一种长链非编码RNA在制备治疗心肌肥厚和/或心力衰竭的药物中的应用

本发明涉及生物医药工程，具体地，涉及一种长链非编码rna在制备治疗心肌肥厚和/或心力衰竭的药物中的应用。

背景技术：

1、心力衰竭是多种心血管疾病的“最后的战场”(终末阶段)。心肌肥厚是心力衰竭发生发展过程中的重要病理生理过程，是心力衰竭的重要干预靶标。心肌细胞的质量和体积增大是心肌肥厚的一个显著特征，导致这一现象的决定性因素是蛋白合成速度增加并超过了蛋白分解速度。所以干预蛋白质翻译或可抑制心肌肥厚发生发展。

2、已有研究表明，通过基因或药物干预核糖体调控蛋白抑制翻译的确可以抑制心肌肥厚的发生。然而，蛋白编码基因组织特异性较低，核糖体功能调控蛋白往往广泛存在于全身多个组织器官，若以这些蛋白作为靶点系统性抑制翻译功能，难以避免发生心脏以外的不良反应。这些风险对于心力衰竭的治疗显然是不能接受的。因此，寻找心肌特异性的核糖体翻译功能调控因子或成为心肌肥厚的有效治疗靶点。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中缺少心力衰竭和心肌肥厚的有效治疗靶点的问题，本发明提供了一种长链非编码rna在制备治疗心肌肥厚和/或心力衰竭的药物中的应用。

2、本发明的第一个目的是提供一种长链非编码rna。

3、本发明的第二个目的是提供一种重组表达载体。

4、本发明的第三个目的是提供一种病毒。

5、本发明的第四个目的是提供促进长链非编码rna表达的试剂在制备治疗心肌肥厚和/或心力衰竭的药物中的应用。

6、本发明的第五个目的是提供促进长链非编码rna表达的试剂在制备治疗心肌纤维化的药物中的应用。

7、本发明的第六个目的是提供促进长链非编码rna表达的试剂在制备治疗心脏主动脉弓缩窄的药物中的应用。

8、为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

9、长链非编码rna(long non-coding rna，lncrna)是长于200nt且不具备蛋白翻译功能的rna分子，在细胞内被发现通过多种机制发挥生物学功能。研究表明，lncrna表达的组织特异性显著高于蛋白编码基因。若选取心肌特异性lncrna作为心肌肥厚治疗靶点，理论上可有效避免心脏外的不良反应。而既往研究发现，部分lncrna在细胞内与核糖体结合，且这些核糖体结合lncrna大多数不翻译出蛋白。因此，这些与核糖体结合的lncrna很可能发挥着调控核糖体翻译的功能。故寻找心脏特异性的核糖体结合lncrna或可成为治疗心肌肥厚的重要靶点。

10、申请人在前期研究中发现，cardinal(ensmusg00000085162)是一个心肌特异性且与核糖体结合的lncrna，本发明分别在体外和体内的实验中，通过缺失cardinal和过表达cardinal，证实cardinal具有抑制核糖体翻译从而改善心肌肥厚、心肌纤维化和心力衰竭的作用。

11、本发明请求保护以下内容：

12、一种长链非编码rna，所述长链非编码rna即为cardinal，即ensembl数据库中的ensmusg00000085162基因，其核苷酸序列如seq id no.1所示。

13、一种重组表达载体，所述重组表达载体为连接有上述cdna的载体。

14、一种病毒，由上述重组表达载体和辅助载体共转染细胞得到。

15、优选地，所述病毒为腺病毒和/或腺相关病毒。

16、更优选地，所述病毒为腺病毒。

17、进一步优选地，所述重组表达载体以pdc-mcmv-mcs-cmv-egfp载体(同pubmed文献(pmid:33677093)中的“the adenoviral empty vector harboring the murinecytomegalovirus(mcmv)promoter”)为骨架。

18、更进一步优选地，所述重组表达载体以所述pdc-mcmv-mcs-cmv-egfp载体为骨架，所述长链非编码rna的cdna设置于xmai位点和noti位点之间，所述cdna的核苷酸序列如seqid no.1所示。

19、更进一步优选地，所述腺病毒的辅助载体包括pad-bhglox(delta)e1,e3载体。

20、更优选地，所述病毒为腺相关病毒。

21、进一步优选地，所述重组表达载体以av-9-pv1967载体为骨架。

22、更进一步优选地，所述重组表达载体以av-9-pv1967载体为骨架，所述长链非编码rna的cdna序列设置于nhei位点和sali位点之间，所述cdna的核苷酸序列如seq id no.1所示。

