一种食碱戈登氏菌在动物饲料中应用及其口服制剂制备工艺的制作方法

本发明属于生物技术饲料动物养殖领域，特别是一种食碱戈登氏菌在动物饲料中应用及其口服制剂制备工艺。

背景技术：

1、抗生素的发现对人类的生产生活起到了深远的影响，饲用抗生素也得到了广大的应用，除了能大大提高畜禽的生产能力，并在预防和抵御疾病及促进生长方面也起到重大作用。然而，随着时间的推移，人们逐渐发现长期使用抗生素存在畜、禽、蛋产品中药物残留等诸多弊端。

2、而人们的生活水平不断提高，对畜、禽、蛋产品品质的诉求日益迫切，为维护人们身体健康，我国农业农村部于2019年7月发布第194号公告,要求在2020年底前退出除中药外所有促生长类药物饲料添加剂品种。我国将进入“饲料禁抗时代”，为微生物饲料推广带来巨大的商业契机。

3、微生物作为地球上最庞大物种群体，具有物种资源丰富。人类利用微生物及其代谢产物治疗疾病已有数千年历史。微生态制剂是将有益微生物通过培养、发酵、干燥、加工等工艺制成的含有活菌并用于动物的生物制剂或活菌制剂。在现代畜牧生产条件下，利用微生态制剂有效调节畜禽肠道微生态平衡、加强营养吸收、增强免疫力以促进畜禽健康生长、提高生产性能及产品质量，已成为饲料添加行业发展主要趋势。

4、列入我国农业农村部饲料目录的菌类屈指可数，主要包括乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌、丙酸杆菌、光合细菌和曲霉菌六类。戈登氏菌(gordonia)是一种少见的放线菌,食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)较为少见，现有专利资料显示，暂缺有关该菌种在动物饲料领域的应用技术。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种食碱戈登氏菌在动物饲料中应用及其口服制剂制备工艺。

2、本发明的目的是通过如下途径实现的：

3、一种食碱戈登氏菌，它为食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1，其保藏编号为cgmcc no.26361。

4、作为进一步的限定，食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1在动物饲料中应用，它能有效促进动物生长，增强动物抗病能力，提高动物的生产性能，改善肉品质。

5、一种食碱戈登氏菌口服制剂制备工艺，制备步骤如下：

6、a.发酵:

7、a.斜面种子：将食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1种子接入斜面培养基上，30-31℃培养24小时-36小时，呈红色，镜检无杂菌且生长健壮；

8、b.摇瓶种子：将食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1的斜面种子接入锥形瓶30-31℃，光照照度750-850lx，摇瓶转速150转/分钟,培养48小时，呈红色，镜检无杂菌且生长健壮转入接种瓶；

9、c.种子罐培养：将接种瓶种子转入种子罐培养，培养基初始ph值6.8-7.0光照照度850-1000lx，通气量1:0.85～0.9，自动流加消泡剂，温度30-32℃，培养24～26h后呈红色进行取样镜检，菌体生长均匀无杂菌；

10、d.发酵罐培养：以4-8％接种量将种子罐的种子液打入发酵罐，温度30-32℃，光照照度

11、1000-1500lx，通气量1:1，自动流加消泡剂，培养48-52h呈红色至橘红色，镜检：菌体老化成短杆状，测生物量达(1.0～1.5)×1010cfu/ml停止发酵，要求全细胞溶液液类胡萝卜素含量(以番茄红素计)不低于：350微克/毫升，得到食碱戈登氏菌(gordoniaalkanivorans)weicao-1液体制剂；

12、b.制成口服固体制剂：

13、e.膜分离：应用有机膜设备，取a步骤所得的食碱戈登氏菌(gordoniaalkanivorans)weicao-1液体制剂进行膜分离，浓缩至十分之一；

14、f.冷冻高速离心：取上述浓溶液置冷冻高速离心机中，转速5500-7500(转/分钟)，控制温度8℃以下离心，离心10-15分钟；固液分离，菌泥和上清液备用；

