一种抗黑色素瘤化合物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及有机合成领域，特别是涉及一种抗黑色素瘤化合物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、黑色素瘤是起源于黑色素细胞的恶性肿瘤，表现为患处出现黑色或灰色的不对称斑片、结节或肿物等，应用药物是一种辅助治疗的方法，常用药物包括化疗药物、分子靶向药物以及免疫药物。恶性黑色素瘤与大多数肿瘤治疗方法类似，包括早期手术治疗、中晚期手术结合放射治疗、化学治疗，以及新型的免疫治疗和靶向治疗等综合治疗方法。该病病程较长，需要长期持续性治疗。

2、化疗药物可以杀灭肿瘤细胞，能够抑制肿瘤细胞的生长和繁殖，可以延长患者生存期。常用化疗药物有紫杉醇、顺铂、替莫唑胺、达卡巴嗪、卡铂等。

3、目前，针对恶性黑色素瘤缺乏高效的化疗药物。黑色素瘤对化疗具有高度抗性。达卡巴嗪长期以来一直是化疗首先药物，但其反应率仍然很差，并且该药物在用于转移性黑色素瘤时从未显示出任何生存优势。口服达卡巴嗪的前体药物替莫唑胺，对中枢神经系统的转移有一定效果。联合化疗方案多用于单药无反应的转移性恶性黑素瘤，有多种联合化疗方案，但联合化疗并不能改善患者的整体生存率。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种抗黑色素瘤化合物及其制备方法和应用，以2-氨基苯甲酰肼、丁炔二酸二甲酯为起始原料，经过3步反应合成了针对恶性黑色素瘤具有高疗效的化疗药物化合物。

2、本发明所采用的技术方案是：

3、一种抗黑色素瘤化合物，结构如通式（1）所示的化合物或其各立体异构体、各晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物：

4、;

5、r’选自氢，卤素，羟基，硝基，c1-c10烷基，c1-c10烷氧基，opo(or1)(or2)，o-(ch2)n-nr3r4，磺酰基，nr5r6；其中n取值为1~10；r1和r2分别单独选自氢，c1~c10烷基，苄基；r3~r6分别单独选自氢，c1~c10烷基。

6、进一步地，所述r’选自氢，氟，氯，溴，碘，羟基，硝基，c1-c7烷基，c1-c7烷氧基，opo(or1)(or2)，o-(ch2)n-nr3r4，磺酰基，nr5r6；其中n取值为1~7；r1和r2分别单独选自氢，c1~c7烷基，苄基；r3~r6分别单独选自氢，c1~c7烷基。

7、进一步地， n取值为1~4；r1和r2分别单独选自氢，c1~c4烷基，苄基；r3~r6分别单独选自氢，c1~c4烷基。

8、抗黑色素瘤化合物，选自如下化合物：

9、

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20、

21、

22、

23、

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25、。

26、此处对制备得到的25个抗黑色素瘤化合物以阿拉伯数字顺次进行编号，仅为方便后续的说明。

27、所述抗黑色素瘤化合物的制备方法，包括以下步骤：

28、1）由2-氨基苯甲酰肼、丁炔二酸二甲酯在甲醇溶剂中制得化合物a；

29、2）由步骤1）中制得的化合物a和fmoc保护基保护的氨基酸在缩合试剂和碱的作用下合成化合物b；

30、3）由步骤2）中制得的化合物b在碱的作用下脱去fmoc保护基制得抗黑色素瘤化合物；

31、反应通式如下：

32、。

33、fmoc保护基为9-芴甲氧羰基，fmoc保护基对酸性条件极其稳定，通过与氨基生成氨基甲酸酯来实现对氨基的保护；fmoc保护基在碱性条件易脱除保护。

34、常用的fmoc保护基的保护氨基酸有fmoc-cl、fmoc-ala-oh、fmoc-vla-oh、 fmoc-leu-oh、fmoc-ile-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-trp(boc)-oh、fmoc-pro-oh、fmoc-met-oh、fmoc-gyl-oh和fmoc-ser(tbu)-oh、fmoc-thr(tbu)-oh、fmoc-tyr(tbu)-oh，本发明使用的fmoc保护基为fmoc-l-tyr-oh的各种衍生物。

35、进一步地，所述r为，所述r’选自上述所述的取代基团。

36、进一步地，所述fmoc保护基选用的氨基酸为芴甲氧羰基-l-酪氨酸的各种衍生物。

37、进一步地，步骤2）中所述碱选自二异丙基乙基胺，三乙胺，n-甲基吗啉中的一种或几种，所述缩合试剂选自hatu，dic，edci，hbtu，bop，pybop中的一种或几种。

38、进一步地，步骤3）中所述碱选自二异丙基胺，三乙胺，n-甲基吗啉中的一种或几种。

39、所述制备方法制备的抗黑色素瘤化合物的应用，所述抗黑色素瘤化合物在治疗黑色素瘤或银屑病药物中的应用。

40、本发明的抗黑色素瘤化合物或其立体异构体、溶剂化物、水合物、药学上可接受的盐或共晶的药物组合物中，可以含有药学上可接受的辅料，是针对恶性黑色素瘤的化疗药物，也可用于治疗银屑病。

