一种用于妊娠糖尿病诊断的标记物及其应用

本发明属于生物，更具体涉及生物检测领域，更具体涉及一种用于妊娠糖尿病相关的标记物及其应用。

背景技术：

1、本部分的陈述仅仅是提供了与本发明相关的背景技术信息，不必然构成在先技术。

2、妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,gdm)是产科常见的妊娠期并发症，其特点是妊娠期发生或首次发现的糖耐量异常，可在妊娠期并发子痫前期、自然流产、巨大儿、畸形儿等不良妊娠结局，严重影响母儿健康。gdm不仅在妊娠期对母儿健康造成损害，还会显著升高孕妇及其子女将来罹患肥胖、2型糖尿病等代谢性疾病及心血管疾病的风险。

3、目前国际上对gdm的筛查和诊断标准尚未完全统一，目前中国的筛查及诊断gdm的金标准是在孕中期行口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,ogtt)。但ogtt方法对孕期胃肠功能减弱以及伴有妊娠期呕吐的孕妇、gdm的高危孕妇，都存在孕妇不适及风险。另外，ogtt作为gdm诊断金标准，无法做到个体化精准诊断及早期筛查。

4、临床缺乏准确率高、特异性好、简单可行的筛查及诊断标记物。因此需要探索gdm的新型诊断标记物，协助做到gdm的精准、个体化医疗，降低母儿不良结局。

技术实现思路

1、为克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种用于妊娠糖尿病gdm诊断标记物，用于早期筛查、准确诊断、监测妊娠期糖尿病。同时提供多种诊断方案，供临床医师决策，做到个体化的诊疗服务。

