1.一种高热稳定性的酮泛解酸羟甲基转移酶突变体,其特征在于,所述酮泛解酸羟甲基转移酶突变体是将seq id no.3所示氨基酸序列第98位、第106位或第247位进行单突变或多突变获得的。
2.如权利要求1所述的酮泛解酸羟甲基转移酶突变体,其特征在于,所述酮泛解酸羟甲基转移酶突变体是seq id no.3所示氨基酸序列分别突变为下列之一:(1)第98位谷氨酸突变为苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺;(2)第106位谷氨酸突变为丝氨酸、亮氨酸;(3)第247位丝氨酸突变为异亮氨酸或天冬氨酸。
3.一种权利要求1所述酮泛解酸羟甲基转移酶突变体在催化α-酮异戊酸制备酮泛解酸中的应用。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述应用为:以含酮泛解酸羟甲基转移酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体超声破碎提取的纯酶液为催化剂,以α-酮异戊酸为底物,加入硫酸镁、甲醛、四氢叶酸,以ph8-10.0的缓冲液为反应介质构成转化体系,在30-40℃、500-1000rpm下进行转化反应,反应完全后,将反应液分离纯化,获得酮泛解酸。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述转化体系中,湿菌体加入终浓度为50-150g/l;纯酶液以蛋白含量计为0.01-0.1mg/ml;底物加入终浓度为5-20mm;硫酸镁加入终浓度为1-10mm;甲醛加入终浓度为1-10mm;四氢叶酸终浓度为0.01-0.1mm。
6.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述反应介质为ph 10.0、10mm的gly-naoh缓冲液。
7.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述应用按如下步骤进行:先将甲醛、四氢叶酸加入缓冲液中,在30-40℃孵育15min来制备n5,n10-亚甲基四氢叶酸,再加入硫酸镁、底物和催化剂进行转化反应。
8.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述催化剂按如下方法制备: