家蚕调控元件BmWb作为成虫体色标记靶点中的应用及方法

本发明涉及生物，具体涉及家蚕调控元件bmwb作为成虫体色标记靶点中的应用，还涉及制备蛾体色标记的蚕品种的方法。

背景技术：

1、蚕桑产业是我国历史悠久的重要特色产业，至今占据绝对的国际优势地位。家蚕是农业上最早发现和利用杂种优势的典范。一代杂交种的应用(华系和日系杂交)，充分发挥出蚕品种的生产潜能，显著提高了蚕种品质、蚕体健康性、蚕茧产量和质量，从而一次性提高养蚕生产效益20％左右，对蚕业经济发展贡献巨大。一代杂交种的“杂交率”是衡量蚕种质量的重要指标，若杂交率不高，则不能充分发挥杂交优势，给蚕农造成经济损失。现有幼虫斑纹等限性品种的应用，提高了性别鉴别的效率和准确度，有利于确保一代杂交种的高杂交率，但对分选后的操作错误和混杂不能起到最终的“把关”作用。选育带有蛾体色标记的新品种，不仅能弥补此缺陷，还能显著提高制种效率。但受育种技术和性状特点等因素影响，至今育成的蛾体色标记品种极少。利用基因编辑技术在现行品种亲本直接附加蛾体色标记，比传统杂交育种手段快捷。然而目前尚缺少适应基因编辑技术且无负面效应的蛾体色标记的遗传操作靶点。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种家蚕调控元件bmwb作为成虫体色标记靶点中的应用；本发明的目的之二在于提供一种制备蛾体色标记的蚕品种的方法。

2、为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、1、家蚕调控元件bmwb作为成虫体色标记靶点中的应用，所述调控元件bmwb存在于ws性状家蚕和野桑蚕样本中的一段30-40kb大小的插入片段，插入位点以家蚕p50t白蛾品系基因组为参考位于bomo_chr17：2558850位置。

4、本发明优选的，所述调控元件bmwb位于样本cns0362802的contig36:2786015-2744629(-)位置、位于样本cns0362803的contig47:2525630-2567024(+)位置、位于样本cns0362947的contig2:1374152-1407901(+)位置、位于样本cns0362947的contig2:1374152-1407901(+)位置、cns0363213的contig6:14316514-14273506(-)位置、位于样本cns0363438的contig37:2420110-2460971(+)位置、位于样本cns0363439的contig168:118794-155788(+)位置、位于样本cns0363440的contig76:271433-238533(-)位置、位于样本cns0363441的contig165:335188-366248(+)位置、位于样本cns0363442的contig73:899380-862539(-)位置、位于样本cns0363443的contig116:906978-873788(-)位置、位于样本cns0363444的contig52:132961-173979(+)位置、位于样本cns0363445的contig170:138900-97368(-)位置、位于样本cns0363446的contig13:864516-900183(+)位置、位于样本cns0363447的contig16:4823871-4788789(-)位置、位于样本cns0363448的contig294:331825-369192(+)位置、位于样本cns0363449的contig279:412506-446122(+)位置、位于样本cns0363450的contig16:1069120-1037150(-)位置、位于样本cns0363451的contig168:689088-727530(+)位置、位于样本cns0363453的contig197:779484-824855(+)位置、位于样本cns0363456的contig17:2436824-2469799(+)位置、位于样本cns0363457的contig30:2547057-2514081(-)位置、位于样本cns0363458的contig122:888322-852610(-)位置、位于样本cns0363459的contig79:1076966-1111696(+)位置、位于样本cns0363460的contig243:296823-262470(-)位置、位于样本cns0363462的contig189:263341-304956(+)位置、位于样本cns0363462的contig291:266971-230067(-)位置、位于样本cns0363463的contig203:766763-729281(-)位置、位于样本cns0363464的contig81:683630-652140(-)的位置、位于样本cns0363466的contig107:409385-372789(-)位置、位于样本cns0363467的contig31:1552865-1508566(-)的位置、位于样本cns0363468的contig225:681801-714825(+)位置、位于样本cns0363470的contig181:515410-547942(+)位置、位于样本cns0363471的contig67:553059-586383(+)的位置、位于样本cns0363472的contig271:366736-329888(-)位置、位于样本cns0363472的contig269:705375-672486(-)的位置、位于样本cns0363473的contig132:891653-926953(+)的位置、位于样本cns0363474的contig25:2038932-2001712(-)位置、位于样本cns0363476的contig102:794049-751828(-)位置、位于样本cns0363477的contig50:1022654-1055995(+)位置、位于样本cns0363478的contig35:27551-73678(+)位置、位于样本cns0363479的contig59:320582-356196(+)位置、位于样本cns0363480的contig40:1651266-1688377(+)位置、位于样本cns0363481的contig166:789002-821993(+)位置、位于样本cns0363482的contig83:908369-867956(-)位置、位于样本cns0363484的contig101:36644-72(-)位置，位于样本cns0363484的contig201:202205-239168(+)位置。

5、本发明优选的，所述调控元件bmwb位于seq id no.1与seq id no.2之间，或seqid no.1与seq id no.2单碱基序列变异的序列之间。

6、2、一种制备蛾体色标记的蚕品种的方法，敲除家蚕调控元件bmwb，获得的敲除家蚕bmwb调控元件ws品系蚕蛾体色变浅；或向白色蚕蛾品系定点转基因或敲入家蚕调控元件bmwb，获得的蚕蛾体色变黑；所述调控元件bmwb。

7、本发明优选的，所述敲除或敲入家蚕调控元件bmwb的方法是使用crispr/cas9基因编辑技术。

8、本发明优选的，所述crispr/cas9敲除的sgrna分别以seq id no.9～12所示序列为上游引物，seq id no.13所示序列为下游引物扩增得到。

9、本发明优选的，所述敲除家蚕调控元件bmwb的方法是将含有sgrna与cas9蛋白的crispr/cas9敲除体系注入非滞育蚕卵中，筛选转基因蚕蛾。

10、本发明优选的，所述crispr/cas9敲除体系由0.5μl浓度为1000ng/ul的cas9蛋白，3000ng sgrna，加水定容至5μl，混匀后37℃孵育15min。

11、本发明的有益效果在于：本发明家蚕蛾体色调控元件bmwb，该元件能够调控家蚕蛾体色且对蚕儿生长发育没有明显负面效应，因此该调控元件及其核心区域可以用作蛾体色标记的遗传操作元件；可以利用基因编辑技术对实用家蚕品种直接“加载”蛾体色标记，快速创制兼具优异产量性状与蛾体色标记的蚕品种，具有良好的应用前景。