一种小分子灵芝均多糖及其制备方法和包含该小分子灵芝均多糖的灵芝露及其制备方法与流程

本公开涉及灵芝多糖的提取领域，具体涉及一种小分子灵芝均多糖及其制备方法和包含该小分子灵芝均多糖的灵芝露及其制备方法。

背景技术：

1、灵芝（ganoderma lucidum karst）是灵芝科（ganodermataceae）灵芝属（ganodermakarst.）真菌，其化学成分较为复杂，其中有效成分主要分为十大类，包括灵芝多糖、灵芝多肽、三萜类、16种氨基酸（其中含有七种人体必需氨基酸）、蛋白质、甾类、甘露醇、香豆精苷、生物碱、有机酸（主含延胡索酸），以及微量元素ge、p、fe、ca、mn、zn等。

2、其中，灵芝多糖是其主要的功能成分。据报道的灵芝多糖成分已超过200种，按单糖组成可分为均多糖和杂多糖，均多糖由单一葡萄糖或半乳糖构成；杂多糖空间结构复杂，由多种单糖以不同比例和不同糖苷键类型连接而成，其主链是葡萄糖、半乳糖和甘露糖为主的单糖构成，支链是以岩藻糖、木糖和阿拉伯糖等糖单元构成。灵芝多糖作为多功能的天然药物的主要活性成分，在抗肿瘤、抗炎、调节免疫、抗氧化、保护中枢神经系统、抗疲劳、保护肝脏、降血糖血脂等方面具有良好的生理功能。

3、灵芝多糖的提取方法有：传统提取法、复合酶提取法、快速溶剂萃取发、超临界流体辅助提取法、超滤法等。但是现有的灵芝多糖的提取方法中不仅灵芝多糖的得率有待提高，而灵芝多糖中含有很多大分子量的糖类物质，口服大分子量的糖类物质一般不易被人体吸收，从而影响灵芝多糖的生理功能。

技术实现思路

1、鉴于此，本公开提供一种小分子灵芝均多糖及其制备方法和包含该小分子灵芝均多糖的灵芝露及其制备方法。本公开不仅提高了灵芝多糖的提取率，而且降低灵芝多糖的分子量，以提高人体对灵芝多糖的吸收。

2、在本公开的第一方面，本公开提供的一种小分子灵芝均多糖的制备方法，其包括以下步骤：

3、s101、将灵芝子实体粉碎，得到灵芝子实体粉；

4、s102、所述灵芝子实体粉和水混合后，先经过第一酸提取、再经过第一双酶提取，过滤，得到第一滤渣和第一滤液；

5、s103、所述第一滤渣和乙醇水溶液混合后，先经过第二酸提取、再经过第二双酶提取，过滤，得到第二滤渣和第二滤液；

6、s104、所述第一滤液和所述第二滤液经过浓缩，得到灵芝多糖粗品；

7、s105、所述灵芝均多糖粗品和水混合后，依次经过酶裂解处理和纯化处理，得到小分子灵芝均多糖。

8、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s101中，所述灵芝子实体粉的细度大于等于10目；如20目、30目、40目、50目、60目、70目、80目、90目、100目等。

9、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s102中，所述灵芝子实体粉和所述水的重量比为1:(8-10)；如1:8.5、1:9、1:9.5等。

10、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s102中，所述第一酸提取的条件包括：ph值为6.0-6.9（如6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9等）、温度为55-65℃（如55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃等）、时间为3-5小时（如3小时、3.5小时、4小时、4.5小时、5小时等）。

11、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s102中，所述第一双酶提取所用酶包含重量比为(2-4):1的纤维素酶和木聚糖酶。

12、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s102中，所述第一双酶提取所用酶包含重量比为(2.5-3.5):1的纤维素酶和木聚糖酶。

13、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s102中，所述第一双酶提取所用酶包含重量比为3:1的纤维素酶和木聚糖酶。