2、为实现上述目的，本发明的一个或多个实施例提供了如下技术方案：

3、本发明的第一方面，提供一种用于妊娠糖尿病gdm诊断的标志物，所述标志物包括硫氧还蛋白相关跨膜蛋白1tmx1；

4、其中，所述tmx1的mrna序列如seq id no.1所示，具体的，

5、agtgggagctgcgaccgcgctccctgtgaggtgggcaagcggcgaaatggcgccctccgggagtcttgcagttcccctggcagtcctggtgctgttgctttggggtgctccctggacgcacgggcggcggagcaacgttcgcgtcatcacggacgagaactggagagaactgctggaaggagactggatgatagaattttatgccccgtggtgccctgcttgtcaaaatcttcaaccggaatgggaaagttttgctgaatggggagaagatcttgaggttaatattgcgaaagtagatgtcacagagcagccaggactgagtggacggtttatcataactgctcttcctactatttatcattgtaaagatggtgaatttaggcgctatcagggtccaaggactaagaaggacttcataaactttataagtgataaagagtggaagagtattgagcccgtttcatcatggtttggtccaggttctgttctgatgagtagtatgtcagcactctttcagctatctatgtggatcaggacttgccataactactttattgaagaccttggattgccagtgtggggatcatatactgtttttgctttagcaactctgttttccggactgttattaggactctgtatgatatttgtggcagattgcctttgtccttcaaaaaggcgcagaccacagccgtacccatacccttcaaaaaaattattatcagaatctgcacaacctttgaaaaaagtggaggaggaacaagaggcggatgaagaagatgtttcagaagaagaagctgaaagtaaagaaggaacaaacaaagactttccacagaatgccataagacaacgctctctgggtccatcattggccacagataaatcctagttaaattttatagttatcttaatattatgattttgataaaaacagaagattgatcattttgtttggtttgaagtgaactgtgacttttttgaatattgcagggttcagtctagattgtcattaaattgaagagtctacattcagaacataaaagcactaggtatacaagtttgaaatatgatttaagcacagtatgatggtttaaatagttctctaatttttgaaaaatcgtgccaagcaataagatttatgtatatttgtttaataataacctatttcaagtctgagttttgaaaatttacatttcccaagtattgcattattgaggtatttaagaagattattttagagaaaaatatttctcatttgatataatttttctctgtttcactgtgtgaaaaaaagaagatatttcccataaatgggaagtttgcccattgtctcaagaaatgtgtatttcagtgacaatttcgtggtctttttagaggtatattccaaaatttccttgtatttttaggttatgcaactaataaaaactaccttacattaattaattacagttttctacacatggtaatacaggatatgctactgatttaggaagtttttaagttcatggtattctcttgattccaacaaagtttgattttctcttgtatttttcttacttactatgggttacattttttatttttcaaattggatgataatttcttggaaacattttttatgttttagtaaacagtatttttttgttgtttcaaactgaagtttactgagagatccatcaaattgaacaatctgttgtaatttaaaattttggccacttttttcagattttacatcattcttgctgaacttcaacttgaaattgtttttttttttttttctttttggatgtgaaggtgaacattcctgatttttgtctgatgtgaaaaagccttggtattttacattttgaaaattcaaagaagcttaatataaaagtttgcattctactcaggaaaaagcatcttcttgtatatgtcttaaatgtatttttgtcctcatatacagaaagttcttaattgattttacagtctgtaatgcttgatgttttaaaataataacatttttatattttttaaaagacaaacttcatattatcctgtgttctttcctgactggtaatattgtgtgggatttcacaggtaaaagtcagtaggatggaacattttagtgtatttttactccttaaagagctagaatacatagttttcaccttaaaagaagggggaaaatcataaatacaatgaatcaactgaccattacgtagtagacaatttctgtaatgtccccttctttctaggctctgttgctgtgtgaatccattagatttacagtatcgtaatatacaagttttctttaaagccctctcctttagaatttaaaatattgtaccattgaagagtttggatgtgtaacttgtgatgccttagaaaaatatcctaagcacaaaataaacctttctaaccacttcattaaagctgaagaccagtatgatttctggttgctttttgaaggtatgctttattactttgtatttaacgatgttcagatgagtagttgtgtgttcctatatatgtacttgatatgtgtaatcaaaagactgccttctttttctattgagatgtttaaggacagtaatgctcattaatcaagcattttttttttttagtgttctagtatatgtgacatggccaatttttttattagaaaatatgtgaccagaaagattctatagagtaaaaaatcaaagcaaaacaaaaaccacaaaaagacccctgtactatagaaaatgtaaagttggctgaacagatagggtcttgaaatttcaggaaacatataatctcacggttcttaaagattgtcactgtagacatctgagtaattaattttcagttagtaacaggcttatagaaactttgggattatttacaaatggtttaggaaagaataaggtatagtaaaagtaatatcctggagaattctgggccacctacccaccataatcaattcagctgtactactgaagtattgtaaaatctgatctctagaggaaaatacagtattctaccttacgttgtgtaaatacttaatgattatcagaaagactgaaaaaagttttaatgaagaattctggctacatctaacagctgccatttaccaagtacctactggagctttgttgttttcttgtatttattaatttagtcctaatgacaactgcaagacaggtaagcattgcacatctttcaggtgagtcagcccagaggtgtggtacaaataggtaaaatttgaatctaattcttgttccaaatctttttttgtttgtttttgtttttgttttttttcttcagtgtgggtacatgaaattcagcaatctcttattttggtcttttttttttttttgagacagagtttcactcttgttgcccaggctggagtgcaatggcatgatcttggctcactgcaacctccacctcctgggttcaagcagttcttctgcctcagcctcccaagtagctgggattacaggcatgtgccaccatgcccggctattattttggtcttaaaatttcactcctgtcagaatgtaggagtgaataaatgctattcataaataaccataattattcagtatttgcagtctcgtgatgttggttattgcataaagtaagttattgcagtaaatgatgctttagaaagcaattttctctcatcagtttcgtccttattcagccttacacaaaaaaaggcatagttctgggcttaattgtgatgtaattaaaattattgagtgaacattttggctcatattttatgacattgtagttcatccccatggtcaatttaaggtagagttcttacaatatattactttcaatataggtattttattaataagaatttatttcagttggacttattaaatgagtggttttgctgagtgtatgagtctataaataaaattttaattgaacatcattggagatttagatatgttggtactgcttatctagcaacttttgtatttgtgaaaccattaaaactagagtaacaataaatttaagttggaattttggtaatatgtaaa；

6、本发明的又一具体实施方式中，所述tmx1的cds区核苷酸序列如seq id no.2所示，具体为，

7、atggcgccctccgggagtcttgcagttcccctggcagtcctggtgctgttgctttggggtgctccctggacgcacgggcggcggagcaacgttcgcgtcatcacggacgagaactggagagaactgctggaaggagactggatgatagaattttatgccccgtggtgccctgcttgtcaaaatcttcaaccggaatgggaaagttttgctgaatggggagaagatcttgaggttaatattgcgaaagtagatgtcacagagcagccaggactgagtggacggtttatcataactgctcttcctactatttatcattgtaaagatggtgaatttaggcgctatcagggtccaaggactaagaaggacttcataaactttataagtgataaagagtggaagagtattgagcccgtttcatcatggtttggtccaggttctgttctgatgagtagtatgtcagcactctttcagctatctatgtggatcaggacttgccataactactttattgaagaccttggattgccagtgtggggatcatatactgtttttgctttagcaactctgttttccggactgttattaggactctgtatgatatttgtggcagattgcctttgtccttcaaaaaggcgcagaccacagccgtacccatacccttcaaaaaaattattatcagaatctgcacaacctttgaaaaaagtggaggaggaacaagaggcggatgaagaagatgtttcagaagaagaagctgaaagtaaagaaggaacaaacaaagactttccacagaatgccataagacaacgctctctgggtccatcattggccacagataaatcctag。

