超低分子透明质酸发酵液、含其产品、及其制备和应用的制作方法

本技术属于化妆品，尤其涉及一种超低分子透明质酸发酵液、含其产品、及其制备和应用。

背景技术：

1、透明质酸（hyaluronic acid，ha），又称玻尿酸，是一种以葡萄糖醛酸和n-乙酰氨基葡萄糖胺为双糖单位交替链接而成的黏多糖。是人体真皮层、眼睛及关节中的重要组分。透明质酸的分子量分布广泛，不同分子量的ha作用于皮肤的部位不同，也会发挥不同的功效。

2、超低分子ha：分子量为1万以下，会透皮吸收至真皮层，深层锁水，肌底养护。目前对于超低分子量的透明质酸的制备工艺主要有两种，分别为酸碱分解法及酶解法。其中，酸碱分解法会破坏透明质酸的分子结构，易导致制得的产品附有异味，设备要求较高；而可对大分子透明质酸进行特异性剪切的酶解法，采用的酶来源于产酶微生物，在纯化过程中需严格控制降解条件，在保证酶活的情况下去除杂蛋白，因而导致制造成本较高，浪费资源。目前，获取超低分子量透明质酸的常用方法是上述两者的综合，首先获取超高分子量透明质酸，经过酸碱降解成大分子或低分子透明质酸，随后采用酶解法获得超低分子量透明质酸，期间还需经过除杂、醇沉等步骤，工艺繁琐，增加工艺制造成本。

3、因此，本领域亟需研发一种可高效制备超低分子透明质酸的方法，且工艺简单，减少化学试剂使用量，制备成本低，适用于工业化生产，并保证制得的超低分子透明质酸具有理想的美容功效，且无异味。

技术实现思路

1、本技术所要解决的技术问题是克服现有技术中制备超低分子透明质酸的方法会破坏透明质酸结构、制得产品有异味、生产成本高或不适合工业化生产等缺陷，而提供一种超低分子透明质酸发酵液、含其产品、及其制备和应用。本技术采用特定混合酿酒酵母菌发酵剪切高分子透明质酸钠，制得超低分子透明质酸发酵液，提高原料高分子透明质酸钠的利用率，反应条件温和，减少化学试剂使用量，改善产品味道，并且制得的超低分子透明质酸发酵液更为天然、纯净、温和；提取工艺简单，设备要求较低，有效控制原料成本，实现节能环保。并且制得的超低分子透明质酸发酵液具有理想的抗氧化功效、修复肌肤功效和保湿功效，为超低分子透明质酸的制备提供新思路。

2、本技术采用以下技术方案解决上述技术问题：

3、本技术提供一种超低分子透明质酸发酵液的制备方法，其包括如下步骤：将酿酒酵母菌接种到发酵底物中，经有氧发酵培养，灭菌，制得所述超低分子透明质酸发酵液；

4、其中，所述发酵底物包括粘均分子量为120万~130万的高分子透明质酸钠和水；所述高分子透明质酸钠占所述发酵底物的质量百分比为0.1%~0.5%；所述酿酒酵母菌包括购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（cicc），保藏编号为cicc 1747酿酒酵母菌和保藏编号为cicc 1308的酿酒酵母菌；单位质量的所述发酵底物中接种的所述酿酒酵母菌的数量为107~2×107cfu/g。

5、本技术中，所述粘均分子量为使用乌氏粘度计测试并计算得到。所述粘均分子量测试时的温度为25℃。

6、一些实施例中，保藏编号为cicc 1747的酿酒酵母菌和保藏编号为cicc 1308的酿酒酵母菌的接种量比可为1：（0.5~2），较佳地为1：（0.8~1）。

7、一些实施例中，所述酿酒酵母菌可按照本领域常规以酿酒酵母菌菌液的形式添加，所述酿酒酵母菌菌液中所述酿酒酵母菌的浓度可为105~109cfu/ml。

8、一些实施例中，所述有氧发酵培养的方法可为本领域常规，一般可在摇床上进行，所述摇床的转速可为250~300rpm，较佳地为270~280 rpm。

9、一些实施例中，所述有氧发酵培养的时间可为30~48h，较佳地为35~40h。

10、一些实施例中，所述有氧发酵培养的温度可为25~35℃，较佳地为28~30℃。

11、一些实施例中，所述有氧发酵培养的操作后还可进一步包括离心，收集上清液的操作。

12、其中，所述离心的转速可为本领域常规，一般可为3000~5000rpm，例如4800rpm。

13、其中，所述离心的时间可为本领域常规，一般可为20~40min，例如30min。

14、一些实施例中，所述灭菌的条件和方法可为本领域常规，一般可为高温灭菌法。

15、当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，一般可为95~105℃，例如100℃。

16、当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，一般可为30~40min，较佳地为30~35min。

17、一些实施例中，所述灭菌的操作后，还可进一步包括与防腐剂混合的操作。

18、与所述防腐剂混合的过程中，所述混合的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为70~80℃，更佳地为70~75℃。

19、与所述防腐剂混合的过程中，所述防腐剂可按照本领域常规包括对羟基苯乙酮和/或1,2-己二醇。

20、当所述防腐剂包括所述对羟基苯乙酮和所述1,2-己二醇时，所述对羟基苯乙酮占所述灭菌后制得物料的质量百分数可为0.5%~1%，所述1,2-己二醇占所述灭菌后制得物料的质量百分数可为0.5%~2%；较佳地，所述对羟基苯乙酮占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5%，所述1,2-己二醇占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5%。

21、一些实施例中，所述发酵底物在使用前还可按照本领域常规包括灭菌的操作。

22、其中，对所述发酵底物进行所述灭菌的条件和方法可为本领域该类操作常规的条件和方法，一般可为高温灭菌法。

23、当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，一般可为95~105℃，例如100℃。

24、当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，一般可为30~40min。

25、其中，所述发酵底物经所述灭菌的操作后还可进一步包括降至室温的操作。

26、本技术还提供一种超低分子透明质酸发酵液，其由如上所述的超低分子透明质酸发酵液的制备方法制得。

27、本技术还提供一种如上所述的超低分子透明质酸发酵液作为添加剂或作为基底在制备皮肤外用剂中的应用。

28、一些实施例中，所述超低分子透明质酸发酵液可作为所述皮肤外用剂中的抗氧化活性成分、修复肌肤活性成分和保湿活性成分中至少一种。

29、本技术还提供一种皮肤外用剂，其包括如上所述的超低分子透明质酸发酵液。

30、一些实施例中，所述皮肤外用剂中还可进一步包括本领域常规使用的活性成分，一般可包括美白活性成分、保湿活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分和抗氧化活性成分中的至少一种。

31、一些实施例中，所述皮肤外用剂可按照本领域常规包括但不限于面膜、精华或爽肤水。

32、一些实施例中，所述超低分子透明质酸发酵液占所述皮肤外用剂的质量百分比可为5%~99%，较佳地为60%~99%。

33、一些实施例中，所述室温一般指15~40℃。

34、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

35、本技术所用试剂和原料均市售可得。

36、本技术的积极进步效果在于：本技术采用特定混合酿酒酵母菌发酵剪切高分子透明质酸钠，制得超低分子透明质酸发酵液，提高原料高分子透明质酸钠的利用率，反应条件温和，减少化学试剂使用量，改善产品味道，并且制得的超低分子透明质酸发酵液更为天然、纯净、温和；提取工艺简单，设备要求较低，有效控制制备成本，实现节能环保，为超低分子透明质酸的制备提供新思路。并且制得的超低分子透明质酸发酵液具有理想的抗氧化功效、修复肌肤功效和保湿功效。