14、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s102中，所述第一双酶提取所用酶的用量是所述灵芝子实体粉重量的1.5-5%（如2%、2.5%、3%、3.5%、4%或4.5%等）。

15、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s102中，所述第一双酶提取的条件包括：ph值为6.0-6.9（如6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9等），温度为55-65℃（如55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃等）、时间为7-10小时（如3小时、3.5小时、4小时、4.5小时、5小时等）。

16、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s102的具体操作步骤包括：所述灵芝子实体粉和水混合；在ph值为6.0-6.9、温度为55-65℃的条件下反应3-5小时；在ph值为6.0-6.9、温度为55-65℃的条件下加入纤维素酶和木聚糖酶并在ph值为6.0-6.9、温度为55-65℃下的条件下反应7-10小时，酶灭活，过滤，得到第一滤渣和第一滤液。

17、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s103中，所述乙醇水溶液的体积百分比浓度为(55-75)%；如56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%等。

18、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s103中，所述第一滤渣和所述乙醇水溶液的重量比为1:(3-5);如1:3.5、1:4、1:4.5等。

19、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s103中，所述第二酸提取的条件包括：ph值为6.0-6.9（如6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9等）、温度为55-65℃（如55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃等）、时间为3-5小时（如3小时、3.5小时、4小时、4.5小时、5小时等）。

20、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s103中，所述第二双酶提取所用酶包含重量比为(2-4):1的纤维素酶和木聚糖酶。

21、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s103中，所述第二双酶提取所用酶包含重量比为(2.5-3.5):1的纤维素酶和所述木聚糖酶。

22、在本公开的一些具体实施方案中，步骤s103中，所述第二双酶提取所用酶包含重量比为3:1的纤维素酶和所述木聚糖酶。

23、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s103中，所述第二双酶提取所用酶的用量是所述灵芝子实体粉重量的1.5-5%（如2%、2.5%、3%、3.5%、4%或4.5%等）。

24、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s103中，所述第二双酶提取的条件包括：ph值为6.0-7.0（如6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9等）、温度为55-65℃（如55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃等）、时间为7-10小时（如7.5小时、8小时、8.5小时、9小时、9.5小时）。

25、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s103的具体操作步骤包括：所述第一滤渣和乙醇水溶液混合；在ph值为6.0-6.9、温度为55-65℃的条件下反应3-5小时；在ph值为6.0-6.9、温度为55-65℃的条件下加入纤维素酶和木聚糖酶并在ph值为6.0-6.9、温度为55-65℃的条件下反应7-10小时，酶灭活，过滤，得到第二滤渣和第二滤液。

26、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s105中，所述单酶裂解所用酶为糖苷内切酶s。

27、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s105中，所述单酶裂解所用酶的用量是所述灵芝多糖粗品重量的1.5-2.5%（如1.8%、2%、或2.2%等）。

28、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s105中，所述单酶裂解处理的条件包括：ph值为7.0-8.0（如7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8或7.9等）、温度为30-40℃（如31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃或39℃等）、时间为1-3小时（如1.5小时、2小时或2.5小时等）。

29、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s105中，所述纯化处理选自离子交换树脂。

30、在本公开的一些具体实施方案中，所述离子交换树脂选自二乙氨基琼脂糖凝胶，如：deae-琼脂糖凝胶cl-6b（deae-sepharose cl-6b）。

31、在本公开的第二方面，本公开提供一种由第一方面所述制备方法制备得到的小分子灵芝均多糖。

32、在本公开的第三方面，本公开提供一种灵芝露，其包括第二方面所述的小分子灵芝均多糖。

33、在本公开的一些可选实施方案中，每100ml的所述灵芝露中含有30-60mg的所述小分子灵芝均多糖，如40mg、45mg、50mg、55mg等。

34、在本公开的第四方面，本公开提供一种灵芝露的制备方法，其包括以下步骤：

35、s201、将甘草、干姜、人参、大枣和水混合，升温至100℃并在100℃的条件下蒸煮6-12小时（如6.5小时、7小时、7.5小时、8小时、8.5小时、9小时、9.5小时、10小时、10.5小时、11小时、11.5小时等），过滤，得到第三滤渣和第三滤液；

36、s202、将所述第三滤渣和水混合，升温至100℃蒸煮3-5个小时（如3.5小时、4小时、4.5小时）后，趁热加入藤茶并在100℃的条件下搅拌5-15分钟（如10分钟等），过滤，得到第四滤渣和第四滤液；

37、s203、合并所述第三滤液和所述第四滤液，用水定容，得到饮液；

38、s204，将所述小分子灵芝均多糖加入到饮液中，得到所述灵芝露；

39、以重量份数计，甘草60-180份、干姜30-90份、人参15-45份、大枣15-45份、藤茶10-30份。

40、在本公开的一些可选实施方案中，以重量份数计，甘草120份、干姜60份、人参30份、大枣30份、藤茶20份。

41、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s201中所述水的用量是所述甘草、所述干姜、所述人参和所所大枣总重量的6-15倍（如7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍等）。

42、在本公开的一些可选实施方案中，步骤s202中所述水的用量是所述甘草、所述干姜、所述人参和所述大枣总重量的4-10倍（如4.5倍、5倍、5.5倍、6倍、6.5倍、6.5倍、7倍、7.5倍、8倍、8.5倍、9倍、9.5倍、10倍、10.5倍、11倍、11.5倍等）。

43、综上所述，本公开具有以下有益效果：

44、本公开不仅提高了灵芝均多糖的提取率，而且大大降低了灵芝多糖的分子量。通过药代动力学可知，灵芝均多糖的分子量越小，灵芝均多糖在体内的吸收率越高。

45、实施方式

46、以下结合实施例对本公开作进一步详细说明。

47、一种小分子灵芝均多糖的制备方法，包括以下步骤：

48、s101、将灵芝子实体粉碎，过20目筛，得到灵芝子实体粉；

49、s102、将重量比为1:9的灵芝子实体粉和水混合；用质量百分比浓度为15%的盐酸水溶液调节ph值=6.5，升温至60℃并在ph值=6.5、温度为60℃的条件下反应4小时；加入纤维素酶和木聚糖酶（其中，纤维素酶和木聚糖酶的总用量是灵芝子实体粉重量的2%），并在ph值为6.5、温度为60℃的条件下反应8小时，升温至95℃进行酶灭活；降温至37℃，用饱和氢氧化钠水溶液调节ph值为7.4，加入糖苷内切酶s并在ph值为7.4、温度为37℃的条件下反应2小时，抽滤，得到第一滤渣和第一滤液；

50、s103、将重量比为1:4的第一滤渣和体积百分比浓度为65%的乙醇水溶液混合；用质量百分比浓度为15%的盐酸水溶液调节ph值=6.5，升温至60℃并在ph值=6.5、温度为60℃的条件下反应4小时；加入纤维素酶和木聚糖酶（其中，纤维素酶和木聚糖酶的总用量是灵芝子实体粉重量的2%），并在ph值为6.5、温度为60℃的条件下反应8小时，升温至95℃进行酶灭活,抽滤，得到第二滤渣和第二滤液；

51、s104、合并所述第一滤液和所述第二滤液，浓缩，得到灵芝均多糖粗品；

52、s105、所述灵芝均多糖粗品和水混合后，降温至37℃，用饱和氢氧化钠水溶液调节ph值为7.4，加入糖苷内切酶s（其中，糖苷内切酶s的用量是灵芝均多糖粗品重量的2%），并在ph值为7.4、温度为37℃的条件下反应2小时，再升温至100℃并在100℃下酶灭活20分钟，过滤去除杂质，得到滤液；滤液经过离子交换树脂（deae-琼脂糖凝胶cl-6b），洗脱得到清液，清液经过浓缩、干燥，得到小分子灵芝均多糖。