23、更进一步优选地，所述腺相关病毒的辅助载体包括aav9:rep-cap载体和paddeltaf6载体。

24、促进长链非编码rna表达的试剂在制备治疗心肌肥厚和/或心力衰竭的药物中的应用，所述长链非编码rna的cdna的核苷酸序列如seq id no.1所示。

25、促进长链非编码rna表达的试剂在制备治疗心肌纤维化的药物中的应用，所述长链非编码rna的核苷酸序列如seq id no.1所示。

26、促进长链非编码rna表达的试剂在制备治疗心脏主动脉弓缩窄的药物中的应用，所述长链非编码rna的核苷酸序列如seq id no.1所示。

27、优选地，所述试剂包括过表达所述长链非编码rna的重组表达载体。

28、优选地，所述试剂包含过表达所述长链非编码rna的病毒，所述病毒由表达所述长链非编码rna的重组表达载体和辅助载体共转染细胞得到。

29、更优选地，所述病毒为腺病毒和/或腺相关病毒。

30、进一步优选地，所述病毒为腺病毒。

31、更进一步优选地，所述重组表达载体以pdc-mcmv-mcs-cmv-egfp载体(同pubmed文献(pmid:33677093)中的“the adenoviral empty vector harboring the murinecytomegalovirus(mcmv)promoter”)为骨架。

32、最优选地，所述重组表达载体以所述pdc-mcmv-mcs-cmv-egfp载体为骨架，所述长链非编码rna的cdna设置于xmai位点和noti位点之间，所述cdna的核苷酸序列如seq idno.1所示。

33、更进一步优选地，所述腺病毒的辅助载体包括pad-bhglox(delta)e1,e3载体。

34、进一步优选地，所述病毒为腺相关病毒。

35、更进一步优选地，所述重组表达载体以av-9-pv1967载体为骨架。

36、最优选地，所述重组表达载体以av-9-pv1967载体为骨架，所述长链非编码rna的cdna序列设置于nhei位点和sali位点之间，所述cdna的核苷酸序列如seq id no.1所示。

37、更进一步优选地，所述腺相关病毒的辅助载体包括aav9:rep-cap载体和paddeltaf6载体。

38、一种用于治疗心肌纤维化、心肌肥厚、心力衰竭和/或心脏主动脉弓缩窄的药物，包含促进核苷酸序列如seq id no.1所示的长链非编码rna表达的试剂。

39、优选地，所述试剂包括过表达所述长链非编码rna的重组表达载体。

40、优选地，所述试剂包含过表达所述长链非编码rna的病毒，所述病毒由表达所述长链非编码rna的重组表达载体和辅助载体共转染细胞得到。

41、更优选地，所述病毒为腺病毒和/或腺相关病毒。

42、进一步优选地，所述病毒为腺病毒。

43、更进一步优选地，所述重组表达载体以pdc-mcmv-mcs-cmv-egfp载体(同pubmed文献(pmid:33677093)中的“the adenoviral empty vector harboring the murinecytomegalovirus(mcmv)promoter”)为骨架。

44、最优选地，所述重组表达载体以所述pdc-mcmv-mcs-cmv-egfp载体为骨架，所述长链非编码rna的cdna设置于xmai位点和noti位点之间，所述cdna的核苷酸序列如seq idno.1所示。

45、更进一步优选地，所述腺病毒的辅助载体包括pad-bhglox(delta)e1,e3载体。

46、进一步优选地，所述病毒为腺相关病毒。

47、更进一步优选地，所述重组表达载体以av-9-pv1967载体为骨架。

48、最优选地，所述重组表达载体以av-9-pv1967载体为骨架，所述长链非编码rna的cdna序列设置于nhei位点和sali位点之间，所述cdna的核苷酸序列如seq id no.1所示。

49、更进一步优选地，所述腺相关病毒的辅助载体包括aav9:rep-cap载体和paddeltaf6载体。

50、长链非编码rna表达量的检测试剂在制备诊断心肌纤维化、心肌肥厚、心力衰竭和/或心脏主动脉弓缩窄的产品中的应用，所述长链非编码rna的核苷酸序列如seq idno.1所示，所述长链非编码rna与心肌纤维化、心肌肥厚、心力衰竭和/或心脏主动脉弓缩窄负相关。

51、优选地，所述检测试剂包括以所述长链非编码rna为扩增靶标的引物。

52、更优选地，所述引物的核苷酸序列如seq id no.12～13所示。

53、优选地，所述检测试剂还包括pcr反应试剂。

54、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

55、本发明首次证实cardinal是心力衰竭的重要调控因子，在心肌中过表达cardinal可抑制心肌细胞的核糖体翻译、心肌肥厚和心肌纤维化，改善心力衰竭。cardinal是改善心力衰竭的基因治疗靶点，本发明为今后治疗心力衰竭提供了新的技术选择。