纤连蛋白截短片段、组合物及用途的制作方法

文档序号:36655291发布日期:2024-01-06 23:42阅读:23来源:国知局
纤连蛋白截短片段、组合物及用途的制作方法

本发明属于生物医药领域和化妆品领域,涉及一种人纤连蛋白截短片段、组合物及用途。


背景技术:

1、人纤连蛋白(fibronectin,简称为fn)是一种分子量约为250kda的大分子糖蛋白,以二聚体的形式存在。整个分子由多个重复性结构模块组成,包含12个fn i型重复序列、2个fn ii型重复序列、15个组成型表达、2个交替剪切fn iii型重复序列、以及一个非同源性变量(v)或iii型连接片段(iii cs)区域。其中,fn i主要结合纤维蛋白、肝素和胶原蛋白,fn ii只参与胶原蛋白结合,fn iii参与与细胞的结合。由于纤连蛋白具有特殊的功能区域和结合区域,使得纤连蛋白可以跟不同类型的细胞、细胞因子和细胞外基质结合。例如,纤连蛋白通过纤连蛋白10fn iii和9fn iii上的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列(arg-gly-asp,rgd)识别整合素异二聚体α5β1和αvβ3并与之结合,进而影响细胞黏附、迁移等。

2、人纤连蛋白是存在于细胞外基质中的蛋白质,它在细胞外基质的形成和细胞黏附中发挥着重要的作用,可以促进皮肤组织的修复和再生,因此被广泛应用于皮肤修复和再生领域。在受损的皮肤组织中,纤连蛋白可以诱导周围细胞移动到受损区域,促进皮肤细胞的再生和修复。还可以增加皮肤细胞的黏附性,促进皮肤组织的形成和修复。

3、人纤连蛋白广泛存在于人体组织及组织液中,参与了细胞的迁移、黏附、增殖、止血及组织修复和胚胎的发育,具有生长因子的作用,可促进细胞增殖,诱导表皮细胞通过肉芽组织,并促进表皮下基底膜再建和正常角化过程。纤连蛋白也参与机体众多病理过程。纤连蛋白具有多种粘附功能,例如细胞间粘附。纤连蛋白在伤口愈合中也很重要。沉积在受损胶原蛋白和纤维蛋白上的可溶性纤连蛋白会增强血小板附着、吞噬细胞和成纤维细胞迁移以及细胞增殖(李秀兰,师宜健,陆静.纤维结合蛋白及其在创伤修复中的作用[j].中国中西医结合外科杂志,1998,4(1):60-62.)。maxwell b.johnson等通过小鼠伤口模型实验,证明了纤连蛋白可以降低在小鼠皮肤中对辐射的反应。此外,局部施用的纤连蛋白的凝胶剂可以显著促进受辐射皮肤伤口的愈合(maxwell b.johnson,brandon pang,et al.topicalfibronectin improves wound healing of irradiated skin[j].scientific reports,2017,7(suppl 4):502-506)。

4、敏感性皮肤问题的发生率正在增加,在过去的几十年中,许多人报告他们的皮肤比以前更容易发生敏感反应。导致这种趋势的原因可能是多方面的。其中一些因素可能包括环境污染、气候变化、紫外线照射、不良饮食习惯、压力、化妆品使用等等。此外,人们对皮肤健康的关注程度也在增加,因此可能更多地报告敏感肌的症状。敏感性皮肤问题通常会出现皮肤泛红如红斑和红血丝等、瘙痒或刺痛、干燥或脱屑、紧绷、过敏或过度刺激,易受外界影响等症状。其中泛红指皮肤表面的血管扩张或血流量增加,导致局部皮肤呈现出红色的外观。这种现象通常是因为某些原因引起的血管扩张或炎症反应,导致局部皮肤的血流量增加,从而导致皮肤泛红。相较于其它症状,泛红是这些症状中主观性不明显,相对容易定量,且人们饱受困扰的症状。