8、优选的，所述tmx1的氨基酸序列如seq id no.3所示，具体的，氨基酸序列如下：

9、mapsgslavplavlvlllwgapwthgrrsnvrvitdenwrellegdwmiefyapwcpacqnlqpewesfaewgedlevniakvdvteqpglsgrfiitalptiyhckdgefrryqgprtkkdfinfisdkewksiepvsswfgpgsvlmssmsalfqlsmwirtchnyfiedlglpvwgsytvfalatlfsglllglcmifvadclcpskrrrpqpypypskkllsesaqplkkveeeqeadeedvseeeaeskegtnkdfpqnairqrslgpslatdks。

10、本发明的又一具体实施方式中，所述标志物取自胎盘、血液或血清；进一步地，所述胎盘为分娩当天的胎盘；所述血清取自怀孕24-26周的孕妇。

11、硫氧还蛋白相关跨膜蛋白1(tmx1)，其属于二硫键异构酶(pdi)家族成员之一，可在内质网中发挥分子伴侣及异构酶作用，促进底物蛋白的新生肽链的氧化折叠、形成正确的二硫键。本发明发现：与正常孕妇相比，gdm患者胎盘中tmx1的表达显著下调。进而检测gdm患者和正常孕妇孕期抗凝血液和血清中tmx1的表达情况，最终发现tmx1在gdm患者的胎盘rna、血液rna或血清蛋白3种生物样品中均表达下调，并且tmx1的表达与孕妇血糖负相关。

12、本发明的第二方面，提供一种用于检测第一方面所述的标志物的试剂，所述试剂包括引物和/或探针，其中，检测tmx1基因的引物分别为homo-tmx-200f和homo-tmx-200r；所述homo-tmx-200f如seq id no.4所示，所述homo-tmx-200r如seq id no.5所示。

13、本发明的又一具体实施方式中，所述试剂还包括检测tmx1蛋白的elisa检测试剂，包括辣根过氧化物酶标记的酶标包被板、酶标试剂、tmb显色液、标准品、洗涤液、终止液。

14、本发明的第三方面，提供第一方面所述的标志物和/或第二方面所述的时机在制备用于妊娠糖尿病诊断的试剂盒中的应用。

15、本发明的第四方面，提供一种用于妊娠糖尿病诊断的试剂盒，其包括第一方面所述的标记物和/或第二方面所述的试剂；

16、优选的，所述试剂盒还包括rna提取试剂、反转录试剂、和/或pcr扩增试剂；

17、或，所述试剂盒还包括elisa检测的组件，所述组件包括检测板、缓冲液。

18、本发明的第五方面，提供一种用于妊娠糖尿病诊断的系统，所述系统包括

19、i)分析模块，所述分析模块用于确定受试者的血液rna或血清蛋白质中选自权利要求1所述tmx1表达水平，以及；

20、ii)评估模块，所述评估模块用于根据i)中确定的所述tmx1表达水平预测受试者是否为妊娠糖尿病患者；

21、所述系统还包括结果输出模块，所述结果输出模块用于输出评估模块分析得到的结果。

22、本发明的又一具体实施方式中，所述分析模块还用于确定受试者口服葡萄糖耐量实验ogtt结果。

23、本发明的又一具体实施方式中，所述分析模块还用于确定受试者空腹血糖含量。

24、本发明提供的用于妊娠糖尿病诊断的标记物，可以作为一种医生诊断或治疗的辅助手段，进一步增强gdm诊断准确性。

25、以上一个或多个技术方案存在以下有益效果：

26、本发明首次发现了tmx1与妊娠期糖尿病相关，表现为gdm患者tmx1表达下调，并且在转录水平和蛋白水平都得到了一致性验证，可作为妊娠期糖尿病的诊断标记物。

27、本发明提供的gdm的诊断标记物及鉴定方法，经过统计学诊断效能评估，均具有较好的、甚至可替代金标准的诊断效能。相较传统的ogtt诊断，tmx1检测更准确、更特异、更简便高效，能够实现妊娠期糖尿病的精准诊断，提供个体化诊疗方案，从而减少孕妇的不依从性、降低不良妊娠结局，提供科学合理的孕期健康指导。

28、将tmx1的检测探针或elisa检测试剂制备形成试剂盒，便于大批量样本检测及临床推广。

29、另外，将单独tmx1表达量检测与ogtt或孕妇空腹血糖联合诊断gdm，做到简化诊断及精准诊断的效果，为临床医生提供多种科学则的诊断决策，进而做到个性化诊疗。

30、本发明附加方面的优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。