Tau蛋白抗体及其应用的制作方法

本发明属于生物，涉及tau蛋白抗体及其应用。

背景技术：

1、tau蛋白是一种微管相关蛋白，在中枢神经系统的神经元非常丰富而少见于其它细胞，在中枢神经系统的星形胶质细胞和少突胶质细胞中表达量也很低。tau蛋白有缺陷并不再正常稳定微管时，可导致神经系统病变和失智症，如阿兹海默病。tau蛋白的多种蛋白异型体是由单个基因（人类基因组中为mapt）mrna的选择性剪接而形成的。

2、tau蛋白是一种高度可溶的微管相关蛋白（map）。与非神经元细胞相较，人体内tau更多地在神经元内发现。tau蛋白的主要功能之一是维持轴突微管的稳定性。而其它神经系统中的maps家族蛋白也有着相似的功能，这体现在tau敲除的小鼠并没有发现其脑组织的发育受到影响。这可能是在tau缺失后，其它maps家族蛋白在神经元内起到代偿tau的作用，从而继续维持轴突微管的稳定，保证脑功能的正常运作。tau并不在树突发挥功能，而主要作用在轴突远端维持微管的稳定性和必要的灵活性。

技术实现思路

1、为了弥补现有技术的不足，本发明提供了如下的技术方案：

2、本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其功能片段，其包含：

3、1）如seq id no:1所示的重链可变区cdr1；

4、2）如seq id no:2所示的重链可变区cdr2；

5、3）如yff所示的重链可变区cdr3；

6、4）如seq id no:3所示的轻链可变区cdr1；

7、5）如seq id no:4所示的轻链可变区cdr2；和

8、6）如seq id no:5所示的轻链可变区cdr3。

9、术语“cdr”和“互补决定区”可互换使用，并且是指抗体的参与结合至抗原的可变链的一部分。因此，cdr是“抗原结合位点”的一部分或者是“抗原结合位点”。在一些实施例中，单克隆抗体包含共同形成抗原结合位点的三个重链可变区cdr与三个轻链可变区cdr。“cdr”可指由本领域已知的任何方法(包括方法的组合)定义的cdr。

10、进一步，所述cdr的划分方式包括但不限于kabat、imgt、chothia、abm或contact编号系统。

11、进一步，所述cdr的划分方式为kabat规则。

12、进一步，所述kabat规则包括cdr1使用“cxxxxxxxx”的方式划分，cdr3使用“cxx+···+wgxg”的方式划分，其中x代表任何氨基酸。

13、术语“片段”或“功能性片段”可包括特定区域或特定氨基酸残基的插入、缺失、取代或其它选定修饰，条件是与未修饰的肽或蛋白质相比，片段的活性不会显著改变或受损。

14、进一步，所述单克隆抗体或其功能片段还包括：

15、1）如seq id no:6所示的重链可变区fr1；

16、2）如seq id no:7所示的重链可变区fr2；

17、3）如seq id no:8所示的重链可变区fr3；

18、4）如seq id no:9所示的重链可变区fr4；

19、5）如seq id no:11所示的重链可变区fr1；

20、6）如seq id no:12所示的重链可变区fr2；

21、7）如seq id no:13所示的重链可变区fr3；和

22、8）如seq id no:14所示的重链可变区fr4。

23、进一步，所述的单克隆抗体或其功能片段，其包括：

24、1）如seq id no:10的氨基酸序列所示的重链可变区；和

25、2）如seq id no:15的氨基酸序列所示的轻链可变区。

26、进一步，所述单克隆抗体或其功能片段还包括与单克隆抗体重链可操作地连接的第一信号肽，和/或与单克隆抗体可操作地连接的第二信号肽。

27、进一步，所述的单克隆抗体或其功能片段，其还包括：

28、1）如seq id no:31的氨基酸序列所示的第一信号肽；和/或

29、2）如seq id no:32的氨基酸序列所示的第二信号肽。

30、在本发明的上下文中，“信号肽”用于引导外源蛋白的分泌表达。“分泌”是指蛋白质或肽的分子在细胞内合成后被转运到细胞外。

31、在某些具体的实施例中，本发明所述的单克隆抗体或其功能片段与人tau特异性结合。在某些实施例中，依照本发明的抗体结合 tau 蛋白，其为人 tau 蛋白。在具体的实施例中，依照本发明的抗体为全长 igg1 抗体。

32、在某些具体的实施例中，本发明所述的单克隆抗体或其功能片段包括与seq idno:10的氨基酸序列具有如下同一性的氨基酸序列：至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%，每种可能性代表本公开的一个单独的实施例。

33、在某些具体的实施例中，本发明所述的单克隆抗体或其功能片段包括与seq idno:15的氨基酸序列具有如下同一性的氨基酸序列：至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%，每种可能性代表本公开的一个单独的实施例。

34、进一步，所述单克隆抗体或其功能片段为人抗体，但在某些可替代的实施例中，所述单克隆抗体可以是鼠抗体、嵌合抗体或人源化抗体。

35、在一些实施例中，依照本发明的抗体结合 tau 蛋白，其为聚集的微管相关的和/或高磷酸化 tau 蛋白，诸如成对螺旋丝 (phf) 中存在的。

36、本发明提供了一种免疫偶联物，其包含与治疗剂连接的前面所述的单克隆抗体或其功能片段。

37、进一步，所述治疗剂包括细胞毒性剂、激素制剂、靶向小分子制剂、蛋白酶体抑制剂、化疗剂、溶瘤药物、细胞因子、共刺激分子的激活剂、抑制性分子的抑制剂。

38、如本文所用，术语“治疗剂”是能够在疾病、障碍或状况的治疗或预防中提供治疗活性、反应或作用的任何分子、物质或化合物，包括诊断和预防剂。如本文其他部分所述，术语“治疗剂”不包括或涵盖辅助表位或佐剂，其在本说明书中被单独描述并且是本文公开的方法、干燥制剂、组合物、用途和试剂盒中可包括或可不包括的不同组分。

39、本发明提供了一种组合物，其包含前面所述的单克隆抗体或其功能片段，前面所述的免疫偶联物，和药物可接受的载体。

40、进一步，所述药物可接受的载体包括通过静脉注射、皮下注射、腹腔注射、肌肉注射、玻璃体注射所需的载体。

41、在某些具体的实施例中，所述药物可接受的载体包括生理盐水、d5w、林格氏乳酸、透明质酸酶、溶液张力调节剂、溶液渗透压调节剂、冻干粉的冻干保护剂、降粘辅料、缓冲液或表面活性剂。

42、本发明提供了一种分离的核酸分子及其载体，其编码前面所述的单克隆抗体或其功能片段。

43、进一步，编码重链可变区的cdr1、cdr2、cdr3核酸分子具有与seq id no:16、seqid no:17、tattttttc所示的核苷酸序列至少95%序列同一性的核苷酸序列。

44、进一步，编码轻链可变区的cdr1、cdr2、cdr3核酸分子具有与seq id no:18、19、20所示的核苷酸序列至少95%序列同一性的核苷酸序列。

45、进一步，编码重链可变区的fr1、fr2、fr3、fr4核酸分子具有与seq id no:21、22、23、24所示的核苷酸序列至少95%序列同一性的核苷酸序列。

46、进一步，编码轻链可变区的fr1、fr2、fr3、fr4核酸分子具有与seq id no:26、27、28、29所示的核苷酸序列至少95%序列同一性的核苷酸序列。

47、进一步，编码重链可变区的核酸分子具有与seq id no:25所示的核苷酸序列至少95%序列同一性的核苷酸序列。

48、进一步，编码轻链可变区的核酸分子具有与seq id no:30所示的核苷酸序列至少95%序列同一性的核苷酸序列。

49、进一步，编码单克隆抗体重链的第一信号肽的核酸分子具有与seq id no:33所示的核苷酸序列至少95%序列同一性的核苷酸序列。

50、进一步，编码单克隆抗体重链的第二信号肽的核酸分子具有与seq id no:34所示的核苷酸序列至少95%序列同一性的核苷酸序列。

51、在某些具体的实施例中，本发明所述的单克隆抗体或其功能片段包括与seq idno:25的核苷酸序列具有如下同一性的核苷酸序列：至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%，每种可能性代表本公开的一个单独的实施例。