5、传统的从动物血浆中逐级分离纯化得到的纤连蛋白,耗时长,得率低,步骤多,而且还存在安全性问题;而生物技术来源的纤连蛋白可以很好的规避这些风险。纤连蛋白因其独特的价值,越来越多的生物科技公司开始通过生物技术合成纤连蛋白:2019年,中国专利文献cn 110577592b利用大肠杆菌合成人源纤连蛋白片段fniii 12-14区段,具有促进细胞黏附,伤口愈合的作用。中国专利文献cn 110404608a利用酵母发酵表达由钠钾atp酶亚基结合域,纤维蛋白结合域,胶原蛋白结合域和肝素结合域拼接而成的片段,具有促进细胞黏附和生长的作用,并可以透皮吸收。中国专利文献cn 115785280 a利用毕赤酵母表达的方法合成重组人源纤连蛋白,包括1个胶原蛋白结合区域和2个重复的细胞整合素协同结合区域,经过理性设计后所得的人源纤连蛋白片段,具有良好的促进细胞黏附和细胞迁移的效果。

6、但是,目前无论是大肠杆菌作为模式生物合成的纤连蛋白,还是从毕赤酵母作为模式生物合成的纤连蛋白,都有功效不确定,成本不够低等问题。

7、目前,尚需要开发新的纤连蛋白功能片段相应的组合物。


技术实现思路

1、本发明人经过深入的研究和创造性的劳动,得到了一种人纤连蛋白功能片段。本发明人惊奇地发现,所述人纤连蛋白功能片段具有良好的人纤连蛋白活性。由此提供了下述发明:

2、本发明的一个方面涉及一种分离的多肽,其氨基酸序列如seq id no:1或seq idno:3所示。

3、本发明的分离的多肽为人纤连蛋白功能片段。

4、本发明的另一方面涉及一种分离的核酸,其编码本发明的分离的多肽。

5、在本发明的一些实施方式中,所述的分离的核酸,其序列如seq id no:2或seq idno:4所示。

6、本发明的再一方面涉及一种重组载体,其含有本发明中任一项所述的分离的核酸。

7、在本发明的一些实施方式中,所述的重组载体,其中所述重组载体为重组的真核表达载体。

8、本发明的再一方面涉及一种重组宿主细胞,其含有本发明中任一项所述的分离的核酸,或者含有本发明中任一项所述的重组载体。

9、根据本发明的分离的多肽、分离的核酸、重组载体或重组宿主细胞,其用于促进伤口愈合、促进细胞黏附、抑制il-6的表达、抑制tnf-α表达、改善皮肤过敏、促进皮肤修复、促进皮肤再生、抑制皮肤炎症、降低皮肤内血管扩张、促进皮肤褪红和/或改善皮肤激惹态。

10、本发明进行了划痕实验、细胞黏附实验和巨噬细胞的抗炎症实验。划痕实验很好了模拟了fn功能片段在伤口愈合中的作用,细胞黏附和抗炎症实验为fn功能片段舒敏功效提供了离体数据证明。

11、本发明的再一方面涉及一种组合物,其含有有效量的一种或两种本发明的分离的多肽,以及一种或多种药用或者化妆品用的辅料。

12、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其中,其含有作为唯一活性成分的本发明的分离的多肽,以及一种或多种药用或者化妆品用的辅料。

13、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其由本发明的分离的多肽,以及一种或多种药用或者化妆品用的辅料组成。

14、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其中,所述辅料为选自保湿剂、流变改性剂和防腐剂中的一种或多种。

15、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其中,所述辅料包括保湿剂和流变改性剂;优选地,还包括防腐剂。

16、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其中,所述保湿剂选自甘油、丁二醇、戊二醇和己二醇中的一种或多种。

17、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其中,所述流变改性剂选自黄原胶、凝胶多糖、瓜尔豆胶、刺槐豆胶、魔芋胶、果胶、纤维素、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、卡波姆和丙烯酸(酯)类共聚物中的一种或多种。

18、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其中,所述防腐剂选自对羟基苯乙酮、辛酰羟肟酸、苯甲醇和苯氧乙醇中的一种或多种。

19、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其中,按照100重量份的组合物计算,本发明的分离的多肽为至少0.001重量份、至少0.002重量份、至少0.003重量份、至少0.004重量份、至少0.005重量份、至少0.006重量份、0.001-1重量份、0.001-0.1重量份或0.006重量份。

20、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其包含如下组分或者由如下组分组成:

21、本发明的多肽0.001-1重量份、甘油1-5重量份、丁二醇1-10重量份、黄原胶0.05-0.5重量份、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.1-0.5重量份、对羟基苯乙酮0.1-1.0重量份、戊二醇0.5-2重量份;优选地,补水至组合物总量为50-200重量份。

22、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其包含如下组分或者由如下组分组成:

23、本发明的分离的多肽0.001-0.1重量份、甘油3-5重量份、丁二醇4-6重量份、黄原胶0.02-0.15重量份、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.1-0.5重量份、对羟基苯乙酮0.4-0.6重量份、戊二醇0.5-2重量份;优选地,补水至组合物总量为80-120重量份。

24、在本发明的一些实施方式中,所述的组合物,其包含如下组分或者由如下组分组成:

25、本发明的分离的多肽0.006重量份、甘油4重量份、丁二醇5重量份、黄原胶0.1份重量份、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.1重量份、对羟基苯乙酮0.5重量份、戊二醇1重量份;优选地,补水至组合物总量为100重量份。

26、根据本发明的组合物,其用于促进伤口愈合、促进细胞黏附、抑制il-6的表达、抑制tnf-α表达、改善皮肤过敏、促进皮肤修复、促进皮肤再生、抑制皮肤炎症、降低皮肤内血管扩张、促进皮肤褪红和/或改善皮肤激惹态。

27、通过检测0.3%的烟酸甲酯刺激皮肤前后的皮肤血红素含量的变化和visia cr的a*值变化可以发现0.3%的烟酸甲酯刺激皮肤后,血红素含量和visia cr的a*值有明显的上升趋势,说明刺激有效。使用组合物后可以在5分钟快速明显降低手前臂内侧皮肤的visia cr的a*值,45分钟快速明显降低手前臂内侧的血红素含量。

28、本发明的组合物给药剂量取决于许多因素,例如所要预防或治疗适应症或者症状的性质和严重程度,受试者的性别、年龄、体重及个体反应、给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个,例如二、三或四个剂量形式给药。

29、可改变本发明组合物中分离的多肽的实际剂量水平,以便所得的组合物能有效针对具体患者和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是,本领域的做法是,分离的多肽的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始,逐渐增加剂量,直到得到所需的效果。

30、本发明的再一方面涉及本发明的分离的多肽或者本发明的组合物在制备用于促进伤口愈合、促进细胞黏附、抑制il-6的表达、抑制tnf-α表达、改善皮肤过敏、促进皮肤修复、促进皮肤再生、抑制皮肤炎症、降低皮肤内血管扩张、促进皮肤褪红和/或改善皮肤激惹态的药物中的用途。

31、本发明的再一方面涉及一种促进伤口愈合、促进细胞黏附、抑制il-6的表达、抑制tnf-α表达、改善皮肤过敏、促进皮肤修复、促进皮肤再生、抑制皮肤炎症、降低皮肤内血管扩张、促进皮肤褪红和/或改善皮肤激惹态的方法,包括给予有需求的受试者以有效量的本发明的分离的多肽的步骤。

32、本发明中,术语“皮肤激惹态”是指敏感性皮肤综合征,它是一种高度敏感的皮肤亚健康状态,处于此种状态下的皮肤极易受到各种因素的激惹而产生刺痛、烧灼、紧绷、瘙痒等主观症状。

33、本发明中,术语“舒敏”是指舒缓皮肤敏感,包括泛红、皮肤受损等症状。

34、本发明,术语“有效量”是指可在受试者中实现预防或治疗本发明所述的适应症或者症状,或减轻和/或缓解所述适应症或者症状的本发明分离的多肽的量。

35、发明的有益效果

36、本发明取得了如下技术效果中的一种或多种:

37、(1)获得了高表达、高活性、低成本的重组fn功能片段。

38、(2)本发明的分离的多肽或本发明的组合物能够有效地促进伤口愈合。

39、(3)本发明的分离的多肽或本发明的组合物能够有效地改善皮肤过敏、促进皮肤修复或皮肤再生。

40、(4)本发明的分离的多肽或本发明的组合物能够有效地抑制皮肤炎症。

41、(5)本发明的分离的多肽或本发明的组合物能够有效地降低皮肤内血管扩张、促进皮肤褪红和/或改善皮肤激惹态。

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