摩尔比为：0.17:0.62:4:1。

43、本发明的目的之三在于提供一种含有目的一所述的蛋白降解靶向嵌合体类化合物的药物组合物。

44、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

45、一种药物组合物，所述药物组合物含有目的一所述的蛋白降解靶向嵌合体类化合物，以及药学上可接受的赋形剂。

46、本发明的目的之四在于提供一种含有目的三所述的药物组合物的口服固体制剂。

47、作为优选，所述口服固体制剂由所述化合物2、淀粉、淀粉浆、酒石酸、滑石粉、轻质液体石蜡组成；所述化合物2、所述淀粉、所述酒石酸和所述滑石粉的质量比为5:4:0.2:2.6。

48、进一步，所述滑石粉的浓度为5％。

49、进一步，所述淀粉浆的浓度为15％～17％。

50、进一步，所述口服固体制剂的制法如下：

51、取合物2与1/3的淀粉(总量为4g)混加淀粉浆(15％～17％，内含酒石酸)制软材10～15min，过14目或16目尼龙筛制湿颗粒，于70℃干燥，干颗粒过12尼龙筛整粒，然后将此颗粒与剩余的淀粉(预先在100～105℃干燥)及吸附有液体石蜡的滑石粉共同混匀后，再过12目尼龙筛。所得颗粒①灌装胶囊得胶囊剂；②压片得片剂。

52、本发明的目的之五在于提供一种目的一所述的蛋白降解靶向嵌合体类化合物和/或目的三所述的药物组合物在制备用于治疗nek2蛋白介导的疾病的药物中的应用。

53、进一步，所述疾病为癌症，所述癌症为白血病、b细胞淋巴瘤、胃癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌和/或肝癌。

54、本发明的目的之六在于提供一种所述蛋白降解靶向嵌合体类化合物在制备抑制肿瘤细胞增殖活性的药物中的应用。

55、本发明的目的之七在于提供一种所述蛋白降解靶向嵌合体类化合物联合化合物b在抑制肿瘤细胞增殖活性的药物中的应用。

56、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

57、所述蛋白降解靶向嵌合体类化合物联合化合物b在抑制肿瘤细胞增殖活性的药物中的应用，所述化合物b为乙草胺、秋水仙碱、硫柳汞、奥利司他、盐酸阿米替林、盐酸氯米帕明和氟达拉滨中的任一种或多种。

58、进一步，所述肿瘤细胞为a549细胞。

59、作为优选：

60、化合物1联合奥利司他、盐酸阿米替林、盐酸氯米帕明和/或氟达拉滨在抑制肿瘤细胞增殖活性的药物中的应用。

61、化合物2联合硫柳汞和/或奥利司他在抑制肿瘤细胞增殖活性的药物中的应用。

62、化合物3联合奥利司他和/或盐酸阿米替林在抑制肿瘤细胞增殖活性的药物中的应用。

63、化合物4和/或化合物6联合盐酸阿米替林和/或氟达拉滨在抑制肿瘤细胞增殖活性的药物中的应用。

64、化合物5联合盐酸阿米替林在抑制肿瘤细胞增殖活性的药物中的应用。

65、本发明的有益效果在于：

66、1.本发明所提供的蛋白降解靶向嵌合体类化合物对nek2有良好的抑制作用，可用于治疗nek2蛋白介导的疾病。

67、2.本发明所提供的蛋白降解靶向嵌合体类化合物对a549细胞增殖有良好的抑制作用，还能协同地增强至少一种已知化合物(乙草胺、秋水仙碱、硫柳汞、奥利司他、盐酸阿米替林、盐酸氯米帕明、氟达拉滨等)对a549细胞增殖的抑制作用。