一种基于ERA技术的基孔肯雅病毒检测用P2型成套探针引物组及试剂盒和应用的制作方法

文档序号:35675809发布日期:2023-10-08 05:57阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于era技术的基孔肯雅病毒检测用p2型成套探针引物组,其特征是,所述p2型成套探针引物组由荧光探针和引物对组成,所述引物对由正向引物和反向引物组成;所述荧光探针为chikv ns1 p2;所述引物对由正向引物f11和反向引物r11组成,或由正向引物f13和反向引物r13组成;

2.根据权利要求1所述基于era技术的基孔肯雅病毒检测用p2型成套探针引物组,其特征是,所述荧光基团为fam,所述淬灭基团为bhq,所述阻断基团为c3-spacer。

3.根据权利要求2所述基于era技术的基孔肯雅病毒检测用p2型成套探针引物组,其特征是,所述p2型成套探针引物组针对的靶基因是基孔肯雅病毒的ns1基因保守序列,如seqid no:6所示。

4.一种基于era技术的基孔肯雅病毒检测用试剂盒,其特征是,所述试剂盒包括:含有权利要求1至3任一项所述p2型成套探针引物组的探针引物混合液。

5.根据权利要求4所述基于era技术的基孔肯雅病毒检测用试剂盒,其特征是,在探针引物混合液中,p2型成套探针引物组的荧光探针、正向引物、反向引物的摩尔比为1:3.5:3.5。

6.根据权利要求5所述基于era技术的基孔肯雅病毒检测用试剂盒,其特征是,所述试剂盒还包括rt-荧光扩增试剂、溶解剂、激活剂、超纯水、以及chikv阳性对照品。

7.根据权利要求6所述基于era技术的基孔肯雅病毒检测用试剂盒,其特征是,所述chikv阳性对照品的制备过程如下:

8.根据权利要求6所述基于era技术的基孔肯雅病毒检测用试剂盒,其特征是,所述rt-荧光扩增试剂和溶解剂均由市售的基础通用型rt-era法试剂盒提供;所述激活剂为280mm乙酸镁溶液;所述chikv阳性对照品的浓度为10ng/μl。

9.一种非诊断目的基于era技术的基孔肯雅病毒检测方法,其特征是,采用权利要求4至8任一项所述试剂盒;所述检测方法为rt-era检测法,包括以下步骤:

10.根据权利要求9所述非诊断目的基于era技术的基孔肯雅病毒检测方法,其特征是,第五步中,在rt-era扩增时,温度为40℃-42℃,持续5-20分钟,每30秒采集一次fam通道荧光值。


技术总结
本发明涉及一种基于ERA技术的基孔肯雅病毒检测用P2型成套探针引物组及试剂盒和应用。该P2型成套探针引物组由荧光探针和引物对组成;引物对由正向引物和反向引物组成;荧光探针为CHIKV NS1P2,引物对为正向引物F11和反向引物R11,或正向引物F13和反向引物R13。该试剂盒含有P2型成套探针引物组。该应用为采用该试剂盒的检测方法。本发明以基孔肯雅病毒CHIKV的NS1基因保守序列为目的片段构建标准质粒,建立CHIKV的RT‑ERA简单、快速、准确、灵敏的检测方法,结果可靠,成本相对较低,尤其适用于现场或野外即时检测。

技术研发人员:罗正汉,张锦海,韩一芳,叶福强,胡丹,王太武,陈乐如,曹勇平,蒯月璋,汪春晖
受保护的技术使用者:中国人民解放军东部战区疾病预防控制中心
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
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