15、g.菌粒制备：取菌泥称重，加4倍量的脱脂奶粉，拌均匀，24目筛制粒，置60℃以下、真空度为-0.08(mpa)烘烤15-20分钟；

16、h.清液制粒：取清液浓缩至十分之一体积，称重，加3倍量的麦芽糊精制软材，24目筛制粒，置70-75℃、真空度为-0.07-0.08mpa，烘烤2-3小时；

17、i.混合：取前述g、h步骤的颗粒混合，即得生物量为(1.5～2.5)×1010cfu/g，得到食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1固体制剂。

18、作为进一步的限定，步骤c、d中培养基的配制,按重量/体积百分比，依照以下处方配料:

19、

20、

21、食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1口服制剂是一种口服活菌生物制剂，生物量高，类胡萝卜素含量高，全细胞溶液中类胡萝卜素(以番茄红素计)含量不低于350微克/毫升(口服液体制剂)，是番茄中番茄红素含量的14倍。并含肽聚糖、氨基酸、蛋白质、黄酮和维生素等营养成份。研究表明：类胡萝卜素和脂溶性维生素(carotenoids andfat-soluble vitamin，c&fsv)含有异戊二烯长链(或异戊二烯+环状结构)或环戊烷多氢菲结构，其正辛醇-水分配系数(octanol-water partition coefficient)＞8，属于高度亲脂性食品成分，因此与c&fsv具有相似的肠道吸收机制。研究表明：番茄红素一方面可直接与自由基结合，中断其链式反应；另一方面可通过激活nrf2抗氧化信号通路，进而提高相关抗氧化酶的mrna表达水平并提高其活性；同时降低氧化酶的活性,起到减少自由基生成并加快自由基作用,最终维持细胞或机体的氧化平衡；番茄红素可通过多种作用途径来减弱脂质的合成，同时加快脂质转运和动员，进而达到降脂效果；番茄红素具有较好的抗炎和免疫调节活性，一方面通过调节炎症关因子的产生与释放；另一方面通过促进b、t淋巴细胞的产生、刺激t细胞的正常分化和增强自然杀伤(nk)细胞的活性等增强免疫力。

22、食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1生产工艺及制备方法易于工业化生产和质量控制。发酵工艺更加优化，制剂工艺能耗远低于冷冻干燥工艺。

23、食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1具有促进动物生长，增强动物抗病能力，提高动物的生产性能。且应用范围广，涉及生猪、水产，便于推广。

24、食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1在生猪上应用，试验显示：

25、(1)显著降低断奶仔猪料肉比。

26、(2)显著提高了断奶仔猪机体清除自由基的能力，抑制脂质过氧化反应，增强了机体的抗氧化能力。

27、(3)明显提高了断奶仔猪血清中no、il-2、il-12、tnf-a的水平，促进肠道黏膜siga的分泌，提高了断奶仔猪自身免疫能力。

28、(4)明显抑制肠道大肠杆菌的增值，降低致病菌大肠杆菌相对丰度；促进乳酸杆菌生长，提高益生菌乳酸杆菌相对丰度。维持肠道菌群的平衡。

29、(5)可使断奶仔猪肠道绒毛高度增加，隐窝深度降低，提高了小肠对营养物质的消化吸收能力，进而提高生产性能。

30、(6)通过调节胃肠酶活性可显著地提高育肥猪增重，降低料肉比。

31、(7)显著提高育肥猪血清和组织的gsh-px和sod酶活，减低mda的含量，降低肌肉的氧化程度，进而改善肉品质。

32、食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1在对虾上的应用，试验显示：

33、(1)饲粮中加入0.05％食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1制剂凡纳滨对虾的生长效果较好；

34、(2)饲粮中加入0.04％-0.05％食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1制剂能够提高对虾的消化能力；

35、(3)加入0.03％食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1制剂,对虾肠道的肠绒毛高度、宽度与肠壁肌层厚度相较于其他组较好，对肠道健康具有促进作用；

36、(4)饲粮中加入0.04％-0.05％食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1制剂能显著提高对虾肝胰腺抗氧化能力，加入0.05％食碱戈登氏菌(gordoniaalkanivorans)weicao-1制剂能提高对虾肝胰腺免疫能力；

37、(5)在炎症反应方面，食碱戈登氏菌(gordonia alkanivorans)weicao-1处理总体上下调促炎因子表达，发挥抑炎作用。