41、所述“黑色素瘤”包括但不限于浅表弥漫性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、雀斑样黑色素瘤和肩峰雀斑样黑色素瘤。

42、所述“银屑病” 包括但不限于寻常型银屑病、关节型银屑病、红皮变异型银屑病、脓疱型银屑病。

43、本发明中所述“药学上可接受的”是指包括任意不干扰活性成分的生物活性的有效性且对它被给予的宿主无毒性的物质。

44、本发明所述药学上可接受的辅料，是药物中除主药以外的一切附加材料的总称，辅料应当具备如下性质：(1)对人体无毒害作用，几无副作用；(2)化学性质稳定，不易受温度、ph、保存时间等的影响；(3)与主药无配伍禁忌，不影响主药的疗效和质量检查；(4)不与包装材料相互发生作用。本发明中辅料包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等；湿润剂包含十二烷基硫酸钠、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑菌剂包含0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氢钠和磷酸氢二钠)等；乳化剂包含聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克f-68，卵磷酯、豆磷脂等；增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。上述酸碱为广义的路易斯酸碱。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。

45、本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

46、用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

47、固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

48、用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

49、除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

50、除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

51、用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

52、用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

53、本发明化合物同样可以用于注射制剂。其中，所述注射剂选自液体注射剂(水针)、注射用无菌粉末(粉针)或注射用片剂(系指药物用无菌操作法制成的模印片或机压片，临用时用注射用水溶解，供皮下或肌肉注射之用)。

54、其中，所述注射用粉剂的中除含有上述化合物外，还至少含有赋形剂。本发明中所述赋形剂，为有意加到药物中的成分，其在所用的量上不应具有药理学特性，但是，赋形剂可以有助于药物的加工、溶解或溶出、通过靶向给药途径递药或有助于稳定性。

55、“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。

56、“烷基”，是指脂肪族烃基团，指饱和烃基。烷基部分可以是直链烷基，亦可以是支链烷基。典型的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等等。

57、本发明中使用的c1～cn包括c1～c2、c1～c3……c1～cn，n为大于一的整数；作为取代基的前缀表示取代基中碳原子个数的最小值和最大值，例如，“c1～c6烷基”是指含有一个至6个碳原子的直链或支链的烷基。

58、“磺酰基”是具有式-s(＝o)2r的化学结构，当具有两个连接端时，结构为-s(＝o)2(ch2)a-，其中r可选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、氨基等，a为自然数。

59、“磷酰基”是具有式-p(＝o)rr’的化学结构，当具有两个连接端时，结构为-p(＝o)r(ch2)a-，其中r、r’可别独立选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羟基、氨基等，a为自然数。

60、“苄基” 是具有式c6h5-ch2-的化学结构,是一种含有苯甲基的官能团。

61、文中所述烷基、氨基、磺酰基、磷酰基、苄基等，可以是非取代的烷基、氨基、磺酰基、磷酰基、苄基等，也可以是取代的烷基、氨基、磺酰基、磷酰基、苄基等。

62、上文中，除已经指明的外，所述“取代”是指所提及的基团可以被一个或多个额外的基团取代，所述额外的基团各自并且独立地选自烷基、羟基、烷氧基、硝基、酰基、卤素、胺代烷基、氨基、苄基等等。

63、ic50是指“细胞活性”被抑制一半时抑制剂的浓度，在凋亡方面，可以理解为一定浓度的某种药物诱导肿瘤细胞凋亡50%，该浓度称为50%抑制浓度，即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度，ic50值可以用来衡量药物诱导凋亡的能力，即诱导能力越强，该数值越低,也可以反向说明某种细胞对药物的耐受程度。

64、hpv-16永生化表皮角质细胞是人乳头状瘤病毒hpv16 e6/e7基因稳定表达的人体永生化角质形成细胞，常用于模拟黑色素瘤、银雪病等快速增生细胞的研究。在本发明中，该细胞用于评价化合物抑制细胞增生的活性。

65、甲氨蝶呤：一种有机化合物，化学式为c20h22n8o5，主要用作抗叶酸类抗肿瘤药，通过对二氢叶酸还原酶的抑制而达到阻碍肿瘤细胞的合成，而抑制肿瘤细胞的生长与繁殖。

66、本发明的有益效果：

67、1.本发明以2-氨基苯甲酰肼、丁炔二酸二甲酯为起始原料，经过3步反应合成了针对恶性黑色素瘤具有高疗效的化疗药物化合物，合成路线简单，条件温和，原料易得。

68、2.本发明合成的抗黑色素瘤化合物为治疗黑色素瘤和银屑病提供了新的临床用药，可以是口服和外用药的方式给药。