53、计算小分子灵芝均多糖的提取率，其计算公式如下式所示：

54、

55、并且，采用高效体积排阻色谱分析检测小分子灵芝均多糖的分子量，计算分子量≤10000的灵芝均多糖在所提取得到的灵芝均多糖中所占的比重（单位：wt%），以及分子量＞10000的灵芝均多糖在所提取得到的灵芝均多糖中所占的比重（单位：wt%）。

56、实施例1-4

57、实施例1-4的灵芝均多糖均采用上述制备方法制备得到；其中，实施例1-4区别仅在于，步骤s102中第一双酶提取所用酶的总用量相同，但是第一双酶提取中纤维素酶和木聚糖酶的重量比不同；步骤s103中第二双酶提取所用酶的总用量相同，但是第二双酶提取中纤维素酶、木聚糖酶的重量比不同。

58、其中，实施例1-4在步骤s102中，第一双酶提取中纤维素酶和木聚糖酶的用量，第一单酶提取中糖苷内切酶s的用量；在步骤s103中，第二双酶提取中纤维素酶和木聚糖酶的用量，第二单酶提取中糖苷内切酶s的用量；灵芝均多糖的提取量、提取率以及分子量的检测结果如表1所示。

59、

60、由表1可以看出，本公开不仅提高了小分子灵芝均多糖的提取率，而且大大降低了灵芝多糖的分子量。通过药代动力学可知，小分子灵芝均多糖的分子量越小，小分子灵芝均多糖在体内的吸收率越高。

61、通过比较实施例1-4和对比例1-2可知，在步骤s102和步骤s103中纤维素酶的用量和木聚糖酶的用量的重量比主要影响小分子灵芝均多糖的提取率。其中，纤维素酶和木聚糖酶的重量比在(2-4):1范围内，小分子灵芝均多糖的提取率相对较高。尤其是纤维素酶和木聚糖酶的重量比为3:1，小分子灵芝均多糖的提取率可达3.78%。

62、通过比较实施例3和对比例3-4可知，在步骤s102和步骤s103中纤维素酶和木聚糖酶复配不仅显著提高小分子灵芝均多糖的提取率，而且大大降低小分子灵芝均多糖的分子量。

63、对比例5

64、与实施例3相比，对比例5的区别仅在于，未进行单酶裂解处理。其中，实施例3和对比例5小分子灵芝均多糖的提取量、提取率以及检测结果如表2所示。

65、

66、由表2可以看出，在步骤s105中是否进行单酶裂解处理对小分子灵芝均多糖的提取率影响不大，但是主要影响小分子灵芝均多糖的分子量。

67、一种灵芝露的制备方法，包括以下步骤：

68、s201、将甘草120g、干姜60g、人参30g、大枣30g和水1920g混合，升温至100℃并在100℃的条件下蒸煮9小时，过滤，得到第三滤渣和第三滤液；

69、s202、将所述第三滤渣和水720g混合，升温至100℃后蒸煮3小时，趁热再加入藤茶20g搅拌5分钟，过滤，得到第四滤渣和第四滤液；

70、s203、合并所述第三滤液和所述第四滤液，用水定容至5000毫升得到饮液；

71、s204，将所述小分子灵芝均多糖加入到饮液中，得到所述灵芝露，其中，每100ml所述饮液加入30-60mg的灵芝均多糖。具体根据需要，向饮液中添加30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的小分子灵芝均多糖。

72、可以理解的是，以上实施方式仅仅是为了说明本公开的原理而采用的示例性实施方式，然而本公开并不局限于此。对于本领域内的普通技术人员而言，在不脱离本公开的核心技术和实质的情况下，可以做出各种变型和改进，这些变型和改进也视为本公开的保护范围。