52、在某些具体的实施例中，本发明所述的单克隆抗体或其功能片段包括与seq idno:30的核苷酸序列具有如下同一性的核苷酸序列：至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%，每种可能性代表本公开的一个单独的实施例。

53、进一步，所述载体包括质粒常规载体、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、piggybac载体或sleeping beauty转座载体。

54、本发明提供了一种细胞，其包含前面所述的分离的核酸分子及其载体。

55、进一步，所述细胞包括原核细胞和/或真核细胞。

56、进一步，所述原核细胞包括细菌，放线菌、蓝细菌、支/衣原体等。

57、进一步，所述真核细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、鸟类细胞、植物细胞、酵母细胞。

58、在某些具体的实施例中，本发明使用的承载单克隆抗体或其功能片段的核苷酸和/或氨基酸序列的细胞为杂交瘤细胞。

59、在某些实施例中，本发明涉及生成抗体的方法，其包括培养此类宿主细胞，使得该抗体生成。

60、本发明提供了前面所述的单克隆抗体或其功能片段在制备用于诊断、治疗或预防以表达tau蛋白为特征的疾病的产品中的用途。

61、进一步，所述产品包括试剂盒、试纸、药物、药物组合物、芯片。

62、在某些具体的实施例中，本发明提供了一种治疗或预防以表达tau蛋白为特征的疾病的产品，包括给受试者施用有效治疗或预防该疾病的量的本发明的单克隆抗体或其功能片段。所述疾病可以是，例如，阿尔兹海默症、pick病（pick′s disease）、进行性核上性麻痹（progressive supranuclear palsy， psp）、皮质基底节变性（corticobasaldegeneration）、嗜银颗粒病（argyrophilic grain disease， agd）、胶质细胞球形包涵体tau蛋白病（globular glial tauopathy）、进行性皮质下胶质细胞增生症（progressivesubcortical gliosis）、仅有神经原纤维缠结痴呆（neurofibrillary tangle-onlydementia，nft-dementia）、星形胶质细胞斑（astrocytic plaques）等。

63、在一些实施例中，依照本发明的抗体可用于治疗个体中的 tau 蛋白相关疾病或病症。在特定的实施例中，依照本发明的抗体可用于治疗个体中的 tau 病。在一个具体的实施例中，依照本发明的抗体可用于治疗个体中的阿尔茨海默氏病 (ad)。在一个具体的实施例中，依照本发明的抗体可用于治疗个体中的pick病。在一些实施例中，依照本发明的抗体可用于治疗个体中的认知功能损伤或丧失。在一个具体的实施例中，依照本发明的抗体可用于降低或调控个体脑中 tau 蛋白的总水平。在一个具体的实施例中，依照本发明的抗体可用于降低或调控个体脑中磷酸化或高磷酸化 tau 蛋白的总水平。

64、在一些实施例中，依照本发明的抗体用于制备药物，该药物用于降低或调控个体脑中tau蛋白的总水平。在一些实施例中，依照本发明的抗体用于制备药物，该药物用于降低或调控个体脑中磷酸化或高磷酸化tau蛋白的水平。

65、在具体的实施例中，依照本文所述方法治疗的个体为人。在具体的实施例中，该抗体用于施用于人。在具体的实施例中，本文所述用途为用于治疗人。

66、本发明提供了一种制备抗tau的单克隆抗体或其功能片段的方法，包括在前面所述的细胞中表达该单克隆抗体或其功能片段，并且从该细胞中分离出该单克隆抗体或功能片段。

67、术语“抗 tau 单克隆抗体”和“结合 tau 的单克隆抗体”指能够以足够亲和力结合 tau，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向 tau 的抗体。

68、本文中的术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体 ( 例如双特异性抗体 )、和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原结合活性。

69、本发明提供了一种检测试剂盒，其包含前面所述的单克隆抗体或其功能片段，或前面所述的免疫偶联物，或前面所述的组合物。

70、进一步，所述检测试剂盒包括使用双抗体夹心elisa所需要的试剂。

71、进一步，所述检测试剂盒还包括其他单克隆抗体或其功能片段。

72、在某些具体的实施例中，所述其他单克隆抗体或其功能片段包括代号为23h9e4的单克隆抗体或其功能片段。